Студопедия
Случайная страница | ТОМ-1 | ТОМ-2 | ТОМ-3
АвтомобилиАстрономияБиологияГеографияДом и садДругие языкиДругоеИнформатика
ИсторияКультураЛитератураЛогикаМатематикаМедицинаМеталлургияМеханика
ОбразованиеОхрана трудаПедагогикаПолитикаПравоПсихологияРелигияРиторика
СоциологияСпортСтроительствоТехнологияТуризмФизикаФилософияФинансы
ХимияЧерчениеЭкологияЭкономикаЭлектроника

Лабораторные работы. Лабораторная работа № 1.Определение концентрации гемоглобина в крови

Читайте также:
  1. I. Задания для самостоятельной работы
  2. I. Задания для самостоятельной работы
  3. I. ЦЕЛИ И ЗАДАЧИ КУРСОВОЙ РАБОТЫ
  4. II. ВЫПОЛНЕНИЕ ЗАДАНИЯ КУРСОВОЙ РАБОТЫ
  5. II. Цели и задачи организации учебно-воспитательной работы кадетского класса.
  6. III)Методики работы над хоровым произведением
  7. III. КАКАЯ ИНФОРМАЦИЯ НУЖНА РУКОВОДСТВУ ДЛЯ РАБОТЫ

Лабораторная работа № 1. Определение концентрации гемоглобина в крови унифицированным колориметрическим методом

Принцип метода. Гемоглобин под действием трансформирующего раствора превращается в окрашенный продукт – гемихром, интенсивность окраски которого пропорциональна концентрации гемоглобина и измеряется фотометрически при длине волны 540 нм.

Ход работы. Составляют реакционную смесь по схеме:

РЕАГЕНТЫ Опытная проба, мл.
Трансформирующий раствор 5,00
Кровь 0,02

Перемешать, выдержать 5 минут при комнатной температуре и измерить оптическую плотность опытной пробы (А) против дистиллированной воды в кювете с толщиной поглощающего слоя 1 см при длине волны 540 нм. Окраска стабильна до 5 часов.

Расчет содержания гемоглобина (в г/л) производят по формуле:

Hb = (Е оп / Е ст) С,

где Е оп – экстинкция опытной пробы;

Ест – экстинкция стандартного раствора;

С – концентрация гемиглобинцианида в стандартном растворе, равная 138,0 г/л;

Норма: Содержание гемоглобина в крови по норме: у женщин – 120–140 г/л; у мужчин – 130–160 г/л.

Выводы. Записать полученный результат и дать его клинико-диагности­ческую оценку.

 

 

Лабораторная работа № 2. Определение концентрации общего билирубина в сыворотке крови унифицированным методом Ендрассика-Грофа.

Принцип метода. Общий билирубин определяется на основе реакции диазотированной сульфаниловой кислотой, после диссоциации неконъюгированного (непрямого, свободного билирубина) при участии кофеинового реагента.

Ход работы. Составляют реакционную смесь по схеме:

РЕАГЕНТЫ Опытная проба, мл.
Сыворотка крови 0,2
Кофеиновый реагент 1,4
Физ. раствор 0,2
Диазосмесь 0,2

Время инкубации после добавления диазосмеси составляет 20 минут при температуре 200С. Измеряют экстинкцию опытной пробы против дистиллированной воды в кюветах с длиной оптического пути 5 мм на ФЭКе при длине волны 535 нм.

Расчет производят по калибровочному графику.

Норма: 0,5 – 1,1 мг %

8,5 – 20,5 мкмоль/л.

Клинико-диагностическое значение. Билирубин образуется в организме в результате естественного распада в клетках ретикулоэндотелиальной системы (печень, селезенка) гемоглобина и других гемопротеидов (цитохромы, каталаза и др.). Билирубин относится к группе желчных пигментов, является токсическим веществом и обезвреживается в гепатоцитах. Транспортируется билирубин к месту обезвреживания в комплексе с белком. В печени происходит процесс обезвреживания по схеме

УДФ-глюкуроновая кислота

Билирубин ¾¾¾¾¾¾¾¾¾¾® Билирубин-глюкуронид.

глюкуронилтрансфераза

Образующиеся при этом глюкурониды билирубина хорошо растворимы в воде, секретируются в просвет желчного капилляра и выводятся из организма по желчевыводящим путям.

В сыворотке крови содержится две фракции билирубина, вместе составляющие "общий" билирубин:

- неконъюгированный (непрямой, токсичный, свободный, водонерастворимый, существует в виде комплекса с альбумином),

- конъюгированный (билирубин глюкуронид, прямой, нетоксичный, связанный, водорастворимый).

Содержание билирубина в крови в норме составляет 0,5–1,2 мг% (8,5–20,5 мкмоль/л в единицах СИ), причем 75 % приходится на долю неконъюгированного. Определение его уровня в крови является важным диагностическим тестом. Так, при различных поражениях печени и желтухах часто наблюдается гипербилирубинемия – увеличение концентрации билирубина до 30–35 мг% (512,5 – 600,0 мкмоль/л) и более.

Дифференциальная диагностика различных видов желтух осуществляется на основании исследования содержания фракций билирубина в крови, а также особенностей клинического течения заболевания и др.

Выводы. Записать полученный результат и дать его клинико-диагности­ческую оценку.

 

 

Рекомендуемая литература

Основная

1 Кухта, В.К и др. Биологическая химия: учебник / В.К. Кухта, Т.С. Морозкина, Э.И. Олецкий, А.Д. Таганович; под ред. А.Д. Тагановича. – Минск: Асар, М.: Издательство БИНОМ, 2008. – С. 38-44, 301-306, 563-585.

2 Биохимия: Учебник для вузов / Под ред. Е.С. Северина. – 4-е изд., испр. – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2006. – С. 45-55, 636-655, 657-682.

3 Николаев, А.Я. Биологическая химия. М.: Медицинское информационное агентство, 2004. – С. 457-458, 489-502, 504-517.

4 Марри Р. и др. Биохимия человека: в 2-х т.: Пер. с англ., М.: Мир, 2004. – Т.1: С. 52-62, 356-372, Т.2: С. 325-331.

Дополнительная

5 Березов, Т. Т. Биологическая химия / Т.Т. Березов, Б.Ф. Коровкин – М.: Медицина, 1998. – С. 78–85, 503–508, 585, 591–599.

6 Ткачук В.А. Клиническая биохимия. – М.: ГЭОТАР-МЕД, 2002. – С. 138-210.

7 Бышевский, А.Ш. Биохимия для врача / А.Ш. Бышевский, О.А. Терсенов. – Екатеринбург: Уральский рабочий, 1994. – С. 128-133, 244-246, 261-294.

 


Дата добавления: 2015-10-21; просмотров: 63 | Нарушение авторских прав


Читайте в этой же книге: Практическая часть | Лабораторные работы | Практическая часть | Временные границы полуколичественного анализа мочи с помощью тест-полосок | Занятие 31 | Практическая часть | Теоретическая часть | Практическая часть | Лабораторные работы | Теоретическая часть |
<== предыдущая страница | следующая страница ==>
Занятие 29| Занятие 30

mybiblioteka.su - 2015-2024 год. (0.007 сек.)