МНС-глав.компл.гистосовм 2 страница

25.Т-хелперы. Регулир. Р-ции как врожден, так и приобретен. Им-та, и позволяют определять тип ответа, который организм окажет на конкретный чужеродный материал. Эти клетки не проявляют цитотоксичности и не участвуют в уничтожении инфицированных клеток или непосредственно возбудителей. Вместо этого, они управляют иммунным ответом, направляя другие клетки на выполнение этих задач.T-хелперы экспрессируют T-клеточные рецепторы (ТКР), которые распознают антигены, связанные с молекулами II класса главного комплекса гистосовместимости. Комплекс молекулы главного комплекса гистосовместимости с антигеном также распознается корецептором клеток-хелперов CD4, который привлекает внутриклеточные молекулы T-клетки (например, Lck), ответственные за активацию T-клетки. T-хелперы обладают меньшим чувствительностью к комплексу молекулы главного комплекса гистосовместимости и антигена, чем T-киллеры, то есть для активации T-хелпера требуется связывание гораздо большего количества его рецепторов (около 200—300) с комплексом молекулы гистосовместимости и антигена, в то время как T-киллеры могут быть активированы после связывания с одним таким комплексом. Активация T-хелпера также требует более продолжительного контакта с антиген-презентирующей клеткой. Активация неактивного T-хелпера приводит к высвобождению им цитокинов, которые оказывают влияние на активность многих видов клеток. Цитокиновые сигналы, создаваемые T-хелперами, усиливают бактерицидную функцию макрофагов и активность T-киллеров. Кроме того, активация T-хелперов вызывает изменения в экспрессии молекул на поверхности T-клетки, в частности лиганда CD40 (также известного под обознач CD154), что создает дополнительные стимулирующие сигналы, обычно требуемые для активации вырабат антитела B-клеток.

32.Механизмы распознования антигена.
Чтобы развился иммунный ответ, внешние антигены сначала должны распознаться иммунной системой. Механизмы распознавания недостаточно изучены, они зависят от характера (типа) антигена, пути проникновения его в организм и т.д. Оптимальный иммунный ответ на наибольшее количество антигенов возникает только после взаимодействия антигена с макрофагами, T- и B-лимфоцитами. Макрофаг при этом играет роль клетки, У обрабатывающейФ антиген. Дендритические ретикулярные клетки в лимфоидных фолликулах и интердигитирующие ретикулярные клетки в паракортикальной зоне лимфатических узлов, как предполагается, также являются специализированными макрофагами, приспособленными для УобработкиФ антигенов для B- и T-клеток соответственно (см. ниже).
«Обработка» заключается в том, что поглощенный макрофагом антиген вновь выводится на его поверхность в комплексе с молекулой MHC (Major Histocompatibility Complex Ц главного комплекса гистосовместимости).
Рецепторы для антигенов на T-клетках распознают комбинацию Уантиген-молекула МНСФ на макрофаге, что приводит к активации Т-клетки и высвобождению различных лимфокинов. T-хелперы распознают антиген в комплексе с молекулой MHC II класса, а T-супрессоры Ц с молекулой MHC I класса. Типичная форма активации В-клетки (T-клеточнозависимая) включает в себя взаимодействие ее и с макрофагами, и с T-клетками. B-клетки распознают некоторые поливалентные антигены непосредственно (T-клеточнонезависимые антигены).

