Фазмиды – это молекулярные векторы, являющиеся искусственными гибридами между фагом и плазмидой. После встройки чужДНК они могут в одних случаях развиваться как фаги, а в других – как плазмиды.
Рассмотрим этот тип векторов на примере фазмиды λpMYF131. Вектор впервые создан и описан в 1987 г. ДНК имеет размер 33.3 т.п.н., что составляет 68% от величины ДНК фага λ «дикого типа». ДНК имеет все гены, необходимыя для литического развития фага λ, но лизис бактерий не вызывает, т.к. из-за малой величины не способна упаковываться в капсид. В клетках бактерии фазмида поддерживается как плазмида. Встройка же чужДНК увеличивает размер фазмиды до такой длины, что дает возможность упаковки в капсид и развития как недефектный фаг. Преимущество фазмид перед фаговых векторов замещения в том. что нет необходимости проводить процедуру удаления внутреннего «балластного» фрагмента ДНК.
После лигазной реакции с чужДНК фазмида не способна упаковывать в капсид свои димерные и тем более мультимерные формы из-за их значительного размера.
a) если необходимо клонировать фазмиду как плазмиду (заставить ее реплицироваться), то ее вводят в клетки E. coli, несущие ген-репрессор развития фага, кодирующий белок pI. Данный репрессор подавляет экспрессию фаговых генов. При этом будет синтезироваться продукт гена устойчивости к антибиотику, несомого фазмидой.
б) если необходимо получить фазмиду в фаговой форме, то применяют термоиндукцию ее литического развития – гены фага, находящиеся на фазмиде, начинают «работать» и лизируют клетку.
Дата добавления: 2015-08-27; просмотров: 283 | Нарушение авторских прав
| <== предыдущая страница | | | следующая страница ==> |
| V. Космиды | | | VII. Фагмиды |