Изучить основные этапы бактериологического метода диагностики брюшного тифа.

1. Бактериологический метод – выделение гемокультуры:

Учесть характер роста бактерий на среде Раппопорт (желчный МПБ с глюкозой, индикатором Андреде и поплавком для улавливания газа), висмут-сульфит агаре, среде Левина (МПА с лактозой, с эозином и метиленовым синим), среде Олькеницкого (МПА с глюкозой, лактозой, сахарозой, моче­виной и индикатором феноловым красным). Разложение глюко­зы сопровождается пожелтением столбика, скошенная часть остается без изменений в случае отсутствия разложения лактозы. При разложении лактозы наблюдается пожелтение скошенной части среды. При образова­нии сероводорода на границе скошенной части и столбика наблюдается почернение. Среда позволяет также учесть газооб­разование. При разложении мочевины среда окрашивается в красный цвет. Используется также накопительная селенито­вая среда;

контроль чистоты выделенной культуры. Со среды Олькеницкого приготовлен мазок, окрашен его по Граму. Промикроскопировать и зарисовать демонстрационные препараты сальмонелл – возбудителей тифо-паратифозных заболеваний (S.typhi, S.paratyphi, S.schottmuelleri, окраска по Граму), приготовленные из чистых культур. Сальмонеллы – грамотрицательные палочки с закругленными краями, идентичны по морфологическим свойствам;

идентификация выделенной культуры возбудителя:

- по антигенным свойствам – учесть ориентировочную ре­акцию агглютинации (ОРА) на предметном стекле со смесью монорецепторных агглютинирующих О-сыво­роток, а также с отдельными О- (2, 4, 7, 9), Н- 1 фазы (a, b, c, d) и Н-2 фазы (1,2) сыворотками. Развернутая реакция агглютинации (демонстрация) ставится в пробирках с двукратными последовательными разведениями специфической агглютинирующей сыворотки от I:200 и выше до титра (титр указывается на ампуле с сывороткой) и выделенной культурой; в качестве контроля используется физиологический раст­вор. Во все пробирки вносят по 2 капли исследуемой культуры, выдерживают в термостате при 37⁰ С в течение 2 часов, затем 18-20 часов при комнатной температуре, после чего производят учет.

- по биохимическим свойствам - определить биохимическую активность исследуемой культуры по пестрому ряду Гисса или Пешкова (демонстрация). Обратить внимание на расщепление глюкозы и отсутствие расщепления лактозы и саха­розы.

- по фаголизабельности -учесть пробунафаголизабельность (демонстрация)

Определение фаговара выделенной культуры (демонстра­ция). Сделан посев выделенной культуры "газоном" на чаш­ку с МПА. На поверхность посева нанесено по 1 капле специ­фических типовых фагов. Фаговар определяют по наличию "стерильных" пятен на месте нанесения типового фага cooответствующего фаговару культуры через сутки инкубации в термостате при 37⁰ С.

Определение чувствительности выделенной культуры к антибиотикам методом бумажных дисков (демонстрация).

Дата добавления: 2015-09-03