35. Система комплемента- это совокуп белков сыворотки крови, циркулир в неактивном состоянии. Бол-во из них явл протеазами. При попадании (или образовании) в ткани (кровь) активаторов (структуры Г+ или Г- бактерий, им комплексы) происходит активация системы - каскадное взаимодействие белков системы комплемента с образованием промежуточных продуктов, с образов повреждений в мембране клеток-мишеней, нейтрализацией вирусов. В систему входит более 25 белков, из кот девять - комплементные белки (С1 -С9), а остальные -факторы (B, D, P, H). При активации происх расщепл молекул комплементных белков на фрагменты a (меньший) и b (больший). Меньший фрагмент, как правило, активный. Многие фрагменты обладают фермент св-вами (их обозначают сверху линией - С1), могут явл ингибиторами, активаторами и медиаторами различных процессов. Центральное место в системе комплемента занимает белок С3. При отсутствии каких либо активаторов происходит его медленный распад: С3 С3a + C3b. Фрагмент C3b фиксируется на поверхности микроорганизма При появлении какого - либо активатора распад С3 происх быстрее благодаря запуску систем активации комплемента по классическому или альтернативному путям.Активаторами альтернативного пути явл, компоненты м/о, факторы В, D и пропердин также являются необход участниками. Система активации обладает положит обратной связью.В норме в крови постоянно циркул некот кол-во С3b и В. Эти белки комплемент друг другу и соедин в комплекс С3bB, от кот под влиянием фактора D отщепл фрагмент Ва, т.о. образ комплекс С3bBb, который катализирует распад С3 на фрагменты. Пропердин удлиняет жизнь этого комплекса.

В случае длительного инфекц процесса к инфекц агенту образ антитела и комплекс “агент антитело” (им комплекс) явл активатором системы комплемента по классическому пути.В норме в крови циркулир фрагмент белка С1 - С1qrs, который под влиянием им комплекса становит активным (С1qrs). Этот фрагмент катализирует расщепление С4 на С4а и С4b. Фрагмент С4b соедин с белком С2, образовав комплекс С4b2 становится субстратом для С1qrs, от него отщепл фрагмент C2b, а образов комплекс C4b2a катализ распад С3 на фрагменты.

26.Т-киллеры. представляют собой подгруппу T-клеток, функцией которых является разрушение собственных клеток организма, инфицированных вирусами или другими патогенными внутриклеточными микроорганизмами,либо клетки, которые повреждены или неверно функционируют (например, опухолевые клетки). Как и B-клетки, каждая конкретная линия T-клеток распознает только один антиген. T-киллеры активируются при соединении своим T-клеточным рецептором (ТКР) со специфическим антигеном в комплексе с рецептором главного комплекса гистосовместимости I класса другой клетки. Распознавание этого комплекса рецептора гистосовместимости с антигеном осуществляется при участии расположенного на поверхности T-клетки вспомогательного рецептора CD8. В лабораторных условиях T-клетки обычно выявляют именно по экспрессии CD8. После активации T-клетка перемещается по организму в поисках клеток, на которых белок I класса главного комплекса гистосовместимости содержит последовательность нужного антигена. При контакте активированного T-киллера с такими клетками он выделяет токсины, образующие отверстия в цитоплазматической мембранеклеток-мишеней, в результате ионы, вода и токсин свободно перемещаются в клетку-мишень и из неё: клетка-мишень погибает.Разрушение собственных клеток T-киллерами важно, в частности, для предотвращения размножения вирусов. Активация T-киллеров жестко управляется и обычно требует очень сильного сигнала активации от комплекса белка гистосовместимости с антигеном, либо дополнительной активации факторами T-хелперов.

