Метод лунок

ПРОБИОТИКИ ОКАЗЫВАЮТ положительное функциональное влияние на здоровье человека и животных. Антибиотическая активность ПРОБИОТИЧЕСКИХ КУЛЬТУР – ОДИН ИЗ ВАЖНЫХ МЕХАНИЗМОВ ЭТОГО ВЛИЯНИЯ.

Под антибиотической активностью понимаются антагонистические свойства культур по отношению к патогенным и условно-патогенным микроорганизмам, реализуемые за счет метаболитов – продуктов жизнедеятельности микрооганизмов с пробиотическим эффектом: органических кислот, в том числе короткоцепочных жирных кислот КЦЖК, углекислого газа, перекиси водорода, диацетила, бактериоцинов и др.

СУЩНОСТЬ

МЕТОДОВ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТАГОНИСТИЧЕСКИХ

Свойств пробиотических культур

ЗАКЛЮЧАЕТСЯ в установлении и количественной оценке

задержки роста тест-штаммов патогенных и условно-патогенных микроорганизмов

при взаимодействии их с пробиотический культурой.

Микробиологический бокс и работа в нём должны соответствовать требованиям действующих санитарных правил, регламентирующих безопасность работ с микроорганизмами III - IV групп патогенности. (При видеосъемке учебного фильма патогенные штаммы НЕ ИСПОЛЬЗУЮТСЯ).

Существуют три основных метода и множество модификаций каждого методов in vitro (от лат. «в искусственных условиях»):

1. Метод отсроченного антагонизма (метод перпендикулярных штрихов).

2. Метод лунок (блоков, модификации капельного метода, модификация агаровых слоёв).

3. Совместного культивирования (методы тестирования в жидких питательных средах, развивающихся смешанных популяций, экспресс-тестирование, основанное на ингибировании биолюминесценции у тест-культуры).

Метод перпендикулярных штрихов

Питательные среды. Для бифидобактерий среда БС; для лактобацилл - МRS

Посев исследуемой культуры в виде штриха по диаметру чашки Петри с оптимальной питательной средой.

Условия культивирования: В ТЕРМОСТАТЕ ПРИ ОПТИМАЛЬНОЙ ДЛЯ ДАННОЙ КУЛЬТУРЫ ТЕМПЕРАТУРЕ, время культивирования ДЛЯ ДОСТИЖЕНИЯ ФАЗЫ ЛОГАРИФМИЧЕСКОГО РОСТА ДЛЯ БОЛЬШИНСТВА КУЛЬТУР 24 ч. Для бифидобактерий СОЗДАЮТ анаэробные условия с использованием анаэростата и газогенераторных пакетов GasPak Plus (BBL(R), USA).

ЗАТЕМ

Перпендикулярно посеву пробиотической культуры делаются штрихи ТЕСТ-ШТАММОВ ПАТОГЕННЫХ И УСЛОВНО ПАТОГЕННЫХ микроорганизмов.

Культивирование при 37 С, 24 часа. Учет результатов: измеряют зоны задержки роста тест-штамов в мм, иногда рассчитывают индекс антибиотической активности как их среднее значение.

Метод лунок

Подготовка газона патогенной или условно-патогенной тест-штамма:

На плотной питательной среде шпателем Дригальского или изогнутой пастеровской пипеткой для аэробов, например Salmonella - поверхностным посевом,

ИЛИ:

смешивая МRS при 50-55˚ С и культуру в экспоненциальной фазе роста на жидкой питательной среде для факультативных анаэробов, например E. сoli - глубинным посевом,

готовим газон патогенной тест-штамма.

ЗАТЕМ

В газоне вырезаем специальным устройством лунки, которые заполняем пробиотической культурой на жидкой питательной среде в экспоненциальной фазе роста.

Культивирование при температуре, оптимальной для патогенной культуры.

Зону задержки роста и индекс антибиотической активности определяют аналогично, как в методе перпендикулярных штрихов.

Дата добавления: 2015-09-03