Исследование микроэлементов

На современном этапе развотия учуения и заболепаииях кожи опре­деление содержания микроэлементов носит научный и практический характер. Существует несколько методов; в практике чаще используют колориметрический, спекторографисекий и гистохимический. Материалом для исследования служат биопсированная ткань, кровь, моча. Кал, сыворотка, которые предварительно высушивают и озоляют в муфельной печи. Золу используют для колориметрического и спектрографического исследований. Для гистохимического исследования биоптат кожи закрепляют обычными или специальными фиксаторами готовят гистологические препараты по определенным методикам в зависимости от цели исследования.

Количество микроэлементов определяют чаще методом эмиссион­ного спектрального анализа. Кровь для исследования берут из локтевой вены утром натощак в количестве10мл. Шприц предварительно 2 раза промывают дистиллированной водой. Накануне взятия крови пробирки обрабатывают хромовой смесью, многократно прополаскивают проточной водой, и помещают в сушильный шкаф.

Kpoвь помещают в химически чистые фарфоровые тигли (обработанные таким же способом, как и пробки) и высушивают в сушиль­ном шкафу при температуре 80 ^СС. а затем озоляют в платиновых или фарфоровых чашках, обработанных концентрированной хлористоводородной кислотой, промытых проточной водопроводной и дистиллированной водой. Озоление производят в муфельной печи при температуре от 400 до 450 С.

Для определения содержания меди, марганца, кремния, алюминия, титана и железа в крови пользуются одним из наиболее точных и чувствительных методов – эмиссионным спектральным анализом, при котором мало расходуется исследуемого вещества и можно одновременно определить количество нескольких микроэлементов.

Для получения спектра элементов исследуемых проб пользуются отечественным спектрографом ИСП-22 с генератором переменного тока, смонтированным по схеме Г.А.Бабенко и К.В.Милославского (1961).. Порошок из спектрально чистого угля, который служит основой кратера такого закрытого электрода, предупреждает возможность сплавления пробы. Таким образом, обеспечивается полное сжигание пробы без потери анализируемого вещестоа.

Спектрография испытуемых проб производится в следующей по­рядке: шкала, железо, испытуемые пробы, стандарты, железо, шкала. Экспозиция для шкалы и железа равняется 20 с, для испытуемых проб и стандарта — 2 мин. Испытуемые пробы подвергают спектрографии 2 —3 раза, при расчетах пользуются средними данными. Спектры сни­мают на спектрографические фотопластинки для научных целей разме­ром 9X12 си², типа П. светочувствительность—II единиц но ГОСТ 2814-50. После окончания съемки фотопластинку проявляют н закреп­ляют обычными методам;! (и качестве проявителя используют метол-гидрохинон, в качестве закрепителя — гипосульфит). В результате тех­нической обработки на фотопластинке получают спектральные линии элемен гон, располагающихся в интервале длин волн 228,3—500.0 им. Полученные спектры расшифровывают путем сопоставления положения спектральных лиши! в испытуемых спектрограммах с положением ли­ний известных длин поли в спектрограммах железа. Для облегчения расшифровки спектрограмм пользуются атласом дуговых спектров эле­ментов С. К. Калинина с соавторами (1959). Определение линий испы­туемых микроэлементов производят по характерным длинам волн всей серии, а фотометрию — по следующим: марганец — 280,1 им, крем­ний— 283,2 ни, алюминий—303,2 нм, титан — 323,7 им, медь —327,4 нм На этих длинах ноли спектральные линяй изучаемых элементов получа­ются наиболее интенсивными и удобными для исследования. Качествен­ное определение микроэлементов производят с помошью спектрального микроскопа ЛШР-20 и спектроскопа ПС-18. Для количественного опре­деления мнкроэлемепюв и испытуе>шх пробах готовят серию стан­дартов с содержанием!!спытуемых элементов в количествах 1, 0,1, 0,01, %.

Стандарты готовят на искусственной солевой основе, близкой по составу микроэлементов к испытуемой среде. Приготовление солевой основы н прибавление к ней различных элементов необходимо потому, что, по данным многих авторов, интенсивность спектральных линии за­висит от сопутствующих элементов.

Состав соленой основы рассчитывают из среднего содержания мнк-р^лс'ленгоа в кропи животных. Для приготовления 100 г соленой ос-нивы стандарта для кроин берут: NaCI — 45,1 г,, СаО —2 г, Mj>O —0,4 г. Смесь тщательно растирают и агатовой ступ­ке. После прибавлений к солевой основе солей микроэлементов в соот­ветствующих количествах стандарты также тщательно растирают в ага­товой ступке и сохраняют п биксах с притертой пробкой. Все соли, предназначенные для прнготопления стандартов, проверяют спектраль­но на чистоту и при наличии в их составе даже ничтожных примесей посторонних элементов считают непригодными. Количественное содержание микроэлементов в испытуемых пробах определяют по методу Нитчи путем сравнения в микрофотометре МФ-2 интенсивности зачер-нения соответствующих линии в спектрограммах стандартов.

