Методические указания. § I. Макроскопическое изучение культур стафилококков на кровяном МПА

§ I. Макроскопическое изучение культур стафилококков на кровяном МПА. Зарисовать картину гемолиза.

§ 2. Демонстрация инструментария, посуды, разбор правил пе­ресылки материала для исследования в бактериологические лаборато­рии.

§ 3. Вскрытие мыши. Инструменты стерилизуются кипячением. Труп мыши фиксируется на лотке с застывшим парафином брюшком кверху и дезинфицируется путем обжигания шерсти и кожи в области предполагаемых разрезов.

Делается продольный разрез кожи от лобка до нижней челюсти, а затем в стороны конечностей. После этого отсепаровывается кожа и изучается состояние подкожной клетчатки, лимфатических узлов, наличие кровоизлияний с помощью пинцета приподнимают слегка брюшную стенку и делают на ней надрез, после чего осторожно, чтобы не повредить кишечника, вскрывают брюшную полость. Изучают состояние внутренних органов брюшной полости, наличие в ней экссудата.

Печень, селезенку, почки стерильным пинцетом извлекают и помещают в стерильную чашку Петри для последующего микроскопического исследования. Далее вскрывается грудная полость, для чего пин цетом приподнимают грудину, рассекают диафрагму и с помощью ножниц отсекают грудину вместе с участком ребер таким образом, чтобы стали доступны легкие и сердце.

Раскаленным пинцетом прижигают стенку сердца (она при этом фиксируется с помощью другого пинцета) и кончиком пастеровской пипетки прокалывают стенку сердца. Отсасывают из сердца кровь и тут же делают посев в МПБ и на косячок МПА. Изучают состояние легких, обращают внимание на наличие экссудата в плевральной и околосердечной полостях. Для выделения чистой культуры возбудителя делается по­сев также из селезенки и печени (если нужно, то из других органов) на МПБ и МПА.

Мазки-отпечатки или препараты-оттиски готовят на одном стекле по определенной схеме:

из печени - № I;

из легких - № 2;

из селезенки - № 3;

из лимфатического узла - №.4;

на конце стекла делают один сплошной мазок из крови сердца.

Приготовить препараты-оттиски из органов мыши: печени, легких, селезенки, лимфатического узла, крови. Окрасить препарат-оттиск по способу Ионэ для обнаружения капсул. Отметить, соответствуют ли об­наруживаемые в препаратах микроорганизмы тем, которые использова­лись для заражения мыши. Составить протокол вскрытия мыши с указанием в нем обнаружен­ных изменений в органах трупа. Сделать необходимые зарисовки.

§ 4. а)Методика постановки опыта фагоцитоза: белой мыши внут-рибрюшинно вводят 1-2 мл стериального МПБ раздражение которым брюшины приводит к скоплению в брюшной полости большого количества лейкоцитов. Через 4-5 часов в брюшную полость мыши вводят шприцем или пастеровской пипеткой 0,5-1 мл густой взвеси суточной культуры стафилококка. Через 8-10 минут капилляром пастеровской пипетки прокалывают брюшную стенку и из брюшной полости набирают экссудат. Из экссудата готовят препараты-мазки, подсушивают, фиксируют в смеси Никифорова и окрашивают метиленовым синим. При микроскопии в мазке видны бледно-голубые лейкоциты, в их цитоплазме - синие стафилокок­ки.

б) промикроскопировать готовые препараты-мазки гонококков из гнойных выделений больного. Зарисовать картину фагоцитоза микроорга­низмов.

§ 5. Опыт действия лизоцима на Micrococcus lysodeikticus.

Для опыта необходимо иметь:

1.Раствор яичного белка в разведении 1:25.

2.Культуру M. lysodeikticus на косячке МПА.

3.Физиологический раствор во флаконе.

4.Пипетки емкостью в I и 5 мл.

5.Две агглютинационные пробирки.

Порядок работы

1.Пометить карандашом по стеклу опытную и контрольную пробирки.

2.В контрольную пробирку налить I мл физиологического раствора.

3.В опытную пробирку налить I мл раствора яичного белка в ис­одном разведении.

4.Приготовить бактериальную взвесь, для чего в пробирку скультурой М. M. lysodeikticus внести 5 мл физиологического раствора и, вращая пробирку между ладонями, смыть культуру.

5.В опытную и контрольную пробирки добавить по I мл полученной бактериальной взвеси и поставить пробирки в термостат на 1 час при 37⁰.

6.Через час зарегистрировать результаты опыта, отмечая полное растворение микробов+ + + +, частичное + + и отсутствие лизиса знаком —.

Дата добавления: 2015-12-07