Читайте также:
|
Реагент. 100 мг кумасси бриллиантового синего G-250 растворяют в 50 мл 95%-ного этилового спирта в мерной колбе емкостью 1 л, добавляют 100 мл 85%-ной фосфорной кислоты, 700-800 мл воды, перемешивают и доводят водой до метки.
Методика. Для анализа используется раствор, разбавленный до концентрации 100-1000 мкг/мл. К 0,1 мл подготовленного раствора добавляют 5 мл реагента и хорошо перемешивают. Оптическую плотность измеряют при 595 нм не ранее, чем через 5 мин, и не позднее, чем через 1 ч после приготовления раствора, относительно раствора реагента.
Концентрацию белка определяют по градуировочному графику, на оси оптических плотностей которого откладывают соответствующие разности между оптической плотностью раствора белка, обработанного реагентом и оптической плотностью чистого реагента
Определению белка этим методом мешают сильнощелочные буферы и детергенты.
Контрольные вопросы
1. Объясните, почему в методах, основанных на проведении цветных реакций на белок, нецелесообразно использовать такие реакции, как ксантопротеиновая, Фоля, Миллона и другие реакции, являющиеся общими для белков, но в то же время специфическими для отдельных аминокислот.
2. Спланируйте методику приготовления из яичного белка фотометрируемого раствора для анализа его методом Лоури, если известно, что содержание белка в яичном белке около 20%.
Практическая контрольная работа
по количественному анализу аминокислот и белков
Задание. Каждый студент получает 10 мл раствора, содержащего неизвестное количество аминокислот и белка.
Цель работы – определить содержание суммы аминокислот и содержание белка в исследуемом растворе.
Дата добавления: 2015-07-25; просмотров: 100 | Нарушение авторских прав
| <== предыдущая страница | | | следующая страница ==> |
| Опыт 18. Количественное определение белка методом Лоури | | | Алгоритм выполнения |