|
Читайте также: |
Лимфоциттердің арнайы митогендерге және антигендерге жауап қайтаруы, ондағы ДНК-ның белсенді түзілуімен байланысты лимфоцитердің пролиферациясы болып табылады. Лимфоциттердің антигендерге және митогендерге пролиферациялық жауабы, осы жасушалардың жарамдығын бағалайтын функционалдық сынама болып табылады.
ЛБТС - лимфоциттердің бластты трансформациялаушы серпілісі. Бластты трансформациялаушы серпілісінде лимфоциттерді күшейту лимфоциттердің митогендермен және антигендермен жанасу нәтижесінде лимфобластқа (бөлінуге және ДНК-ны белесенді түрде түзетін жасуша) айналу қасиетіне негізделген. ЛБТС қоюында үш топ ынталандырушыларды қолданады: 1) аллогендік лимфоциттер, немесе басқа адамның лимфо-циттері. Берілген серпілісті, негізінен трансплатация кезінде донорды таңдағанда қолданады; 2) антигенмен ынталандыру, мұнда сезімталдығы анықталған антигендер қолданады; 3) шөптерден алғанған Т-митогендер (фитогемагглютинин, конканавалин А, лаконос митогені), және В-митогендер (декстран сулъфат, бактериалды полисахаридтер және липополисахаридтер).
Клиникалы-иммунологиялық зертханаларда, көбінесе, үшінші топтағы ынталандырушылар, жиі - фитогемагглютинин (ФГА.) қолданады. ЛБТС соңғы нәтижесін екі жолмен бағалайды.
Біріншісі морфологиялық талдауға негізделген. Мұнда микроскоптың астында бластты трансформациялауға ұшыраған жасушалардың санын есептейді. Бұл әдіс өте оңай, бірақ техникалық және субъективтік қателіктердің арқасында әр түрлі нәтижелер береді.
Екінші жолдың негізінде радиометрлік өлшеулер жатыр. ДНК түзілуіне қажет, лимфоциттер дақылына изотоппен белгіленген Н3-тимидин қосады, сұйық стинциляциялық есептегіш арқылы жасушалар қосылған изотопты өлшейді, бір уақытта митоген қосылмаған параллелді дақылдың радиациялық белсенділігін анықтайды. Автоматтық есептегішпен тіркелген имульстің саны, стандартты митогенге лимфоцитердің пролиферативтік жауаптың белсенділігіне тікелей пропорционалды. Ынталандыру жасанбаған дақылдағы НЗ-тимидин қосындылар мөлшерінің ынталандыру жасалған дақылдағы қосындылар мөлшеріне арақатынасы, бластты трансформация-лауының айқындығын көрсетеді. Қалыпты жағдайда Т-лимфоциттер үшін күшейту индексі 10-20 тең, Лимфоциттердің функционалды белсенділігін бағалауға қолданатын басқа әдістер, күшейтілген лимфоциттердің әртүрлі лимфокиндер бөлуімен негізделген.
Лейкоциттердің миграциясын тежеуші серпілісі (ЛМТС)
ЛМТС әр түрлі жұқпалы ауруларда, негізінен жасушаішілік бактериялармен зақымданғанда: туберкулез, бурцеллез, лепра; кандидоз және созылмалы вирусты жұқпаларда иммундық жауабын; сонымен қатар аллергиялық ауруларда аллергендерге сезімталдығын анықтау үшін табысты қолданады.
Әдістің қағидасы. Эритроциттер қоспасы жоқ қан плазмасынан алынған лейкоциттер қоспасын, (50 мкл) 199-ші ортасымен (бақылауда) және индукцияланған вариант – ФГА-мен бір көлемде араластырады. ФГА концентрациясы 1 мл-де 10 мкг.
Осы серпілістің бірнеше модификациясы бар. Иммунологиялық серпіліске арналған планшетке, дуплетке немесе триплетке 10% бұзаудың эмбриондық белсенденген сарысу қосылған 199 ортасын құяды. Мөлшері 7мм және диаметрі 1мм капиллярды ортасы бар лейкоциттер қоспасымен немесе ФГА-мен толтырады. Бір ұшын арақатынасы 1:3 тең парафин және васк қоспасымен толтырады, екінші жағын – планшеттің ұясына түсіреді. Планшетті қақпақпен жабады, 18-24 сағатқа 37°С инкубациялайды.
Капиллярды алып тастағаннан кейін сұйықтықты лункаларда қайтадан суспензиялайды. Әр лункада лейкоциттердің санын Горяев камерасымен есептейді. ФГА-мен бақылау және сынақ үшін орташа санын есептейді. Миграция индексін есептеу үшін тәжірибедегі жасушалардың концентрациясын бақылаудағы сондай концентрацияға бөледі. Қалыпты жағдайда арақатынасы 0,3-0,5 тең.
Капиллярлық әдіс. Бөлінген лейкоциттермен бір жағы ашық, ал екінші жағы жабылған 2 капиллярды толтырады. Кейін центрифугалайды және жасушалары жоқ тұнбаны алып тастайды. Содан соң бір капиллярға ынталандыруды (ФГА) қосады және 24 сағат бойы 37°С инкубациялайды. Бақылау және тәжірибе капиллярларының ашық жағынан планшеттің ұясына лейкоциттердің миграциясы жүреді. Серпілісті бақылау және тәжірибе ұяларындағы жасушалар концентрациясының арақатынасымен бағалайды. Қалыпты жағдайда арақатынасы 0,6-0,87 тең (миграция индексі).
Дата добавления: 2015-11-30; просмотров: 94 | Нарушение авторских прав