Теоретическое введение. Количественная фотометрия неоднородных биологических объектов

РАБОТА № 3

Количественная фотометрия неоднородных биологических объектов

ТЕОРЕТИЧЕСКОЕ ВВЕДЕНИЕ

Одна из распространенных трудностей при количественной фотометрии биологических объектов заключается в том, что поглощающие свет соединения распределены по их площади неоднородно, и их концентрация в разных частях объекта неодинакова. Вместе с тем, однородность объекта – одно из условий выполнения закона Бугера-Ламберта-Бера.

В сравнении с объектами, хромофорные соединения в которых распределены равномерно, неоднородные объекты поглощают свет слабее, а спектры их поглощения «сглажены». Математическое обоснование этого факта можно найти в работе Л.Н. Белла (Белл Л.Н. Замечания о коэффициенте и спектре поглощения нерассеивающих неоднородных сред. Биофизика, 1963, 8, №5, с. 629-638).

Поскольку прямое измерение количества хромофора в объекте с его неоднородным распределением дает заниженные значения, при фотометрии таких объектов требуется внесение поправок. Можно, например, фотометрировать объект не в максимуме поглощения определяемого вещества, а при тех длинах волн, где его оптическая плотность относительно невелика. При небольших значениях оптической плотности ошибка ее определения в неоднородных объектах также будет относительно невелика. Но такой подход значительно снижает чувствительность фотометрического анализа. Поэтому чаще прибегают к другому приему, основанному на определении оптической плотности неоднородного объекта при двух длинах волн тестирующего излучения.

Дата добавления: 2015-07-25