27.Трансплатационный иммунитет.Это коплекс иммунных реакций, развивающихся на пересаженные органы и ткани.Трансп им обусловлен наличием транспл антигенов:-антигены MHC; -антигены эритроцитов системы АВ0 и Rh; -малый комплекс антигенов гистосовместимости, кодируемый Y - хромосомой. После пересадки ткани или органа от донора к реципиенту может развиться реакция отторжения по двум механизмам: -"хозяин против трансплантата"; -"трансплантат против хозяина" - развивается при пересадке красного костного мозга. Виды и механ реакц отторжения: - раннее отторжение трансплантата Основной механизм отторжения - клеточно опосредованный. Иммунный ответ похож на таковой при туберкулиновой пробе, вызывает разрушение трансплантата в течение дней - месяцев. Гистологически характеризуется мононуклеарной клеточной инфильтрацией трансплантата, кровоизлияниями и отеком. Из - за гипоксии нередко развивается фиброз. Такой вид отторжения можно затормозить с помощью иммуносупрессоров. -позднее отторжение трансплантата. Патологическая картина отличается от (1) тем, что вовлекается эндотелий сосудов, происходит его пролиферация с последующим сужением просвета сосудов, что приводит к ишемии и некрозу трансплантата. -гипериммунное отторжение трансплантата Проявляется в случаях, если антигены трансплантата раньше уже попадали в организм реципиента до текущей пересадки (при беременности, переливании крови, предыдущей трансплантации). Отторжение и деструкция развиваются в течение часов и даже минут. Реакция опосредована гуморально, характеризуется тромбозом мелких сосудов, инфарктом трансплантата, лизисом клеток на границе "трансплантат - хозяин". Процесс необратим и не предотвращается ни одним из известных методов иммуносупрессии.

Для предупреждения развития реакций отторжения необходимо:-типирование тканей по MHC, AB0, Rh; -исключить "специфическую презентацию" - предыдущее попадание антигена трансплантата в организм хозяина; -проводить иммуносупрессивную терапию до приживания трансплантата.

28.Естественные киллеры. Это большие гранулярные лимфоциты, обладающие цитотоксичностью против опухолевыхклеток и клеток, зараженных вирусами. NK являются цитотоксичными; в их цитоплазме находятся маленькие гранулы, содержащие перфорин ипротеазы. Перфорин выделяется непосредственно возле инфицированной клетки и образует поры в её клеточной мембране, через которые заходят протеазы и другие молекулы, приводя к апоптозу или осмотическому лизису клетки. Выбор между апоптозом и лизисом имеет большое значение, поскольку при лизисе зараженной вирусом клетки произойдет освобождение вирионов, а апоптоз приведет к разрушению вирусов вместе с клеткой. Способность NK распознавать «своё» и «чужое» на клетках определяется поверхностными рецепторами. Положительное распознавание происходит когда на клетках-мишенях отсутствует экспрессия молекул MHC, и взаимодействие НК-клеток с инфицированными клетками происходит с участием их собственных (НК-клеток) особых рецепторов, в частности CD2 и CD69, или антител, с которыми они связываются через рецептор для Fc (CD16). Связывание НК с антителами, образовавшими иммунные комплексы с антигенами на поверхности клеток-мишеней, интерпретируется как проявление киллерной клеточной активности, или антителозависимой клеточной цитотоксичности. К примеру вирусы герпеса пытаются избежать распознавание T-киллерами, подавляя экспрессию молекул MHC класса I на поверхности инфицированных клеток; однако в этом случае вирус распознают НК-клетки..

29.Апоптоз клеток. Апоптоз-программирован.гибель клеток в ответ на тот или иной сигнал извне или вследст.реализации внутриклет.программы гибели с образ.апоптозных телец, сод.хроматинфрагменты ДНК,повреж.митохондрии,цитоплазму,окр.оболочками.

30.Антитела. Это специальные белки, продуцируемые В-лимфоцитами, имею­щие характерную общую структуру (в основе тетрамер — симметричный комплекс из двух легких и двух тяжелых полипептидных цепей) и физи­ко-химические свойства, что отражает их второе групповое название — иммуноглобулины. Самым характерным общим свойством антител и их природным предназначением является огромное популяционное разнооб­разие (10⁹—10¹⁶) связывающих свойств в отношении возможных лигандов (антигенов). Fc-фрагменты молекул иммуноглобулинов, которых у чело­века 9 разных вариантов (изотипов), предназначены для взаимосвязи комплексов антиген—антитело с другими белками сыворотки крови и клетками организма.

