Отсев характерных колоний на плотную питательную среду с целью получения и накопления изолированных колоний. Чашки инкубируют в анаэробных условиях.

Оценка результатов посевов:	Микроскопия выделенной культуры, окраска по Граму, х100
На среде СКС___________________________.   На кровяном агаре колони:________________.	Результат:

3 этап. Характерные колонии отсевают на соответствующие питательные среды для выделения и накопления чистой культуры.

4 этап. Полученная чистая культура подлежит идентификации.

Свойства и методы, позволяющие определить видовую принадлежность. Идентификацию чистых культур (до вида микроор­ганизма) проводят с учётом морфологических, тинкториальных, культуральных, биохимичес­ких, токсигенных и антигенных свойств микроорганизма. Методы идентификации: культуральная диагностика, РИФ, ПЦР, биохимический метод («пестрый ряд»), биологический (РН) и др.

Оценка посева культуры на «пестрый ряд»  

Обнаружение токсина. Тест на лецитиназную активность  

        Оценка: каталаза (-), разжижение желатина (+), индол (-), глюкоза (+), лактоза (+), сахароза (+), мальтоза (+), пептонизация молока (+), H₂S(+), подвижность (-)  

1. Образец

2,3 Контроль(-)

Проведите идентификацию выделенной культуры по таблице (ниже). Результат________________

5 этап. Оценка результата реакции нейтрализации (РН) на белых мышах с центрифугатом культуральной жидкости и противогангренозными антитоксическими сыворотками.

Для определения токсигенности культуры путем постановки РН смесь центрифугата исследуемой культуры с антитоксическими сыворотками вводят подкожно белым мышам. В случае нейтрализации токсина животные остаются живыми; при отрицательной РН – животные погибают.

№	Введено животным	Результат
культуральная жидкость	антитоксическая сыворотка
1.	+	противоперфрингенс	Мыши живы
2.	+	противонови	Мыши пали
3.	+	противосептикум	Мыши пали
4.	+	противогистолитикум	Мыши пали
5.	+	противосорделлии	Мыши пали
6.	+	--	Мыши пали

Методы, среды и приборы для создания анаэробиоза

Метод Фортнера. Посевы проводят на чашку Петри с толстым слоем среды, разделённым пополам узкой канавкой, вырезанной в агаре. На одну половину засевают культуру аэроб­ных бактерий, на другую — анаэробных. Края чашки заливают парафином и инкубируют в термостате. Первоначально наблюдают рост аэробов, а затем (после поглощения кислоро­да) — рост анаэробов.

Метод Биттнера. К крышке чашки Петри с посевом исследуемого материала или выделенной культуры анаэробов прикрепляют пакет из фильтровальной бумаги, содержащей пирогаллол, К₂ СО₃ и тальк. Чашку герметизируют при помощи парафина или скотча. Содержимое пакета увлажняется за счет образующегося конденсата и ингредиенты вступают в реакцию, которая сопровождается поглощением О₂ и выделением СО₂.

Газ-пак (Generbag anaer). Система Generbag anaer состоит из воздухонепроницаемых пакетов, изготовленных из прозрачной пластмассы и генераторов, содержащих смесь веществ, поглощающих кислород.

Последовательность работы: вынуть генератор из пакета, поместить в нижнюю часть воздухонепроницаемого пакета, затем поместить чашки (или пробирки) с посевами и с помощью специальной скрепки закрыть пакет. Инкубация при 37⁰.

Среда Китта-Тароцци. Содержит мясо-пептонный бульон (МПБ), 0,5% глюкозы и 0,15% агара. На дно пробирки для адсорбции О₂ помещают кусочки вареной печени или фарша слоем 1-1,5 см и заливают 6-7 мл среды. Среду перед посевом регенерируют (прогревают 15-20 мин на водяной бане для удаления воздуха, а затем быстро охлаждают). После посева среду заливают вазелиновым маслом и помещают в термостат.

Полужидкий сахарный агар (высокий столбик). В пробирку с 6-7 мл расплавленного и охлажденного до 40-45⁰ полужидкого питательного агара, содержащего 0,5-1% глюкозы, вносят исследуемый материал и перемешивают. Посевы помещают в термостат.

Среда для контроля стерильности (СКС). Рост многих анаэробных микроорганизмов возможен только на средах с низким окислительно-восстановительным потенциалом. Поэтому в среды добавляют восстановители, например, тиогликолевую кислоту или ее натриевую соль, цистеин, аскорбиновую кислоту. Функции восстановителей выполняют и другие компоненты среды: глюкоза, пептон. СКС содержит питательный бульон, витаминный препарат ЭКД, NaCl, Na₂CO_3, глюкозу, тиогликолят натрия, цистеин, агар (0,75%). Среду разливают в пробирки по 6-7 мл.

Посевы культивируют в термостате.

Биопрепараты

Наименование	Что содержит	Для чего применяется	Как применяется
Противогангренозные сыворотки диагностические и лечебно-профилактические	представляет собой содержащую специфические иммуноглобулины белковую фракцию сыворотки крови лошадей, гипериммунизированных анатоксинами (токсинами) трех основных возбудителей газовой анаэробной инфекции (кл. перфрингенс типа А, кл. Новии (эдематиенс), кл. септикум)	Профилактика и лечение гангрены	Профилактическая доза противогангренозной сыворотки составляет 30 000 МЕ (включает по 10 000 МЕ сыворотки активной в отношении токсинов Cl. perfringens, Cl. novyi, Cl. septicum). Лечебная доза суммарно составляет 150 000 МЕ (включает по 50 000 МЕ сыворотки активной в отношении токсинов Cl. perfringens, Cl. novyi, Cl. septicum). Сыворотку вводят медленно в/м, желательно в смеси со стерильным, подогретым до температуры тела физиологическим раствором из расчета 100-400 мл на 100 мл сыворотки. Перед введением основной дозы следует обязательно провести внутрикожную пробу.
Противостолбнячная сыворотка	представляет собой содержащую специфические иммуноглобулины белковую фракцию сыворотки крови гипериммунизированных столбнячным анатоксином и токсином лошадей. Содержит анатоксины, нейтрализующие столбнячный токсин	Профилактика и лечение столбняка
АКДС (адсорбированная коклюшно-дифтерийно-столбнячная вакцина)	убитые клетки возбудителя коклюша, дифтерийный и столбнячный анатоксины	Профилактика коклюша, дифтерии и столбняка	вводят внутримышечно в верхний внешний квадрант ягодицы или передне-внешнюю область бедра в дозе 0,5 мл (разовая доза). Перед прививкой ампулу необходимо тщательно встряхнуть до получения гомогенной суспензии.
АДС, АДС-М. (Адсорбированный дифтерийно-столбнячный анатоксин)	Препарат содержит в 1 мл 60 флокулирующих единиц (ЛФ) дифтерийного и 20 антитоксинсвязующих единиц (ЕС) столбнячного анатоксинов.	Профилактика дифтерии и столбняка у детей.

Морфологические свойства микроорганизмов рода Clostridium

Микроскопия чистой культуры C.tetani, окраска по Граму, х100	СЭМ. Морфология C.tetani, х15000
Микроскопия чистой культуры C.botulinum, окраска по Граму, х100	СЭМ. Морфология C.botulinum, х17000

Морфологические свойства анаэробных микроорганизмов рода Lactobacillus и рода Bifidobacterium

Дата добавления: 2015-07-08