Молекулярной и клеточной биологии

На фотографиях разные белки, помеченные зеленым флуоресцентным белком показывает расположение различных частей клетки

Методы молекулярной и клеточной биологии обычно применяются для изучения синтеза и расположения белков в клетке. Полезный метод изучения расположения белков использует генную инженерию, чтобы экспрессировать в клетке белковую химеру, состоящую из интересующего белка, соединенного с «репортером», например, зеленым флуоресцентным белком (GFP)^[81]. Расположение белка-химеры в можно увидеть с помощью микроскопа^[82].

Другой метод изучения локализации белков использует известные белки таких органелл, как эндоплазматический ретикулум, аппарат Гольджи, лизосомы и вакуоли и т. п. С помощью флуоресцентных меток, прикрепленных к этим белкам или антител к ним, становится гораздо проще определить локализацию изучаемогоо белка^[83].

Иммуногистохимические методы обычно используют антитела, которые коньюгированы с ферментами, продуцирующими люминесцентный или цветной сигнал, который позволяет сравнить положение и число изучаемого белка в образцах. Более редкой методикой определения расположения белков является центрифугирование клеточных фракций в градиенте сахарозы или хлорида цезия с помощью равновесного центрифугирования^[84][85].

Наконец, один из классических методов — это иммуноэлектронная микроскопия. Эта техника также использует антитела к изучаемому белку, наряду с методами электронной микроскопии. Образец подготавливается для электронной микроскопии, а затем обрабатывается антителами к белку, которые спединены с электро-плотным материалом, как правило, золотом^[86].

С помощью сайт-направленного мутагенеза, исследователи могут изменять аминокислотную последовательность белка и, следовательно, его структуру, расположение в клетке и его регуляцию. С помощью этого метода, используя модифицированные тРНК^[87], можно также ввести в белок искусственные аминокислоты, и сконструировать белки с новыми свойствами^[88].

Дата добавления: 2015-07-15