31.Антигенпредставляющие клетки. Антигенпредставляющие клетки — специализированные клетки, которые поглощают и преобразуют аликвоту антигена до того, как он будет рас­познан лимфоцитами. Для Т-лимфоцитов антиген представляют дендрит­ные клетки, В-лимфоциты и макрофаги. Эти клетки поглощают антиген, расщепляют его до пептидов размером 9—11 или 11—18 аминокислотных остатков (если антиген белок), внутриклеточно формируют комплексы этих пептидов с молекулами MHC-I или II и экспрессируют эти комплек­сы на клеточную мембрану. Одновременно антигенпредставляющие клет­ки экспрессируют специальные корецепторные молекулы и синтезируют активационные цитокины, что строго необходимо для индукции лимфо­цита, распознавшего целевой антиген в направлении развития иммунного ответа. В-лимфоциты способны распознавать (связывать) свободные на-тивные антигены. Но для В-лимфоцитов есть специальные антигенпред­ставляющие клетки — фолликулярные дендритные, которые способны продолжительное время нести на своей поверхности антиген, связанный в комплекс с антителом, который в свою очередь связан с Fc-рецептором мембраны FDC.

1.Иммуноэлектрофорез (ИЭФ) — метод исследования антигенного состава биологических материалов, сочетающий электрофорез и иммунодиффузию. Метод состоит из 2-х реакций: -электрофорез.Разделение белков на фракции под воздействием электрического поля; - реакция иммунной дифузии(РИД). Иммуноэлектрофорез применяется в основном для исследования сывороточных белков. Суть метода заключается в следующем: - в лунку, вырезанную в тонком слое геля, помещают исследуемую сыворотку; - проводят электрофоретическое разделение белков сыворотки; - в геле вырезают бороздку, параллельную направлению миграции белков при электрофорезе, и заполняют ее смесью антител к сывороточным белкам; - разделенные при электрофорезе белки (антигены) и антитела диффундируют навстречу друг другу. В местах связывания антител с антигенами образуются дуги преципитации. Плазма крови: белки, методы деления. Можно определить качественный состав белков или наоборот отсутствие. Используют для анализа любой биологической жидкости, при диагностики иммунодефицитных состояний, для определения белка в моче в клиниках. Необходим как метод последующего наблюдения за очисткой белковых препаратов. Для определения титра. Используют 1 -2% агар Дифко, который заливают обезжиренное стекло. Гель готовят на буфере (фосфатный или др.) Электрофорез проводят в течении 1,5 – 2ч напр. 60Вт при комн.темп.Результат виден в виде дуг. Методы. 1.Встречный иммуноэлектрофорез: качественная реакция и полукольный метод.2. Диагностический тест.Количественные методы: 1). Ракетный иммуноэлектрофорез (количественный метод) Определение концентрации С мг/мл. (расчит.равнобедр.треугольник дельта S= 1\2 a*h, h=C мг/мл) 2). Перекрестный иммуноэлектрофорез. На стекле в геле делают длинную вырезку, гель удаляют и в полосу заливают антисыв.(ас) Каждый белок движется в др. сторону, соединяясь с антисыв., образуя фореграмму. Определяют белок и его концентрацию. Ас 50 – 80 мкл во влажн. кам. Окрашивание проходит в 3 этапа. 1) отмывание в физ.р-ре 3 дня каждый день меняя раствор.2)высушивание. На гель помещают полоску фильтр.бумаги в местах лунок делают отверстие и помещ. под вентилятор. 3)Окрашивание. Стекло помещают на 10 мин. амидочерный 10-В или бриллиантовый голубой,(или кумаси).

