VI. Резка

Резку осуществляют на приборе под названием микротом.

Основной элемент микротома – стальной нож.

Микротом может находиться внутри прибора, который поддерживает постоянную t ≈ - 18-20⁰. Он носит название криостат. Этот прибор широко используется для экспресс–диагностики во время хирургических операций, для научных исследований, для гистохимических методов исследования, так как этапы фиксации и уплотнения осуществляются одновременно благодаря замораживанию при низких температурах и существенно экономят время исследования.

После резки парафиновый срез помещают в каплю воды на предметное стекло и слегка подогревают на термостолике, чтобы срез расправился. Далее оставляют стекло до полного высыхания воды.

VII. Депарафинизация.

Прежде чем окрашивать гистологический срез, необходимо освободиться от парафина и наводнить препарат, так как обычные гистологические красители водные. Препарат на предметном стекле погружают в следующие растворы:

ксилол I → ксилол II → 96⁰ I → 96⁰ II → 70⁰ → Н₂О

VIII. Окрашивание

Препарат окрашивают сначала ядерным красителем, затем цитоплазматическим.

Виды красителей:

А) ядерные (основные)

· гематоксилин (окрашивает ядро в синий цвет)

· железный гематоксилин

· азур II (в фиолетовый цвет)

· кармин (в красный цвет)

· сафранин (в красный цвет)

· метиловый синий (в синий цвет)

· толуидиновый синий (в синий цвет)

· тиониновый синий (в синий цвет)

Б) цитоплазматические (кислые)

· эозин – окрашивает цитоплазму в розовый цвет

· эритрозин

· оранжевый «G»

· кислый фуксин – в красный

· пикриновая кислота – в желтый

· конго красный- в красный

В) специальные

· судан III – окраска липидов и жиров в оранжевый цвет

· осмиевая кислота – окраска липидов и жиров в черный цвет

· орсеин – окраска эластических волокон в коричневый цвет

· азотнокислое серебро – импрегнация нервных элементов в темно-коричневый цвет

Структуры клетки, окрашиваемые кислыми красителями называются оксифильными (ацидофильными ) – окрашивание в розовый цвет.

Структуры клетки, окрашиваемые основными красителями называются базофильными – окрашивание в синий цвет.

Структуры клетки, окрашиваемые как основными, так и кислыми красителями одновременно называются нейтрофильными – окрашивание в фиолетовый цвет.

IX. Просветление осуществляют в следующих растворах:

Н₂О → 70⁰ → 96⁰ I→ 96⁰ II→ ксилолI → ксилол I

X. Заключение в бальзам.

Используют канадский бальзам, так как его коэффициент преломления равен коэффициенту преломления стекла. После нанесения бальзама срез покрывают покровным стеклом. После высушивания гистологический препарат готов для проведения гистологического анализа.

Дата добавления: 2015-07-08