Oпределение АПТВ (АЧТВ).

Принцип метода: Определяется время свертывания плазмы крови в условиях стандартизированной контактной (каолином) и фосфолипидной (кефалином) активации процесса в присутствии ионов кальция.

Реактивы:

1. Кефалин (лиофильно высушенный фосфолипидный компонент) - 2 флакона;

2. Каолин (концентрированная суспензия 40:1 в дистиллированной воде), 1,0 мл - 1 флакон;

3. Буфер трис-НСI (концентрированный 20:1 раствор, 1 М), 10 мл - 1 флакон;

4. Кальция хлорид (концентрированный 20:1 раствор, 0,5 М) - 10 мл - 1 флакон..

Оборудование:

коагулометр (при его отсутствии секундомер, термобаня +37 С);

пипетки на 0,1мл и 5,0 мл;

пробирки стеклянные;

вода дистиллированная;

цилиндр мерный вместимостью 200мл;

перчатки резиновые хирургические.

Бедная тромбоцитами плазма получается для определения АТПВ (АЧТВ) и каолинового времени бедной тромбоцитами плазмы. Богатая тромбоцитами плазма может быть использована для определения каолинового времени в такой плазме (или АВР).

Приготовление реагентов:

1. Разведение кефалина

Во флакон с кефалином внести 2,0 мл д. воды и растворить содержимое при комнатной температуре, перед использованием должен быть выдержан 60 мин;

2. Приготовление АПТВ реагента.

Концентрированный буфер трис-НСI и концентрированную суспензию каолина количественно перенести из флаконов в мерный цилиндр и общий объем довести дистиллированной водой до 200 мл. В результате получают рабочую суспензию каолина.

Для приготовления АПТВ-реагента смешать в пробирке 0,1 мл раствора кефалина с 2,0 мл рабочей суспензии каолина. Полученный АПТВ реагент можно использовать не более 1 дня.

3. Приготовление рабочего раствора хлорида кальция.

В день исследования, в соответствии с потребностью, концентрированный раствор хлорида кальция развести д. водой в 20 раз (1 объем конц. Раствора + 19 объемов воды).

Ход определения:

1. Коагулометрический вариант:

В кювету внести 0,1 мл исследуемой плазмы и прогреть 1 минуту. Затем добавить 0,1 мл АПТВ реагента, имеющего комнатную температуру. Через 3 минуты к смеси добавить 0,1 мл прогретого хлорида кальция и зарегистрировать время свертывания.

Норма: 32-42секунды.

Мануальный вариант.

К 0,1 мл исследуемой плазмы, взятой в пробирку, добавить 0,1 мл АПТВ реагента и поместить пробирку на водяную баню при 37 С. Через 3 минуты к смеси добавить 0,1 мл прогретого хлорида кальция и включить секундомер. Достать пробирку и отметить время свертывания при периодическом покачивании.

Норма: 28-38 секунд.

Клинико-диагностическое значение.

Определение АПТВ используется для выявления гипер- и гипокоагуляционного сдвига, контроля за гепаринотерапией при тромбозах, тромбоэмболиях и ДВС-синдромах различной этиологии, для диагностики гемофилии (дефицит факторов VIII, IX, XI), болезни Виллебранда.

Оснащение лаборатории.

