Приготовление стандартных растворов

1.Отбирают мерной пипеткой 20 см³ раствора №1, содержащего 20 мкг рибофлавина в 1 см³, помещают в мерную колбу на 100 см³, доводят дистиллированной водой до метки, закрывают пробкой и перемешивают. Исходный раствор №2 содержит 4 мкг/см³ рибофлавина.

2. Для приготовления стандартных растворов в 4 мерные колбы на 100 см³ бюреткой отмеривают порции раствора №2 и доводят до метки дистиллированной водой:

№ колбы	Раствор в см^3	Содержание рибофлавина в мкг/см^3
	5,0	0,2
	10,0	0,4
	15,0	0,6
	20,0	0,8
контрольный раствор	х	х выдает преподаватель

3. Растворы перемешивают, переливают в измерительные пробирки и ставят в гнезде ящика для защиты от света.

4. Приготовляют раствор рибофлавина из таблетки, полученной от лаборанта. Для этого помещают таблетку в мерную колбу на 100 см³,добавляют горячей (70- 80°C) дистиллированной воды до 2/3 объема и растворяют таблетку. Охлаждают колбу до комнатной температуры и заполняют дистиллированной водой до метки, закрывают пробкой и перемешивают. Отбирают пипеткой 3 см³ этого раствора в мерную колбу на 100 см³ №6, добавляют дистиллированной воды до метки и перемешивают. Из колбы №6 раствор переливают в пробирку №6 и ставят в гнездо ящика.

Измерение флуоресценции на флуориметре ЭФ – ЗМА

1. Помещают в измерительную камеру пробирку с раствором IV. Проверяют настройку на нуль и нажав клавишу заслонки, устанавливают рукояткой стрелку на 80 делений.

2. Вынимают пробирку IV и, последовательно помещая в камеру пробирки I, II, III, IV, V и VII, измеряют интенсивность их лиминисценции дважды. Флуориметр должен работать не более 30 минут, после чего его выключают для охлаждения.

3. По величинам интенсивности стандартных растворов I, II, III, IV строят градуировочный график, имеющий прямолинейный характер.

4. Используя его определяют содержание рибофлавина в контрольном растворе (пробирка V). При удовлетворительных результатах (ошибка не должна превышать 2-3%) приступают к определению его в таблетках.

5. Проводят гашение люминесценции рибофлавина, предварительно повторив измерение растворов VI и VII. Для гашения восстанавливают рибофлавин гидросульфитом натрия. Добавляют в пробирки по 0,5 г гидросульфита, закрывают пробкой и перемешивают 30 сек.

6. Проверяют настройку прибора по стандартному раствору IV и снова измеряют свечение в прбирках VI и VII. Если стрелка прибора отклонилась на 0,5-1 деление, считают полученную ранее величину интенсивности правильной. При значительном отклонении стрелки его учитывают при содержании вещества.

Дата добавления: 2015-08-20