Реакция Прауснитца — Кюстнера

Применяется в основном для научно-исследовательских целей. 0,5 мл сыпоротки крови больного аллергическим дерматозом (атонический дер­матит, экзема, почесуха, крапивница и др.), полученной из стерильно взятой лефибриннрованной крови, вводят подкожно здоровому челове­ку '(реципиенту). Через 24—48 ч в то же место впрыскивают 0,02 мл раствора подозреваемого аллергена. Реакцию учитывают через 20— 40 мин. При положительном результате на месте введения аллергена образуется волдырь с зоной эритемы а окружности. Реакцию применя­ют редко, так как имеется опасность заражения реципиента различными инфекциями. Поэтому больного необходимо тщательно обследовать с целью исключения сифилиса, вирусного гепатита, малярии и др.

130. Реакция связывания комплемента,
применяемая для диагностики
токсоппазмоза

Токсоплазмоз — зоонозное инфекционное заболевание. В практике врача-дерматолога может встречаться тнфоподобная, или экзантсмоио-добная, форма. Она характеризуется пятнисто-папулезной сыпью, кото­рая локализуется на туловище н конечностях. Могут увеличиться лим­фатические узлы. Высыпаниям предшествуют, как правило, высокая

температура тела, боль в суставах, голодная боль. С целью диагнос­тики широко используют реакцию связывания комплемента, которую проводят а серологических лабораториях ко жн о -венерологических ди­спансер ов|

Необходимые ингредиенты для проведения реакции: свежеприго­товленная 2.5 % взвесь трижды отмытых изотонический раствором на­трия хлорида эритроцитов барана; гемолитическая сыворотка — сыво­ротка кроликов, иммунизированных эритроцитами барана, разведенная в 3 раза меньше титра (тройной титр).

Предварительно 2,5 % взвесь эритроцитов барана и гемолитическую сыворотку, разведенную по тройному титру, смешивают в разных объ­емах и смесь ставят в термостат при температуре 37 "С (на 30 мин) для сенсибилизации эритроцитов. Требуется комплемент в разведении 1: 10. В качестве комплемента используют сыворотку крови гвинейских свинок, отделенную от сгустков через сутки после взятия крови. Можно применять сухой комплемент. Антиген готовят из пернтонеального экс­судата зараженных токсоплазмозом белых мышей, берут в рабочей до­зе. Для проведения реакции необходимы; нормальная кроличья сыво­ротка в рабочем разведении; гипериммунная токсоплаз«епкая сыворот­ка в рабочем разведении; исследуемая сыворотка, инактиаированная по-догреьаннсм при температуре 56°С л течение 30 мин и разведенная в соотношении 1: 5.

Реакцию проводят по следующим этапам: 1) титрование чистого комплемента в присутствии антигена в объеме 1,25 мл; 2) проведение основной реакции в объеме 1,25 мл. Реакцию считают положительной при задержке гемолиза не менее чем на -J--+- в титре 1: 5. В этом слу­чае ставят количественные пробы, то есть титруют положительные сыво­ротки в разведениях 1:5, 1: 10. 1:20, 1:40, 1:80. 1: 160 и 1: 320.

В практической деятельности врача чаще применяется капельная методика проведения реакции связывания комплемента. Ингредиенты вносят з лунка полистирол свои пластинки туберкулиновым шприцем (без поршня), на который надета прямосрезанная игла длиной 2 см. При этом нужно стараться, чтобы капли были одинаковой вели­чины.

С целью разведения aces комплементов применяют вероналовый бу­фер, рабочий раствор которого готовят перед проведением реакции в соотношении: 1 часть буфера и 4 части дистиллированной воды. Для про­ведения реакции используют 0,4 % взвесь эритроцитов барана в всрона-ловом буфере. Гемолитическую систему готовят непосредственно перед проведением реакции. В реакции используют сухой комплемент и ге­молизин в разведении соответственно 1: 75 и 1: 500.

В каждую лунку полистироловой пластинки вносят по 1 капле сы­воротки, разведенной всроналозы.м буфером (разведения 1:5, 1: 10 и т. д.), добавляют 1 каплю антигена и 1 каплю комплемента, разнеден-них в рабочей дозе. В лунку с контрольной сывороткой прибавляют 1 каплю буфера. При проведении реакции используют пипетки отдельно

для каждого внгредчента, в случае работы одной пипеткой ее промывают буфером после добавления каждого реактива.

С целью предупреждения высыхания капель по л и стироловую плас­тинку накрывают такой же рластинкой и помещают в камеру иа 16— 13 ч при температуре 40 °С. После инкубирования в каждую лунку до­бавляют по 2 капли сенсибилизированной гемолитической системы н пластинки помещают в термостат на 2 ч при температуре 37 "С. По ис­течении этого времени их снова помещают в камеру на 15 мин при тем­пературе 40 °С, затем учитывают результаты.

В качестве контроля используют положительную и отрицательную сыворотки. Антиген: 1 капля буфера -|- 1 капля антигена -|- 1 капля комплемента; комплемент: 2 капли буфера + 1 капля комплемента.

При оценке результатов лишь контрольная положительная сыво­ротка должна показать определенный титр. Реакцию считают положи­тельной при задаржке гемолиза не пенсе чем на ++ н титре 1:5.

Для проведения реакции связывания комплемента при серологичес­кой диагностике токсоплазмоза чаше используют сукой антиген.

Дата добавления: 2015-07-10