ВСПОМОГАТЕЛЬНЫЙ ПАРК ОБОРУДОВАНИЯ

Наименование ЛО(Тип, Модель)	Завод- изготовитель, фирма, страна	Год ввода	Кол-во
Микроцентрифуга «Microfuge 22R»	США, «Бекман Культер Инк.»
Центрифуга лабораторная «Allegra Х-22R»	США, «Бекман Культер Инк.»
Центрифуга универсальная «Allegra Х-12R»	США, «Бекман Культер Инк.»
Лабораторная центрифуга LMC-3000	Латвия, ЗАО «Вектор-Бест»
Термостат медицинский TW-2.02.	Латвия, «Elmi Ltd.»
Счетчик лабораторный «С-5»	Россия, «Стимул Плюс»
Ротатор «Мulti RS-60»	Латвия, «BioSan»
Шейкер мини рокер «MR-1»	Латвия, «BioSan»
Секундомер механический "Агат"	Россия, «Златоустовский часовой завод»
Ультразвуковая мойка «FinnSonik m08»	Финляндия, «FinnSonic»
Суховоздушный шкаф-стерилизатор «ЕD-53»	Германия, «Биндер ГмбХ»
Посудомоечная машина «Deko 25»	Финляндия, «Франке Финланд Ою»
Система водоподготовки «Millipore Еlix 35»	Франция,«Millipore S.A.S.»
Морозильник «SANYO MDF-U333»	Япония, «SANYO Electric C.»
Шкаф холодильный «Polair ШХ-0,5 ДС»	Россия, «Завод Совиталпродмаш»
Облучатель рециркулятор закрытого типа - «Дезар-3»	Россия, «Кронт-М»
Облучатель рециркулятор закрытого типа - «Дезар4»	Россия, «Кронт-М»
Термометр сельскохозяйственный «ТС-7-М-1»	Украина, «Стеклоприбор»
Гигрометр психометрический «ВИТ-2»	Украина, «Стеклоприбор»
Пылесос «LG V-C20261HQ»	Китай, «LG»
Кондиционер «Dantex RK-12SDM2» (3.2кВт)	«нет свед.»
Кондиционер «Dantex RK-24SDM3» (7.0кВт)	«нет свед.»
Шкаф вытяжной	«БиоМебель»
Дозатор	«BIOHIT OYJ», Финляндия

ОСНОВНОЙ ПАРК ОБОРУДОВАНИЯ

Наименование ЛО (Тип, Модель)	Завод- изготовитель, фирма, страна	Год ввода	Кол-во
Автоматический биохимический анализатор «AU 480»	США, «Бекман Культер Инк.»
Анализатор гемостаза «Sysmix СА 1500»	Япония, «Sysmix Corporation»
Автоматический иммунохимический анализатор «Access 2»	США, «Бекман Культер Инк.»
Автоматический иммунохимический анализатор «Architect I1000sr»	США, «Эббот Лэбораториз.»
Автоматический гематологический анализатор «LH 500»	США, «Бекман Культер Инк.»
Автоматический гематологический анализатор«МЕК - 6410»	Япония, «Nihon Kohden Corporation»
Автоматический гематологический анализатор «Мicros 60»	Франция, «ABX Diagnostics»
Анализатор биохимический «Accutrend Plus»	ФРГ, «Рош Диагностика ГмбХ.»

Группа _____________

Ф.И.О. ___________________________________

№	Виды работ и навыки	Количество
1.	Знакомство с лабораторией, персоналом, аппаратурой, прохождение «Техники безопасноти»
2.	Приготовление реактивов для калибровки аппаратов.
3.	Работа с биохимическим анализатором.
4.	Определение Fib, D-Dimer, гликолизированный гемоглобин.
5.	Иммунологические исследования плазмы крови на аппарате.
6.	Микрореакция на силифилис, определение гепатитов А и В, ВИЧ на аппарате.
7.	Калибровка аппарата для биохимического анализа плазмы крови.
8.	Определение протромбинового времени.
9.	Определение АПТВ (АЧТВ).
10.	Определение тромбинового времени.
11.	Работа с системой (ЛИС), регистрация результатов.	Очень много
12.	Работа с центрифугой	Очень много

Итоговая оценка производственной практики:

___________________________

«______»___________________2013г.

Подпись непосредственного

руководителя практики ___________ _______________________

(подпись) (Ф.И.О.)

Подпись методического

руководителя ___________ ___ ___________________

(подпись)(Ф.И.О)

Дата добавления: 2015-07-15