Тема 6 . Дыхание растений

Лабораторная работа № 14. ОБНАРУЖЕНИЕ ФЕРМЕНТА ПЕРОКСИДАЗЫ

В РАСТИТЕЛЬНЫХ ТКАНЯХ

Цель: обнаружить активность пероксидазы в растительных тканях.

Задачи: определить активность фермента пероксидазы при окислении субстрата кислородом воздуха и кислородом перекиси; выявить зависимость активности пероксидазы от вида растения и состояния тканей одного растения.

Объекты: листья разного возраста; клубни картофеля разных сортов.

Материалы и оборудование: 0,3 и 3 % Н₂О₂, свежеприготовленный 1,5 % раствор бензидина, 1 % гидрохинон; пипетки на 1, 2 и 5 мл, штатив с пробирками, колбы, мерные цилиндры на 25 мл, фарфоровые ступки, лезвие, салфетки, марля, нож.

Краткие сведения

Фермент пероксидаза относится к классу оксидоредуктаз, катализирует окисление фенольных соединений кислородом воздуха или перекиси. Фенолы, окисляясь, превращаются в хиноны:

пероксидаза

2АН₂ + О₂ 2А + 2Н₂О;

фенолы хиноны

пероксидаза

АН₂ + Н₂О₂ А + 2Н₂О.

фенолы хиноны

Пероксидаза (как и каталаза) – двухкомпонентный фермент, простетическая группа которого содержит железо, соединенное с остатками четырех пиррольных колец в виде гематина. Гематин пероксидазы и каталазы имеет одинаковое строение, а различия в каталитических свойствах ферментов объясняются разными свойствами белков, связанных в этих ферментах с одной и той же простетической группой.

Пероксидаза обнаружена во всех органоидах клетки, а также в цитоплазме. Биологическое значение пероксидазы состоит в утилизации перекиси водорода, образующейся при окислении органических веществ.

Ход работы

Определение активности пероксидазы при окислении гидрохинона кислородом воздуха и перекиси. Очищенный клубень картофеля натереть на терке, отжать сок через марлю и собрать в колбу. Фильтрат содержит фермент пероксидазу.

Пронумеровав три пробирки, внести в каждую по 5 мл гидрохинона (фенольное соединение (ФС)) и затем добавить по вариантам:

в 1-ю пробирку – 1 мл 3 % Н₂О₂ и 1 мл картофельного сока;

во 2-ю – 1 мл 3 % Н₂О₂;

в 3-ю – 1 мл картофельного сока.

Окисление гидрохинона до хинона проявляется через побурение раствора. Отметить интенсивность побурения в каждой пробирке.

Оформление результатов

Результаты наблюдений занести в табл. 29.

Таблица 29

Дата добавления: 2015-07-21