2.Методы ммуноэлектрофореза (ИЭФ) — метод исследования антигенного состава биологических материалов, сочетающий электрофорез и иммунодиффузию.Методы. 1.Встречный иммуноэлектрофорез: качественная реакция и полукольный метод.2. Диагностический тест.Количественные методы: 1). Ракетный иммуноэлектрофорез (количественный метод) Определение концентрации С мг/мл. (расчит.равнобедр.треугольник дельта S= 1\2 a*h, h=C мг/мл) 2). Перекрестный иммуноэлектрофорез. На стекле в геле делают длинную вырезку, гель удаляют и в полосу заливают антисыв.(ас) Каждый белок движется в др. сторону, соединяясь с антисыв., образуя фореграмму. Определяют белок и его концентрацию. Ас 50 – 80 мкл во влажн. кам. Окрашивание проходит в 3 этапа. 1) отмывание в физ.р-ре 3 дня каждый день меняя раствор.2)высушивание. На гель помещают полоску фильтр.бумаги в местах лунок делают отверстие и помещ. под вентилятор. 3)Окрашивание. Стекло помещают на 10 мин. амидочерный 10-В или бриллиантовый голубой,(или кумаси).

3.Модели в иммунологии. In vivo-лаб.жив. in vitro- на культ.кл. In vivo +в усл.организма; -орг.закрыт от нас. in vitro + создаем условия,многократно повторяем. В результате этого взаимодействия получается комплекс «антиген-антитело». Методы введения: 1)в/в. Вводят мышам в боковую хвостовую. Кроликам ушную краевую линию. Происходит активация, гуморальный отвкт, пик АТ на 4 сутки.2)В/б. В районе т/б сустава иглой проткнув кожу,мышцы не задевая моч.пузыря.Стимуляция гуморального им. Пик АТ на 5 сутки. 3)Внутриселезеночный. Микрохирургический метод. Вводят в селезенку или АГ адсорбир.на кусочке микроциллюлозы. Активация гуморального ответа,пик АТ на 3 сутки. 4)В/м. Инъекцию АГ проводят в мышцу бедра задней лапки или ягодичной мышцы кролику. Индукция клеточного им. 5)П/к. вводят в холку мышам.Кроликам в районе ягодицы, холки и непосредственно в лимфоузел. Формируется клеточный и гуморальный ответ. 6) в/кПроводят очень тонкой иглой производят укол в подошву задней лапки. Локальная реакция для тестирования,гиперчувствительность замедленного типа и как тест реакция трансплантант против хозяина. 7)накожно. АГ наносят стекл. палочкой со спинной и брюшной стороны. Для вакц.оспинной вакцины.

4.Иммунологический мониторинг – динамическое слежение за состоянием иммунной системы выбранных групп обслед.особей в определенном интервале времени в данном интервале времени. Разработка нормальной биологической вариации различных параметров иммунной системы. Состояние иммунной системы имеет важнейшее значение в обеспечении гомеостаза организма, защите от всего генетически чужеродного. Состояние иммунной системы имеет важнейшее значение в обеспечении гомеостаза организма, защите от всего генетически чужеродного. Существующие методы оценки иммунного статуса постоянно совершенствуются, однако есть ряд общих правил, которых необходимо придерживаться при оценке иммунограмм:- комплексный анализ, а не оценка одного показателя;- анализ в комплексе с клиническими и анамнестическими данными;- оценка резких сдвигов показателей (не менее 20% от нормы);- анализ в динамике.

