Общая численность бактерий в различных природных озерах и водохранилищах

Трофность водоема	Общее число бактерий (*10^3кл/мл)
Олиготрофные озера Мезотрофные озера Эвтрофные озера Эвтрофные водохранилища Дистрофные водохранилища	50-340 450-1400 2200-12300 1000-57900 430-2300

Одним из наиболее распространенных методов учета общей численности бактерий является метод прямого счета на стеклах по С.Н. Виноградскому. На предметные стекла по трафарету с помощью стеклографа наносят по 2 квадрата с известной стороной. В первый квадрат вносят стерильной пипеткой одну каплю гомогенизированной пробы воды известного объема, с помощью стерильной микробиологической петли распределяют содержимое капли по всей площади квадрата. Во второй квадрат вносят 2 капли гомогенизированной пробы аналогичным образом, записывая объемы внесенных капель. Полученные препараты высушивают при комнатной температуре, фиксируют и окрашивают фуксином по стандартной методике. Препараты просматриваются под микроскопом под иммерсионным маслом (увеличение 10*1,5*100), в окуляры встраивают сеточку Гаженко. Счет ведут в поле зрения, состоящем из определенного количества малых квадратиков сеточки (обычно, 9). Ведут подсчет микробных клеток в каждом поле зрения, двигаясь по препарату по диагонали. Подсчет клеток продолжается, пока сумма посчитанных клеток не превысит 1000. Затем рассчитывают общую численность бактерий (N_общ.) для каждой повторности (N_i.) по формуле 1.

(1)

где S – общая площадь окрашенного препарата (мм²), ∑n_i – сумма посчитанных под микроскопом микробных клеток z – количество просмотренных полей зрения, s – площадь одного поля зрения (мм²), v – объем образца воды, затраченного на приготовление препарата (мл).

Для определения возможности усреднения полученных величин N_i. Рассчитывают критерий χ ² для определения значимости различий между выборочными значениям.

Всех гетеротрофных микроорганизмов можно разделить на две группы: копиотрофы – микроорганизмы, нуждающиеся в относительно высоких концентрациях органического вещества, и олиготрофы, способные к росту при пониженном содержании органического вещества. Истинно водными микроорганизмами являются олиготрофы. Наличие большого количества копиотрофов может говорить о загрязнении водоема органическим веществом (бытовые, сельскохозяйственные стоки).

Для пределения количества копиотрофов и олиготрофов производят подсчет колоний, выросших на селективных питательных средах: для выращивания копиотрофов используют рыбо-пептонный агар (РПА), для выращивания олиготрофов – РПА, разбавленный в 10 раз (РПА 1:10). На каждую питательную среду производят посев из трех разведений исходной пробы воды: 1:10 (10^-1), 1:100 (10^-2), 1:1000 (10^-3). Для вычисления численности бактерий берут те разведения, в которых количество выросших колоний составляет 100-300 штук. Возможность усреднения выборочных значений используют критерий χ ². Вычисление численности бактерий определенной группы производят по формуле:

(2)

где – среднее число колоний на чашках Петри, засеянных из одного разведения, r – коэффициент разведения, v – объем инокулята (мл).

На основании полученных значений численности копиотрофов (N_коп.) и олиготрофов (N_олиг.) рассчитывают коэффициент трофности по формуле:

К_троф = N_олиг./ N_коп. (3)

Чем болше коэффициент трофности водоема, тем меньше выражено в нем загрязнение органическим веществом. Для особо чистых вод К_троф равен нескольким десяткам, для загрязненных близок к единице, при К_троф <4 можно предполагать наличие загрязнения водоема органическим веществом.

На основании общей численности (N_общ.) и численности копиотрофов (N_коп.) можно рассчитать коэффициент сапробности:

К_сапр. = (N_коп../ N_общ..) 100 [%] (4)

Коэффициент сапробности является стандартной характеристикой санитарного состояния водоема (табл. 2) Чем ниже К_сапр, тем чище водоем. В практически чистых водах копиотрофы составляют 10^-3-10^-5% от общей численности бактерий.

Таблица 2

Дата добавления: 2015-10-21