Практическая часть. Задачанастоящей работы состоит в практическом овладении навыками регистрации

Задача настоящей работы состоит в практическом овладении навыками регистрации спектров поглощения светорассеивающих объектов (на примере эритроцитарных суспензий) и освоении методов внесения поправок на искажения, вносимые в результаты спектрофотометрии светорассеиванием.

Приборы и принадлежности:

1. Спектрофотометр СФ-46
2. Пластиковые кюветы толщиной 10 мм – 2 шт.
3. Эритроциты кролика
4. Физиологический раствор (0,9% водный раствор NaCl)

Задание. Регистрация спектров поглощения эритроцитарной суспензии и водного раствора гемоглобина

1. Включить спектрофотометр СФ-46. Порядок работы на этом приборе описан в соответствующем приложении (см.).

2. Приготовить суспензию эритроцитов кролика в физиологическом растворе с такой концентрацией оксигемоглобина, чтобы ее оптическая плотность в кювете толщиной 1 см при 415 нм и расположении кюветы около входной апертуры кюветного отделения (ближе к источнику излучения) не превышала 1,0 ¸1,2.

3. Приготовить раствор оксигемоглобина в дистиллированной воде точно такой же концентрации.

4. Проверить, закрыта ли шторка кюветного отделения. Открыть крышку кюветного отделения. Установить кюветы с эритроцитарной суспензией и физиологическим раствором (контрольный образец) в кюветное отделение спектрофотометра СФ-46 таким образом, чтобы они располагались максимально далеко от выходной апертуры кюветного отделения (выходная апертура расположена в кюветном отделении справа). Закрыть крышку кюветного отделения.

5. Измерить пошагово спектр поглощения суспензии эритроцитов в спектральном диапазоне 400-700 нм. Шаг измерений: в области 400-440 нм – 2 нм; в области 440-520 нм – 5 нм; в области 510-590 нм – 2 нм; 590-700 нм – 10 нм.

6. Закрыть шторку кюветного отделения. Открыть его крышку и переместить кюветы с эритроцитарной суспензией и физиологическим раствором максимально близко к выходной апертуре.

7. Повторить измерения спектра поглощения.

8. Заменить эритроцитарную суспензию в кювете с образцом на раствор оксигемоглобина той же концентрации. Установить кювету с раствором оксигемоглобина в кюветное отделение максимально близко к выходной апертуре.

9. Повторить измерение спектра поглощения.

10. По результатам измерений рассчитать спектры поглощения эритроцитарной суспензии с поправками на искажения, вносимые светорассеиванием, двумя полуэмпирическими методами, описанными в теоретическом введении.

11. Построить графически измеренные и расчетные спектры поглощения в одной системе координат.

Отчет и выводы

В отчете по работе должны содержаться:

1. Спектры поглощения лизата эритроцитов при большом телесном угле светосбора и эритроцитарной суспензии при малом и большом телесных углах светосбора.

2. Расчетные спектры поглощения эритроцитарной суспензии с поправками на искажения, вносимые светорассеиванием, сделанными обоими рассмотренными выше полуэмпирическими методами.

В выводах обсуждается следующее:

1. Влияет ли наличие светорассеивания в объекте на его измеряемую оптическую плотность? Обосновать заключение полученными результатами.
2. Зависит ли выраженность влияния светорассеивания на измеряемую оптическую плотность от телесного угла светосбора?
3. Позволяют ли полуэмпирические методы расчета поправок построить правильные спектры поглощения исследуемых объектов? Какой из этих методов дает более точные результаты? Обосновать заключение полученными данными.

Дата добавления: 2015-07-25