Список приложений

Приложение А. Требования к структуре и объему отдельных разделов отчетных и дипломной работ.

Приложение Б. Образец оформления титульного листа дипломной работы.

Приложение В. Пример оформления реферата дипломной работы.

Приложение Г. Пример оформления оглавления дипломной работы.

Приложение Д. Пример оформления списка использованных сокращений дипломной работы.

Приложение Е. Образец оформления раздела «Материалы и методы».

Приложение Ж. Образец оформления списка использованных источников.

Приложение И. Образец оформления титульного листа отчетной работы по практике V курса.

Приложение К. Образец оформления титульного листа отчетной работы по практике IV курса.

Приложение Л. Образец оформления титульного листа отчетной работы по практике III курса.

Приложение М. Пример оформления таблицы в дипломной и отчётных работах.

Приложение Н. Пример оформления иллюстрации в дипломной и отчётных работах.

Структурный элемент (раздел)	Отчетная работа по практике	Дипломная работа
III курса	IV курса	V курса
Титульный лист	1 стр.	1 стр.	1 стр.	1 стр.
Реферат	–	–	1 стр.	1 стр.
Оглавление	н.р.**	н.р.	н.р.	н.р.
Список использованных сокращений	н.р.	н.р.	н.р.	н.р.
Введение	1–2 стр.	1–2 стр.	2 стр.	2 стр.
Обзор литературы	10–15 стр.*	12–15 стр.	30–50 стр.	25–35 стр.
Материалы и методы исследования	3–10 стр.	3–10 стр.	–	н.р.
Результаты и их обсуждение	10–20 стр.	15–25 стр.	–	25–40 стр.
Заключение	1–2 стр.*	1–2 стр.*	до 3 стр.	до 3 стр.
Выводы	до 2 стр.	до 2 стр.	–	1–2 стр.
Список использованных источников	н.р.	н.р.	н.р.	н.р.
количество использованных источников	н.р.	н.р.	не менее 30	не менее 40
Список приложений	н.р.	н.р.	н.р.*	н.р.
Приложения	н.р.	н.р.	н.р.*	н.р.
ОБЩИЙ ОБЪЕМ РАБОТЫ ***	25–60 стр.	30–60 стр.	45–75 стр.	до 100 стр.
* структурный элемент (раздел) не является обязательным ** н.р. – объем раздела не регламентируется *** без приложений

Министерство здравоохранения и социального развития РФ

Волгоградский государственный медицинский университет

Медико-биологический факультет

Кафедра теоретической и клинической биохимии

Зав. кафедрой д.м.н. О.В. Островский

Васьковская Марина Анатольевна

роль восстановленного глутатиона в поддержании окислительно-восстановительного гомеостаза клеток при действии экзогенных прооксидантов и антиоксидантов

(дипломная работа; специальность 040800 – медицинская биохимия)

Работа выполнена на кафедре теоретической и клинической биохимии ВолГМУ

Научный руководитель: доцент, кандидат биологических наук В.Л. Бенгальский

Волгоград — 2007

Реферат

Настоящая работа посвящена изучению вклада звеньев обмена глутатиона (Г) в поддержании окислительно-восстановительного гомеостаза (ОВГ) при воздействии антиоксидантов (АО) и прооксидантов (ПО). Изучено влияние 6 АО и 8 ПО на жизнеспособность и метаболизм эукариотических клеток (дрожжи, эритроциты крысы и человека, культивируемые клетки линии HeLa). Жизнеспособность оценивали по соотношению живых, некротизирующих и апоптозирующих клеток, а для эритроцитов – по чувствительности к гемолизу. В клетках прижизненно контролировали уровень рН и окислительно-восстановительный потенциал. Из биохимических показателей определяли содержание окисленного и восстановленного Г, активность Г-зависимых ферментов, глюкозо-6-фосфат-дегидрогеназы и малик-фермента, соотношения NADH/NAD⁺, NADPH/NADP⁺ и лактат/пируват. Показано, что действие и АО, и ПО обладает двухфазным эффектом на ОВГ во всех типах клеток. ПО в низких концентрациях вызывают компенсаторную активацию Г-зависимого звена метаболизма и некоторое увеличение содержания восстановленных продуктов метаболизма, высокие концентрации ПО сдвигают ОВГ в сторону преобладания окисленных соединений и снижают жизнеспособность клеток. С другой стороны, высокие концентрации большинства АО вызывают сдвиг ОВГ в сторону восстановительных условий и снижают жизнеспособность клеток.

