Приготовление фиксированного мазка микроорганизмов, окрашивание по Цилю-Нильсену

Приготовление фиксированного мазка микроорганизмов, окрашивание по Граму

Приготовление фиксированного мазка. Предметное стекло прокаливают в пламени спиртовки для лучшего обезжиривания. По центру остывшего стекла микробиологической петлёй, простерилизованной в пламени спиртовки, наносят мазок исследуемого материала. Если культура микроорганизма выращена на плотной питательной среде, предварительно на стекло наносят каплю водопроводной воды, в неё микробиологической петлёй вносят небольшое количество материала и делают мазок. Мазок высушивают на воздухе и фиксируют. Обычно мазки фиксируют термическим способом, проводя предметное стекло 3–5 раз через пламя спиртовки мазком вверх. После фиксации мазок окрашивают, для чего растворы красителей наносят непосредственно на мазок; Фиксированные мазки последовательно окрашивают генциановым фиолетовым (1–2 минуты) и раствором Люголя (1 минута). Затем мазок промывают 96 % этанолом и водой. После промывания дополнительно окрашивают мазок раствором карболового фуксина (30 секунд), промывают водой и микроскопируют в иммерсионной системе. Грамположительные бактерии окрашиваются в сине-фиолетовый цвет, а грамотрицательные – в розовый.

Приготовление фиксированного мазка микроорганизмов, окрашивание по Цилю-Нильсену

Приготовление фиксированного мазка. Предметное стекло прокаливают в пламени спиртовки для лучшего обезжиривания. По центру остывшего стекла микробиологической петлёй, простерилизованной в пламени спиртовки, наносят мазок исследуемого материала. Если культура микроорганизма выращена на плотной питательной среде, предварительно на стекло наносят каплю водопроводной воды, в неё микробиологической петлёй вносят небольшое количество материала и делают мазок. Мазок высушивают на воздухе и фиксируют. Обычно мазки фиксируют термическим способом, проводя предметное стекло 3–5 раз через пламя спиртовки мазком вверх. После фиксации мазок окрашивают, для чего растворы красителей наносят непосредственно на мазок; На мазки помещают фильтровальную бумагу, заливают препарат карболовым фуксином Циля и 2–3 раза подогревают до появления паров, держа стекло высоко над пламенем. Препарат остужают, промывают водой и обесцвечивают погружением в стаканчик с 0,5 % раствором серной кислоты (погружают, не задерживая, 2–3 раза). Препарат вновь тщательно промывают водой и докрашивают метиленовым синим по Леффлеру в течение 3–5 минут. Затем препарат вновь промывают водой, высушивают и исследуют в иммерсионной системе. При строгом соблюдении режима окрашивания кислотоустойчивые бактерии приобретают красный цвет, а не кислотоустойчивые – синий.

Дата добавления: 2015-08-18