Читайте также:
|
Принцип: производится подсчет тромбоцитов в камере Горяева с применением в качестве разводящей и гемолизирующей жидкости раствора оксалата аммония. При подсчете используют фазовоконтрастную микроскопию.
Реактивы: 1% раствор оксалата аммония.
Ход определения: исследование можно проводить как в крови, полученной из пальца, так и в стабилизированной цитратом венозной крови. В последнем случае полученный при подсчете результат умножают на коэффицент 1,1 (учитывают разведение венозной крови раствором цитрата натрия – 9:1).
Разведение крови. Самым удобным и точным является способ разведения крови в пробирках для этого, в предварительно высушенную чистую силиконированную или пластиковую (полистирол) пробирку пипеткой отмеривают 1,98 мл. 1% раствора оксалата аммония и осторожно вносят в нее 0,02 мл крови. В течение 1-2 мин содержимое пробирки тщательно перемешивают без вспенивания. Заполняют две камеры Горяева и на 10-15 мин помещают для оседания тромбоцитов во влажную камеру (чашку Петри со смоченной фильтровальной бумагой или марлей). В каждой камере подсчитывают тромбоциты в 25 больших квадратах. Фазовоконтрастная микроскопия проводится при помощи обычного микроскопа, осветителя ОИ-19 и устройства для наблюдения методом фазового контораста КФ-1 или КФ-4.
Подготовка микроскопа: после установки на микроскопе фазовых объективов и фазового конденсора производят фокусировку объективов 40* на сетке камеры Горяева. Устанавливают освещение и центрируют изображение фазовой пластинки и кольцевой диафрагмы. Микроскопию производят с зеленым светофильтром. При работе с фазовоконтрастной установкой необходимо пользоваться камерами одного типа, т.к. фокусировка оптических систем зависит от толщины стекла камеры.
Расчет числа тромбоцитов в 1 мкл крови. Среднюю арифмитическую величину из двух параллельных определений умножают на 1000 (площадь 25 больших квадратов – 1 мм2, высота камеры – 0,1 мм., разведение 1:100; следовательно, количество тромбоцитов должно быть умножено на 1*10*100=1000).
Нормальные пределы колебаний числа тромбоцитов в крови у человека составляют от 170 до 350x109 /л. Ошибка метода +6,5%.
Подсчет тромбоцитов в крови и определение их размера в мазке - важная часть диагностики тромбоцитопении, эссенциальной и полицитемической тромбоцитемии, ДВС-синдрома, тромботической тромбоцитопенической пурпуры и других микротромбоваркулитов, нарушений гемостаза при аутоиммунных формах патологии (СКВ, АФС, др.) и при гепатолиенальном синдроме. При наследственных тромбоцитопатиях наблюдают формы с микроцитозом (синдром Вискотта-Олдрича) и преобладанием гигантских форм кровяных пластинок (аномалии Бернара-Сулье и Мей-Хеглина), а также формы без изменения размеров этих клеточных элементов.
Исследование агрегации тромбоцитов. Исследуется процесс агрегации в богатой тромбоцитами плазме с добавлением или без добавления индукторов агрегации. В качестве индукторов агрегации используются АДФ, адреналин, коллаген, тромбин и ряд других агентов.
Дата добавления: 2015-07-11; просмотров: 192 | Нарушение авторских прав