Исследование выполнено в 2006/2007 учебном году студенткой 9 группы 6 курса медико-биологического факультета Волгоградского государственного медицинского университета Васьковской Мариной Анатольевной на исследовательской базе кафедры теоретической и клинической биохимии ВолГМУ и в Институте изучения энантиостаза (Белогорье).

Результаты исследования были представлены в форме устного доклада на Ежегодном научном симпозиуме Института изучения энантиостаза (Белогорье, 20–21 июня 2007 г.) и в форме стендового сообщения на Всероссийской научной конференции «Гомеостаз и энантиостаз» (Москва, 24–26 ноября 2006 г.). По результатам работы опубликовано 6 научных работ (список научных публикаций приведен в Приложении А).

Дипломная работа изложена на 94 страницах машинописного текста и иллюстрирована 11 таблицами и 12 рисунками, схемами и графиками. Список использованных информационных источников включает 163 ссылки, из них 41 на русском языке и 122 на иностранных языках. Дополнительные материалы к работе включены в 6 приложений.

Ключевые слова: глутатион, окислительно-восстановительный статус, антиоксидант, антиоксидантная система, прооксидант; окислительно-восстановительный потенциал.

УДК хх

Содержание

Список использованных сокращений ……………………………………………………………..4

Введение …………………………………………………………………………………………….5

1. Окислительно-восстановительное состояние внутриклеточной среды как важный регулятор метаболизма, пролиферации и дифференцировки клеток эукариот ………………..7

1.1. Факторы, определяющие окислительно-восстановительное состояние внутриклеточной среды …………………………………………………………………………8

1.2. Биологические эффекты изменений окислительно-восстановительного состояния внутриклеточной среды ………………………………………………………………………..13

1.2.1. Окислительно-восстановительный статус и переключение между катаболическими и анаболическими процессами ………………………………………………………………14

1.2.2. Взаимосвязь окислительно-восстановительного состояния внутриклеточной среды с переключением между аэробным и анаэробным катаболизмом ………………………..18

1.2.3. Регуляция пролиферации и дифференцировки клеток соотношением окисленных и восстановленных метаболитов ………………………………………………………………23

1.2.4. Изменение окислительно-восстановительного состояния внутриклеточной среды в формирования стрессового ответа и при адаптационных процессах ……………………..27

1.3. Механизмы поддержания окислительно-восстановительного гомеостаза в эукариотических клетках ………………………………………………………………………30

1.4. Способы оценки окислительно-восстановительного статуса внутриклеточной среды.36

2. Материалы и методы исследования …………………………………………………..…..…..40

2.1. Список использованных материалов ……………………………………………………..40

2.2. Список использованного оборудования ………………………………………………….40

2.3. Использованные штаммы микроорганизмов …………………………………………….40

2.4. Использованные линии культивируемых клеток ………………………………………..40

2.5. Культивирование дрожжевых клеток …………………………………………………….41

2.6. Культивирование клеток линии HeLa ……………………………………………………41

2.7. Источники и способы получения человеческого биологического материала …………41

2.8. Источники и способы получения биологического материала от экспериментальных животных ………………………………………………………………………………………..41

2.9. Определение числа живых, некротизирующих и апоптозирующих клеток с помощью проточного цитофлюориметра ………………………………………………………………...41

2.10. Электрофоретическое определение степени деградации хромосомной и митохондриальной ДНК ……………………………………………………………………….42

