Алгоритм окраски.

Изучение палочковидных и извитых форм бактерий

План занятия:

1. Характеристика палочковидных и извитых форм бактерий.

2. Окраска препаратов по Ожешко и Цилю-Нильсену.

Знать:

1. Биологические особенности палочковидных и извитых форм бактерий

2. Методики окраски сложными методами по Ожешко и Цилю-Нильсену.

3. Методики определения подвижности микроорганизмов.

Уметь:

1. Провести микроскопию демонстрационных препаратов палочковидных и извитых форм бактерий, зарисовать микроскопическую картину.

2. Приготовить препарат из споровой культуры, окрасить по Ожешко, зарисовать микроскопическую картину.

3. Приготовить препарат и ВЦЖ, окрасить по Цилю-Нильсену, зарисовать микроскопическую картину.

4. Приготовить препараты «раздавленной» и «висячей» капли, провести микроскопию, зарисовать микроскопическую картину.

Палочковидные бактерии весьма разнообразны по форме. Среди них встречаются прямые, изогнутые, ветвистые. Большинство патогенных микроорганизмов имеют овоидную форму. Исключение составляют цилиндрические палочки возбудителя сибирской язвы, веретенообразные микобактерии туберкулеза. Длина наименьших коккобактерий колеблется от 0,2 до 1,5 мкм, а самых больших от 5 до 10 мкм. Располагаются палочки беспорядочно, попарно в длину, параллельно, под углом друг к другу, цепями. Многие виды патогенных бактерий имеют жгутики и капсулы. Споры образуют бациллы (аэробы) и клостридии (анаэробы). Встречаются Грам положительные и Грам отрицательные. К известным бактериям относятся спириллы, вибрионы, спирохеты.

Морфологический компонент	Его наличие	Значение
Нуклеоид	+	Носитель генетической информации
Клеточная стенка	+	Защитная, формообразующая
ЦПМ	+	Транспорт питательных веществ
Рибосомы	+	Синтез белка
Аппарат Гольджи	-	-
Споры	+-	Защита от внешних условий
Эндоплазматическая сеть	-	-
Капсула	+ -	Защита от иммунной системы

Наличие в бактериальной клетке жиро-восковых веществ обеспечивает ее кислото-, щелоче-, спиртоустойчивость.

Окраска по Ожешко

Сложный способ окраски с целью выявления спор.

Алгоритм окраски.

1.На нефиксированный мазок нанести 0,5% р - р хлороводородной кислот и подогреть на пламени 2-3 мин.

2.Кислоту слить, препарат промыть водой, просушить и зафиксировать над пламенем.

3.На фиксированный мазок нанести карболовый фуксин Циля через полоску фильтрованной бумаги и подогреть до появления паров в теч. 3 -5 мин.

4.Снять бумагу, промыть препарат водой.

5.Нанести 5% р -р серной кислоты или 3% раствор смеси этилового 96 градусного спирта с хлороводородной кислотой на I -2мин. Для обесцвечивания.

6.Промыть водой.

7.Докрасить препарат водным раствором метиленового синего в теч. 3 -5 мин.

8.Промыть водой, высушить.

Микроскопия иммерсионная. Видим — споры красного цвета, вегетативные формы бактерий синие.

Окраска по Цилю-Нильсену

Сложный способ окраски, дифференцирующий бактерии на кислотоустойчивые и некислотоустойчивые.

1. На фиксированный мазок нанести карболовый фуксин Циля через полоску фильтровальной бумаги и подогреть до появления паров в теч. 3-5 минут.

2. Снять бумагу, промыть препарат водой.

3. Нанести 5% раствор серной кислоты или 3% раствор смеси 96° этилового спирта с хлороводородной кислотой на 1-2 мин. Для обесцвечивания.

4. Промыть водой

5. Докрасить препарат водным раствором метиленового синего в теч. 3-5 мин.

6. Промыть водой. Высушить.

Микроскопия иммерсионная. Видим кислотоустойчивые бактерии окрашены в красный цвет, некислотоустойчивые в голубой цвет. Данный способ окраски применяют для обнаружения возбудителя туберкулеза в исследуемом материале.

Дата добавления: 2015-08-03