Приготовление хромпика.

Работать в защитных очках! На дно фарфоровой кружки на 1000 мл насыпать около 30 г бихромата калия. Полностью смочить бихромат минимальным количеством дистиллированной воды (~ 30 – 50 мл), чтобы получилась густая жижа. К полученной смеси постепенно добавлять концентрированной серной кислоты небольшими порциями (по 50 – 100 мл), каждый раз перемешивая содержимое фарфоровой кружки. Смесь разогревается. Кислоту добавлять до полного растворения бихромата (~ 900 мл). Готовый хромпик хранить в закрытой стеклянной ёмкости под тягой.

Проверка качества приготовленного хромпика: спичка загорается, если её макнуть в хромпик.

Для замачивания предметных стёкол полученная смесь растворяется дистиллированной водой в 10 раз, при этом смесь выливается небольшими порциями в воду, а не наоборот!!! При растворении наблюдается заметное разогревание раствора. В этом составе предметные стекла (и любую другую посуду) выдерживают 2—3 дня, а после промывают в проточной воде в течение 1—2 дней.

Вымытую лабораторную посуду не вытирают, а помещают для сушки в сушильный шкаф, так как при вытирании она может быть засорена волоконцами от ткани.

Предметные стекла подсушивают на воздухе (или в сушильном шкафу), закладывают в широкогорлую стеклянную банку и, залив смесью из равных частей спирта и эфира (или бензола, ксилола, толуола), плотно закрывают.

Такая обработка не только очищает стекла от грязи, но и обезжиривает их поверхность, что очень важно для хорошего приклеивания срезов. Перед употреблением стекла достают пинцетом и вытирают чистой (желательно льняной) тряпкой, следя при этом, чтобы на поверхности не оставались волоконца от материи и пылинки. Держать стекло нужно за края, чтобы не оставлять на поверхности следов пальцев.

Подобным же образом подготавливают покровные стекла, помещая их после промывания в бюксы со спирт-эфиром. Протирка покровных стекол из-за их тонкости требует большой осторожности и соответствующих навыков.

Для промывания пипеток целесообразно иметь специальное приспособление, изображенное на рисунке.

Главную трубку с помощью переходного резинового шланга надевают на водопроводный кран, а на отводные трубки, также снабженные резиновыми муфточками,— пипетки. Открыв кран, производят их промывание под напором, после чего опускают на несколько часов в цилиндр, заполненный раствором двухромовокислого калия (на дно цилиндра обязательно нужно положить стеклянную вату, чтобы предупредить откалывание носиков у пинеток). После этого пипетки вновь тщательно промывают в проточной воде, ополаскивают дистиллированной водой и помещают в сушильный шкаф.

Если в лаборатории нет новых предметных стекол, то можно использовать стекла, бывшие в употреблении.

Для этого препарат подогревают над пламенем. Как только канадский бальзам начнет расплавляться, покровное стекло сдвигают в сторону препаровальной иглой и снимают. За-тем предметные стекла заливают ксилолом или хлороформом, который меняют до полного растворения бальзама на стёклах. Кипячение в мыльной воде приводит к помутнению стёкол, что делает их непригодными к дальнейшему использованию, поэтому такой способ очистки стёкол не может быть признан целесообразным. После полного отмывания и высушивания стёкла закладывают в банку со спирт-эфиром. Предварительно производят сортировку, так как часть стекол в процессе обработки приобретает царапины и становится непригодной.

Следует принять за правило — не оставлять использованную посуду длительное время без промывания. Если нет возможности ее тут же окончательно вымыть, то необходимо ополоснуть и залить водой. Засохшие реактивы требуют для отмывания значительно больших усилий, а иногда их невозможно отмыть.

В повседневной работе лаборанту необходимо иметь набор инструментов: ножницы с прямыми браншами, средние и малые (глазные); пинцеты разных размеров и образцов: анатомические (концы браншей плоские с насечками), хирургические (концы с выступами), специальные (с тонкими изогнутыми концами); скальпели средние и малые (глазные); препаровальные иглы тонкие прямые или изогнутые с ручкой (применяются для накалывания объектов при фиксации, расправления свернувшихся срезов, переноса их из одной чашечки в другую и пр.); стеклянные крючки для вылавливания и переноса срезов; кровоостанавливающие зажимы для пережимания сосудов и захвата тканей при вскрытии животных. Корнцанг — зажим с длинными ручками и мощными браншами — употребляется для извлечения предметных стекол из банок со спирт-эфиром, а также для захвата мелких лабораторных животных.

При отсутствии фабричных игл их можно приготовить из металлических швейных игл, вставив последние ушком в круглые деревянные палочки.

Стеклянные крючки изготавливают из круглой стеклянной палочки, середину которой нагревают над пламенем газовой горелки до размягчения. Уловив этот момент, палочку быстрым движением растягивают за концы в разные стороны. При этом в местах разрыва образуются тонкие иглы, которые можно использовать как препаровальные или превратить в крючки.

Шпатели металлические или пластмассовые, прямые и изогнутые лопаточки — для переноса срезов и кусочков тканей, взятия различных сыпучих веществ, шприцы различной емкости — для инъекций красителей при прижизненной окраске тканей и других процедур.

За инструментом необходим тщательный уход. После применения его следует сразу же мыть (если нужно, очищать) и насухо вытирать (или высушивать в сушильном шкафу).

Хранить инструменты следует в определенном месте. Это облегчает его нахождение и экономит рабочее время.

Из другого оборудования и принадлежностей лаборанту необходимо иметь: спиртовку, небольшую мягкую волосяную кисточку (для снятия срезов с микротомного ножа), иголку, нитки и плотную бумагу для этикетировки материала, карандаши для письма по стеклу, фильтровальную и индикаторную (для определения pH раствора) бумагу, лезвия безопасной бритвы (для вырезывания кусочков из органов).

Каждый лаборант должен иметь несколько тетрадей для записей.

Основная тетрадь служит для записей освоенных и осваиваемых методик обработки материала, ибо, несмотря на наличие методических руководств, у каждого лаборанта в процессе работы появляются свои наблюдения, вызывающие порой дополнения или некоторые видоизменения отдельных этапов обработки.

У лаборантов, работающих с экспериментальным материалом, должна быть тетрадь (вернее, книга), в которую записывается протокол эксперимента (вид и порядковый номер животного, дата и характер эксперимента, дневник наблюдений, дата умерщвления, какой материал взят для исследования и в какие фиксаторы помещен). Единой формы протокольной тетради нет. Приводим одну из форм.

Следует помнить, что тщательная и своевременная запись в протокольную тетрадь — обязательное условие как для успешного и качественного гистологического исследования объекта, так и для общих научных выводов экспериментатора.

Дата добавления: 2015-08-09