Метод 1.

Экспериментально установлено, что для частиц, не обладающих истинным поглощением (т.е. таких, у которых D_и = D_рс) выполняется следующее уравнение:

где b и n – константы при постоянных условиях измерения и типе частиц. Величина n зависит от формы и размеров частиц и может быть от 0 до 4, а величина b - от концентрации рассеивающих частиц в объекте и телесного угла светосбора g.

Предположим, что уравнение (1) справедливо и для частиц, обладающих истинным поглощением.

Если мы прологарифмируем это уравнение, то получим:

Из граничных условий также известно, что

Это уравнение также можно подвергнуть логарифмированию:

Для любого хромофора можно найти такой участок спектра, где он света не поглощает и его D_п = 0. На этом (и только на этом) участке спектра уравнение (4) приобретает вид:

И, поскольку мы оговорили, что истинное поглощение отсутствует, будем считать, что D_рс подчиняется уравнению (1). Тогда можно записать:

Из уравнения (5) вытекает, что в области спектра поглощения мутного (светорассеивающего) объекта, где истинное поглощение у входящих в его состав хромофоров отсутствует, должна выполняться линейная зависимость между lgD_и и lgl.

Используя это, находим на измеренном нами спектре поглощения светорассеивающего объекта такую спектральную область, где хромофоры образца истинным поглощением не обладают. Если такой области на измеренном спектре нет – специально измеряем оптическую плотность при таких длинах волн. Для оксигемоглобина это самая длинноволновая часть видимой области спектра, с 650 до 750-800 нм. В этой (и только в этой) области строим зависимость между lgl и lgD_и. Если все измерено правильно, зависимость будет линейной (прямой).

Далее экстраполируем полученную линейную зависимость в ту часть спектра, где есть истинное поглощение. По полученной калибровочной зависимости мы теперь можем найти величину некоторого lgD при каждом значении lgl. На самом деле найденный lgD - это lgD_рс. Потенциированием (операция, обратная логарифмированию) находим собственно D_рс при каждой интересующей нас длине волны и, используя уравнение (3), рассчитываем величину D_п. Повторяя процедуру, строим исправленный спектр поглощения в нужном спектральном диапазоне.

Следует отметить, что только что описанный метод поправки дает несколько искаженные значения D_п. Дело в том, что, экстраполируя калибровочную прямую, построенную на основании уравнения (1), в спектральную область, где имеется истинное поглощение света в объекте, мы предполагаем, что уравнение (1) справедливо и при наличии истинного поглощения. Однако, это уравнение получено экспериментально, только для частиц, не обладающих истинным поглощением и, строго говоря, не применимо при наличии истинного поглощения. Связанные с особенностями метода искажения расчетного D_п особенно велики в выраженных максимумах спектра поглощения исследуемого объекта.

Этого недостатка лишен второй метод внесения поправок.

Дата добавления: 2015-07-25