По результатам фотометрии строят градуированный график. При его построении на оси ординат откладываюг показания микрофотомет­ра либо логарифм относительной интенсивности линии анализируемого элемента, а на оси абсцисс — логарифм из чисел, указывающих на про­центное содержание анализируемого элемента п стандартах. По гра­фику определяют процентное содержание микроэлементов в пробе. При спектрографических методах исследования микроэлементов в био­логических материалах С. Г. Богмполов с соавторами (1958), Г. Д. Литовченко и С. Л. Щиплщш (1958) допускают среднюю относительную ошибку до 15 %, а Б. Е. Гордон (1962) —от 3 до 15 '-'а. М. М. Ищенко (1961) при определении концентрации меди отмечает среднюю ошиб­ку В пределах от 7,4 до 1-1,98%. По нашим данным, относительная ошибка методики для марганца —6,2 %, меди — 7 It. титана — 9 %. алюминия—11 % н кремния — 12*0. Аналогично приготавливают ис­следуемую золу и стандарты для других биологических сред (кожа, сы­воротка крови, моча, кал).

Колориметрический метод, предложенный Г. А. БаЕенко, позволяет Н одной пробе биологической среды определить четыре биоэлемснта (медь, цинк, кобальт, железо). Расчет ведут на сырое вещество или юлу. Этот метод более громоздкий, по более точный и используется чаще в научных целях.

Гистохимическое исследование микроэлементов проводится чаще всего с целью определения гистотонографии биоэлемента в очаге по­ражения ц окружающей его ткани. Этот метод также используется в научных целях.

Важная роль микроэлементов п жизнедеятельности организма обще­известна и доказана. Определенное значение микроэлементы также име­ют в поддержании нормального состояния кожи и ее придатков. На­пример, медь участвует в процессах ороговения, иигмеитообразования; количество кремния повышается при старении кожи; недостаточность цинка отмечена при трофических язвах, опухолях кожи; при отрав­лении свинцом изменяется цвет кожи, повышается се фогочувствитель-НОстЬ. Доказано нарушение содержания микроэлементов в коже при вульгарной пузырчатке, коллагенозах, алопеции, псориазе, экземе, ней­родермите, почесухе и других дерматозах.

41. Исследование на акантолитические [Тцанка] клетки

Впервые цитологический метод диагностики пузырных дерматозов предложил в 1947 г. А. Тцанк для обследования больных вульгарной пузырчаткой. Этот метод незаменим при дифференциальной днапюсти-u пузырчатки п герпетиформного дерматоза Дюринга.

С поверхности дна свежего пузыря скальпелем или путем прикла­дывания и легкого надавливания кусочком простерилизоваиной Кипя­чением ученической резинки (метод отпечатков) берут материал и переносят на стерильные обезжиренные предметные стекла, фиксируют в течение 1 мин метиловый спиртом, высушивают при комнатной тем­пературе я окрашивают по Романовскому — Гимзе; наносят на 20— 25 мин с пе же при гото пленный раствор азур-эоэина, затем смывают кра­ситель дистиллированной водой и высушивают мазки при комнатной температуре. После приготовления и окраски препараты исследуют под микроскопом при увеличении 10x40. Аканалитические клетки меньше нормальных эпителиальных клеток, округлой формы, с крупным ядром, окрашенным к ннтенсипно-фиолетопый или фиолетово-синий цвет, за­нимающий почти всю клетку. В ядре видны два или несколько крупных Солее спетлой окраски ядрышек. Цитоплазма как бы оттеснена к пери­ферии (ободок концентрации), резко базофнльна, ближе к ядру — светло-голубая. Количество клеток различное: от единичных до боль­шого числа виде скоплений. Встречаются также бесформенные клетки с меньшими изменениями, без четкого ободка концентрации.. Д. Шеклаков (1961) рассматривает их как переходные форму от нормальных эпителиальных клеток к акантолнтическим.

42. Исследование на клетки красной волчанки [LE-клетки]

Диагностический и прогностический тест при коллагенозах, чаще всего системной красной волчанке. Существует несколько методов обна­ружения клеток красной волчанки: исследуют периферическую кровь больного, используют методы двухчасового сгустка, с применением ре­зинового кольца, определения клеток с применением антйкоагулянтов, 1,Е-пробу на стекле. Наиболее удобна и точна для практических целей методика двухчасового сгустка. У больного берут 10—15 мл кроаи из вены и помещают в стерильную пробирку, сохраняя в термостате при температуре 37 "С. Затем отделяют сгусток от стенок пробирки топкой металлической сеткой и полученный материал центрифугируют. При центрифугировании получают три слоя. Верхний слой (плазму) отса­сывают пипеткой и удаляют, второй (лейкоциты) осторожно отсасывают и делают несколько матков, которые окрашивают обычным для кропи методом и рассматривают под микроскопом при увеличении 10X8, ^а подозрительные места — при увеличении 10X40. Пробу счи­тают положительной при обнаружении 2—3 типичных клеток красной волчанки, которые значительно больше нормальные лейкоцитов; ядро их интенсивно окрашено и отодвинуто к периферии; и центре, в виде розетки, более выражена окрашенная фагоцитированная масса. Резуль­тат считают отрицательным и том случае, когда при просмотре несколь­ких сотен лейкоцитов в 2—3 мазках клетки красной волчанки не об­наруживают.

Дата добавления: 2015-07-10