Глава 2. Материал и методы исследования

2.1. Материал и методы исследования в эксперименте

2.1.1. Общая характеристика лабораторных животных

Экспериментальные исследования выполнены в ЦНИЛ Башкирского государственного медицинского университета и лаборатории Всероссийского центра глазной и пластической хирургии на 20 кроликах породы «Шиншилла».

Задачей экспериментальных исследований служило изучение влияния биологического материала «Аллоплант» на регенеративные процессы железистой ткани молочной железы.

Лабораторные животные были доставлены из питомника НПО «Иммунопрепарат» за 10 дней до опытов. Вес их составил от 2,5 до 3 кг. До и после операции все животные содержались в одинаковых условиях и режиме питания в виварии Башкирского государственного медицинского университета.

Эксперимент заключался в выполнении секторальной резекции двух молочных грудных желез и пластике послеоперационных ран трансплантатом «Аллоплант», соответствующим по объёму резецированной ткани. Непосредственно перед и после операции осуществлялся наружный осмотр, взвешивание животных и динамическое наблюдение.

2.1.2. Методы исследования в эксперименте.

Операции на животных выполнялись под общей анестезией (в соответствии с приказом № 755 МЗ СССР от 12.08.77 г.) путём внутривенного введения кетамина в дозе 2-3 мг/кг массы тела. Анестезия продолжалась в течении 10-12 минут, при этом дыхание было спонтанное, двигательного возбуждения животных не наблюдалось.

Методика операции заключалась в следующем. После предварительного удаления шерсти ножницами, радиальным разрезом иссекался сектор железистой ткани и выполнялся гемостаз. Остаточная раневая полость заполнялась кусочком трансплантата, размеры последнего соответствовали размерам резецированной ткани. Рана ушивалась узловыми швами. Накладывалась спиртовая повязка. Швы на коже снимались на 7 сутки. Средний объём трансплантата составил 0,25 куб.см.

Забор материала на гистологическое исследование осуществлялся на 7, 14, 21, 28, 60, 90 и 180 сутки после операции. Животные выводились из опыта внутривенным введением кетамина в дозе 2 мг/кг массы тела и 20-40 мл воздуха. После забивки проводился наружный осмотр животных, оперированных молочных желёз и внутренних органов.

Материал для гистологического исследования забирался ввиде блоков и помещался в 10% раствор нейтрального формалина, фиксировался в течении 12-14 дней, а затем заливался в парафин. Кроме тканей оперированных молочных желёз брались кусочки внутренних органов.

Гистологические срезы готовились толщиной до 5 микрон, окрашивались гематоксилином и эозином, пикрофуксином по Ван – Гизонну, азуром и эозином по Лилли, фуксиленом по Харту с последующим изучением под биологическим микроскопом при увеличении х75, х150, х500. Гистологические исследования выполнены на базе научно – исследовательской лаборатории Всероссийского центра глазной и пластической хирургии.

Методы лабораторного исследования крови.

Лабораторные исследования крови выполнены в ЦНИЛ БГМУ. В задачу эксперимента входило изучение основных показателей иммунного статуса подопытных животных при трансплантации «Аллопланта». Забор периферической крови проводился из краевой вены уха лабораторных животных до операции, а также на 7, 14, 28, 60, 90 и 180 сутки эксперимента. В полученных пробах гепаринизированной крови и сыворотки крови определялились следующие показатели: общее количество лейкоцитов в счётной камере, полиморфноядерные лейкоциты (псевдоэозинофилы), лимфоциты в окрашенных мазках, Т-лимфоциты методом розеткообразования, фагоцитарная активность лейкоцитов в реакции с латексом с последующим исчислением % фагоцитирующих клеток, активность кислород- зависимого метаболизма лейкоцитов оценивали в спонтанном и индуцированном латексом тестах восстановления нитросинего тетразолия (НСТ – тест), активность комплемента сыворотки крови оценивали на гемолитической системе по 50% гемолизу спектрофотометрически, титры гетероагглютининов в отношении эритроцитов барана определяли в реакции титрования. Исследования выполнены общепринятыми методами (119).

2.2. Общая характеристика клинического материала.

Клинический материал основан на изучении историй болезни 167 больных с доброкачественными узловыми образованиями молочной железы, которые были разделены на 2 группы в соответствии с использованием традиционного способа лечения (контрольная группа – 103 больных) и разработанного способа с применением «Аллопланта» (основная группа – 64 больных). Распределение больных по возрасту представлено в таблице 2.1. Из таблицы видно, что половину (50,3%) составили пациентки в возрасте до 30 лет, а основное количество (97%) – до 40 лет. Средний возраст больных составил 30,4±0,6 лет. При этом подавляющее большинство заболевших контрольной группы (97,1%) и основной группы (96,9%) было в возрасте до 40 лет (рис.2.1.).

Продолжительность заболевания у более половины заболевших составила от 1 месяца до 1 года (66,1% в контрольной группе и 60,9% в основной группе) (табл. 2.2.).

Таблица 2.1.Распределение больных с узловыми

Дата добавления: 2015-09-05