2.11. Иммунохимический анализ внутриклеточного содержания каспаз ………………….42

2.12. Определение активности каспаз в клетках ……………………………………………..43

2.13. Определение чувствительности эритроцитов к кислотному гемолизу ……………….43

2.14. Определение чувствительности эритроцитов к осмотическому гемолизу …………...43

2.15. Определение чувствительности эритроцитов к окислительному гемолизу ………….44

2.16. Определение содержания восстановленного и окисленного глутатиона …………….44

2.17. Определение активности глутатионпероксидазы ……………………………………...44

2.18. Определение активности глутатионредуктазы …………………………………………45

2.19. Определение активности глутатионсинтетазы …………………………………............45

2.20. Определние активности глюкоза-6-фосфат-дегидрогеназы …………………………..46

2.21. Определение активности малик-фермента ……………………………………………..46

2.22. Определение внутриклеточного значения рН ………………………………………….46

2.23. Определение окислительно-восстановительного потенциала в живых клетках …….47

2.24. Методика искусственного истощения внутриклеточной концентрации восстановленного глутатиона …………………………………………………………………47

2.25. Ингибирование активности ферментов в живых клетках ……………………………..47

2.99. Статистический анализ экспериментальных данных ………………………………….48

3. Результаты и их обсуждение …………………………………………………………………..49

3.1. Действие модуляторов окислительно-восстановительного статуса на клетки пекарских дрожжей Saccharomyces cerevisiae и дрожжей Schizosaccharomyces pombe ……………….51

3.1.1. Эффекты различных концентраций экзогенных антиоксидантов и прооксидантов на жизнеспособность дрожжевых клеток ………………………………………………………52

3.1.2. Эффекты различных концентраций экзогенных антиоксидантов и прооксидантов на концентрацию и обмен глутатиона в дрожжевых клетках ………………………………...55

3.1.3. Влияние истощения дрожжевых клеток по глутатиону на их ответ на действие экзогенных антиоксидантов и прооксидантов ……………………………………………...58

3.1.4. Влияние ингибирования глутатион-зависимых ферментов и глюкозо-6-фосфат-дегидрогеназы в дрожжевых клетках на их ответ на действие экзогенных антиоксидантов и прооксидантов ……………………………………………...................................................62

3.1.5. Влияние активации синтеза глутатиона в дрожжевых клетках на их ответ на действие экзогенных антиоксидантов и прооксидантов …...................................................66

3.2 Действие модуляторов окислительно-восстановительного статуса на зрелые эритроциты крысы и человека ………………………………………………………………...70

3.2.1. Эффекты различных концентраций экзогенных антиоксидантов и прооксидантов на чувствительность эритроцитов к различным видам гемолиза …………………………….70

3.2.2. Эффекты различных концентраций экзогенных антиоксидантов и прооксидантов на концентрацию и обмен глутатиона в эритроцитах ………………………………................76

3.2.3. Влияние истощения дрожжевых клеток по глутатиону на их ответ на действие экзогенных антиоксидантов и прооксидантов ……………………………………………...79

3.2.4. Влияние ингибирования глутатионпероксидазы, глутатионредуктазы и глюкозо-6-фосфат-дегидрогеназы в эритроцитах на их ответ на действие экзогенных антиоксидантов и прооксидантов …........................................................................................81

3.3 Эффект экзогенных антиоксидантов и прооксидантов на жизнеспособность, содержание и обмен глутатиона в культивируемых клетках линии HeLa …………………83

