Вопрос 22

Определение анаэробов в мясе

Для выявления анаэробов поверхность мяса двух сортов (свежее и несвежее) прижигают нагретым шпателем, стериль­ным ножом делают надрез и берут из глубины по небольшому кусочку. Соблюдая правила асептики, опускают их в пробирки с расплавленным и предварительно охлажденным до 50°С МПА. Вращая пробирки между ладонями, следят, чтобы ку­сочки мяса осели на дно пробирок.

Опытные пробирки с МПА, содержащие свежее и несвежее мясо, помещают в термостат при 40^оС. После инкубиро­вания посевов в термостате в течение нескольких дней пробир­ки просматривают визуально.

Если мясо несвежее, на МПА развиваются газообра­зующие анаэробные формы и в среде обнаруживаются разры­вы агара в результате выделения микроорганизмами газа.

В пробирках со свежим мясом столбик МПА будет плотным, не содержащим разрывов и трещин, так как газообразующие анаэробные формы в нем не развиваются.

Вопрос 30

Редуктазная проба с резазурином длится не более 1 ч.

В стерильные пробирки наливают 10 мл анализируемого моло­ка, 1 мл 0,0005%-ного водного раствора резазурина, тщательно перемешивают и помещают на водяную баню при 38-40 °С. Изменение окраски учитывают через 20 мин и через 1ч (табл. 4).

Таблица 4.

Классификация молока по редуктазной пробе с применением

резазурина

Качество молока	Количество бактерий в 1 мл молока, млн	Продолжитель­ность измене­ния цвета, час	Окраска молока
Хорошее Удовлетвори­тельное Плохое Очень плохое	Менее 0,5 От 0,6 до 4 От 4 до 20 Более 20	1 1 1 20мин	Сине-стальная Сине-фиолето­вая или сире­невая Розовая или белая Белая

Пробирки с молоком, обесцвеченным через 20 мин, убирают, остальные находятся в водяной бане до конца опыта.

2.
Определение общего количества бактерий в молоке

Вначале готовят разведения (10^-1-10^-9), для чего из отобран­ной пробы молока стерильной пипеткой берут 1 мл и перено­сят в пробирку с 9 мл стерильной водопроводной воды (техни­ку приготовления разведений см. в.5.1.1). Затем при глубинном Посеве из разведений молока, обесцвечивающегося с резазурином менее чем через 20 мин, т. е. разведений 10^-4; 10^-5 и 10^-6, берут отдельной стерильной пипеткой по 1 мл суспензии и вносят в стерильные чашки Петри в двух- и трехкратной по­вторности.

При обесцвечивании молока с резазурином более чем че­рез 20 мин посев делают из разведений 10^-3, 10^-4, 10^-5. В чаш­ки с суспензией вносят расплавленный и охлажденный до 45- 50°С МПА. Суспензию с агаром перемешивают и чашки Пет­ри с посевом помещают в термостат при 28-30^оС. После 2-дневной инкубации подсчитывают колонии бактерий в чаш­ках. Количество дрожжей и плесневых грибов подсчитывают на 4-й день. Число колоний умножают на степень разведения и определяют среднее арифметическое их число после учета колоний в трех чашках. Это соответствует числу клеток в 1 мл молока.

Вопрос 23 Отбор проб.Исследуемую рыбу и крупные экземпляры нерыбных объектов морского промысла отбирают в количестве не более 3 штук. От каждого экземпляра из нескольких мест вырезают кусочки с кожей и мышцами, не затрагивая кишечник (за исключением отбора проб на определение наличия парагемолитических вибрионов), площадью около 4 см², толщиной 4-5 мм, эти кусочки рыбы помещают во взвешенный стакан. Вновь взвешивают и по разности весов устанавливают массу отобранной пробы. Пробу измельчают и заливают стерильной жидкостью в таком количестве, чтобы получить конечное разведение 1:10.

Подготовленную пробу тщательно перемешивают, взвесь отстаивают в течение 5 мин. Надосадочную жидкость используют для приготовления последующих разведений. 1 мл из исходного разведения (10^-1) переносят в пробирку с 9 мл стерильного раствора для разведения, не прикасаясь к поверхности жидкости в этой пробирке, перемешивают новой стерильной пипеткой, и содержимое в количестве 1 мл переносят в следующую пробирку. В результате исследуемый продукт оказывается разведенным в 10, 100 и более раз. Степень разведения навески для высева на плотные питательные среды выбирают так, чтобы общее количество колоний, выросших на чашке, колебалось в пределах от 30 до 300. Посев проводят по следующей методике: из двух последних разведений в чашки Петри вносят по 1 мл разведенного материала или смыва, заливают 15 мл расплавленного и охлажденного до 50⁰С агара, перемешивают (из каждого разведения делают посев в две-три чашки). После застывания МПА, чашки переворачивают вверх дном и помещают в термостат при 30⁰С на 72 часа. В некоторых случаях допускается предварительный учет колоний через 48 ч с последующим подсчетом через 72 ч. Количество микроорганизмов в 1 г (1мл) продукта определяют по формуле:

К = А В С, где

К – количество микроорганизмов в 1 г, КОЕ;

А – среднее арифметическое число колоний в чашке;

В – степень разведения

С – масса, объем, поверхность (г, мл)

Для вычисления среднего арифметического нельзя использовать посевы, где количество выросших колоний на чашках менее 30.

· При отсутствии роста колоний результаты фиксируют, таким образом, *Количество микроорганизмов менее 1*

- Если при посевах оказалось, что во всех разведениях на засеянных чашках менее 30 колоний, в результате анализа рекомендуется написать: *Рост единичных колоний при посеве (указать количество засеянного продукта)*.

· Если на чашках, более чем на 1\2 их площади, имеется расползающийся рост спорообразующих микроорганизмов, подсчет изолированных колоний невозможен, в результате анализа следует написать: *Рост спорообразующих микроорганизмов*. Результаты выражают в колониеобразующих единицах – КОЕ (мл, г)

Дата добавления: 2015-07-16