Заключение ………… ………………………………………………………………………….....89

Выводы …………………………………………………………………………………………….92

Список использованных источников ……………………………………………………………94

Список приложений ……………………………………………………………………………..101

Список использованных сокращений

95% ДИ	–	95%-ный доверительный интервал
АОС	–	антиоксидантная система
АФК	–	активные формы кислорода
АО	–	антиоксидант(ы)
КД	–	конъюгированные диены
ПО	–	прооксидант(ы)
ТК	–	триеновые конъюгаты
ТСХ	–	тонкослойная хроматография
ШО	–	шиффовы основания
ANOVA	–	однофакторный дисперсионный анализ
BHT	–	бутилгидрокситолуол
GP	–	глутатионпероксидаза
GR	–	глутатионредуктаза
GSH	–	глутатион восстановленный
GSSG	–	глутатион окисленный
LHP	–	гидропероксиды липидов
MANOVA	–	многофакторный дисперсионный анализ
MDA	–	малоновый диальдегид
PHGP	–	глутатионпероксидаза гидропероксидов фосфолипидов
αToc	–	α-токоферол
μ	–	генеральное среднее (математическое ожидание генерального среднего)

2. Материалы и методы

2.1. Список использованных материалов

В работе были использованы следующие реактивы: натрия гидроксид («Реахим», Россия), церулоплазмин сыворотки крупного рогатого скота (ICN Biomedicals Inc., США).

2.2. Список использованного оборудования

При выполнении работы были использованы следующие инструменты, приборы и лабораторное оборудование: спектрофотометри СФ-46 (ЛОМО, Россия), полуавтоматический титратор TTT2 (Radiometer, Дания), комплект оборудования для жидкостной хроматографии FPLC (Pharmacia, Швеция), автоматические дозаторы (сэмплеры) Finnpipette (Labsystems, Финляндия) и Color (Biohit, Финляндия).

2.3. Метод определения антител к вирусу гепатита В

Описание метода

2.4. Методы статистической обработки данных

Подробное описание методов статистического анализа, использованных для обработки полученных экспериментальных данных.

Список использованных источников

1. Дриницына С.В., Азизова О.А., Соловьева Н.П., Ключникова Ж.И., Лопухин Ю.М. Способ оценки тяжести течения ишемической болезни сердца с помощью определения окислительной устойчивости плазмы крови. // Свободные радикалы, антиоксиданты и болезни человека. Сб. тр. национальной научно-практ. конф. (Смоленск, 19–22 сент. 2001).– Смоленск, 2001.– С.5–7.

2. Евстигнеева Р.П., Волков И.М., Чудинова В.В. Витамин Е как универсальный антиоксидант и стабилизатор биологических мембран. // Биол. мембраны.– 1998.– Т.15, № 2.– С.119–135.

3. Реброва О.Ю. Статистический анализ медицинский данных. Применение пакета прикладных программ STATISTICA.– М.: МедиаСфера, 2002.– 312 с.

4. Флетчер Р., Флетчер С., Вагнер Э. Клиническая эпидемиология. Основы доказательной медицины.– М.: МедиаСфера, 1998.– 352 с.

5. Larsen C.E., Trip R., Johnson C.R., inventors; No-voste Corporation, assignee. Methods for procedures related to the electrophysiology of the heart.– US patent 5,529,067.– 1995 Jun 25.

6. Morse S.S. Factors in the emergence of infectious disease.– Emerg Infect Dis [serial online] 1995 Jan-Mar [cited 1996 Jun 5].– V.1, no.1: [24 screens].– Available from: URL: http://www.cdc.gov/ncidod/EID/eid.htm

7. Pugia M.J., Lott J.A., Wallace J.F., Cast T.K., Bierbaum L.D. Assay of creatine using the peroxidase activity of copper-creatine complexes. // Clin. Biochem.– 2000.– V.33, no.1.– P.63–70.

Stedman’s medical dictionary. / 26th ed.– Baltimore: Williams & Wilkins; 1995.– Apraxia; p. 119–20.

Министерство здравоохранения и социального развития РФ

Волгоградский государственный медицинский университет

Медико-биологический факультет

Кафедра теоретической и клинической биохимии

Зав. кафедрой д.м.н. О.В. Островский

Васьковская Марина Анатольевна

сравнительный анализ методов оценки активности глутатион-зависимых ферментов (обзор литературы)

(отчетная работа по преддипломной практике V курса)

Работа выполнена на кафедре теоретической и клинической биохимии ВолГМУ

Научный руководитель: доцент, кандидат биологических наук В.Л. Бенгальский

Волгоград — 2006

Министерство здравоохранения и социального развития РФ

Волгоградский государственный медицинский университет

Медико-биологический факультет

Кафедра теоретической и клинической биохимии

Зав. кафедрой д.м.н. О.В. Островский

Васьковская Марина Анатольевна

выбор оптимальных условий определения глутатиона для оценки активности глутатион-зависимых ферментов

(отчетная работа по биохимической производственной практике IV курса)

Работа выполнена на кафедре теоретической и клинической биохимии ВолГМУ

Научный руководитель: доцент, кандидат биологических наук В.Л. Бенгальский

Волгоград — 2005

Министерство здравоохранения и социального развития РФ

Волгоградский государственный медицинский университет

Медико-биологический факультет

Кафедра теоретической и клинической биохимии

Зав. кафедрой д.м.н. О.В. Островский

Кульков Илья Федорович

выбор оптимальных условий определения глутатиона для оценки активности глутатион-зависимых ферментов

(отчетная работа по лаборантской производственной практике III курса)

Работа выполнена на кафедре теоретической и клинической биохимии ВолГМУ

Научный руководитель: доцент, кандидат биологических наук В.Л. Бенгальский

Волгоград — 2006

Образец выполнения и оформления таблицы.

Таблица 1

Соотношения между заболеваемостью, распространенностью и длительностью заболевания бронхиальной астмой в США (из [4])

Возраст	Заболеваемость за год на 1000 населения	Распространенность на 1000 населения	Длительность заболевания* (годы)
0 – 5	6/1000	29/1000	4,8
6 – 16	3/1000	32/1000	10,7
17 – 44	2/1000	26/1000	13,0
45 – 64	1/1000	33/1000	33,0
65 и старше		36/1000	33,0
Всего	3/1000	30/1000	10,0
* Рассчитанная как (распространенность / заболеваемость)

Основной текст параграфа.

Образец выполнения и оформления иллюстрации.

Рисунок 1. Алгоритм лечения артериальной гипертензии. Условные обозначения: АГ – артериальная гипертензия; АД – артериальное давление; САД – систолическое АД, ДАД – диастолическое АД. Обозначения групп гипотензивных препаратов: ТД – тиазидные диуретики, ИАПФ – ингибиторы ангиотензин-превращающего фермента; БРАТ – блокаторы рецепторов ангиотензина; βАБ – β-адреноблокаторы; БCaК – блокаторы кальциевых каналов.

Основной текст раздела

[1] Такая ситуация, наряду с историческими традициями, является причиной наличия в большинстве научных журналов собственных правил цитирования и требований к оформлению списка литературы в представляемых рукописях.

[2] Примером использования правил NLM являются доступные через Интернет электронный каталог самой NLM и библиографическая база журнальных публикаций Medline/PubMed.

[3] Например, многие международные журналы публикуют в Интернете препринты статей, принятых к печати, тем самым существенно ускоряя введение новых данных в научный оборот.

[4] Информационное издание, по ГОСТу 7.60–90 – «издание, содержащее систематизированные сведения о документах (опубликованных, неопубликованных, непубликуемых) либо результат анализа и обобщения сведений, представленных в первоисточниках».

[5] Использование другого шрифта для основного текста запрещается, т.к. в отечественных стандартах «для научных изданий рекомендуется гарнитура типа Times как наиболее информативная» (ОСТ29.124–94, п.4.1.10).

[6] Кегль шрифта указывается в типографских пунктах (пт).

[7] Перевод «Единых требований…» на русский язык с редакции 2000 года доступен через Интернет по адресу http://ruscience.newmail.ru/medicine/mbooks/rules.htm на сайте «Русского медицинского обозрения» (http://ruscience.newmail.ru/medicine/).

Дата добавления: 2015-10-21