5. Взятие биолог матер. В обязательном порядке производится взятие объектов трупа и его частей кусочки органов и тканей трупа (его частей) вырезают острым ножом, пользоваться ножницами во избежание размятая тканей не рекомендуется. Нельзя скоблить поверхность кусочков, особенно слизистую и серозную оболочки. Рыхлые легко распадающиеся ткани и массы (например, содержимое полости матки) берут на нож, не пользуясь пинцетом, и погружают в фиксирующую жидкость в марлевом мешочке.Кусочки вырезают толщиной 0,5-1,0 см, длина и ширина может быть различной с таким расчетом, чтобы получаемый срез поместился под стандартное покровное стекло. Кусочки сразу же помещают в фиксирующую жидкость. Маркируют этикеткой. Подпись на этикетках делают черным графитовым карандашом. Для этикеток используют материал, устойчивый к действию фиксирующей жидкости (клеенка, фотобумага и др.);вырезанные кусочки помещают в 10-15% раствор формалина. объем фиксирующей жидкости должен превышать объем кусочков не менее чем в 10 раз. При этом следят, чтобы кусочки в растворе не слипались и не прилегали ко дну банки. Для этого на дно банки кладут слой ваты и раствор периодически взбалтывают. Сливать кровь в пробирку с антикоагулянтом без иглы и медленно чтобы избежать гемолиза. После взятия крови пробирку с образцом медленно перевернуть. Чтобы избежать сгустков, обязательно перемешать кровь в пробирке переворачиванием, не менее 8 раз.Хранение и транспортировка образцов крови производится при температуре 20-250С в течение 2-х суток. Антикоагулянт - гепарин 20-25 Ед/мл крови.

6.Получ.клет.суспен. Приготовление клеточных суспензий выполняют на холоде в стерильных условиях. 1)извлечение органов иммунной системы и освобождение их от остатков соединительной и мышечной ткани 2) Органы гомогенезируют,т.е измельчают в охлажденной среде 199 3)Полученную взвесь клеток пропускают через ряд фильтров 4)Клетки осаждают путем центрифугирования в теч.5 мин. 5)Удаляют надосадок и снова добавляют среду 199 6) Взвесь разводят в 100 раз 3% уксусной кислоты 7)Подсчитывают число клеток в камере Горяева в 25 больших квадратах. Результат выражается кл. млн/мл

7. Колич.оценка лимф. Соотношение лимфоцитов различных органов иммунной системы в норме у мышек. Тимус.До 80 млн тимоцитов (Т – лимфоциты) Костный мозг. 20 млн В – лимфоцитов. Лимфоузел. До 50 млн лимфоцитов, 65% Т – лимфоцитов и 35% В- лимфоцитов. Селезенка 120 – 130 млн лимфоцитов в соотношении 55% В – лимфоцитов и 35% Т-лимфоцитов

8. Опред.жизнеспособ.им.клеток в клет.взвеси. Приготовление клеточных суспензий выполняют на холоде в стерильных условиях. 1)извлечение органов иммунной системы и освобождение их от остатков соединительной и мышечной ткани 2) Органы гомогенезируют,т.е измельчают в охлажденной среде 199 3)Полученную взвесь клеток пропускают через ряд фильтров 4)Клетки осаждают путем центрифугирования в теч.5 мин. 5)Удаляют надосадок и снова добавляют среду 199 6) Взвесь разводят в 100 раз 3% уксусной кислоты 7)Подсчитывают число клеток в камере Горяева в 25 больших квадратах. Результат выражается кл. млн/мл. Число жизнеспособных клеток во взвеси называют эксклюзии, краситель трипановый 0,1% синий. Второй краситель иозин 0,1%. Соединяют все части красителей. 0,5%мл крас. + 0,1%мл клеточной смеси. В камере горяева подсчитывают 100 клеток. Живые не красятся, мертвые окрасятся, т.к. у них разрушена мембрана и окрасятся в синевато – фиолетовый цвет. Взвесь клеток считают жизнеспособной если мертвых не более 10-15%.

12. Метод выдел.общего кол-ва Т и Влимф. Для выдел лимф из крови используют вещ-ва с определ плотностью 1,069 – 1,078. Это фикол-пак; финол – верографин; гисто-пак. При смешивании крови и этого вещества происходит выдел лимфоцитов. Берут кровь с антикоагулянтом,наслаив и центрифуг при 1000об.40мин выд.лимф. Получается 4 фракции: кровь,реактив,кольцо лимфоцитов,плазма. Берут пастерку с грушей и переносят в другую пробирку.Необходимо отмыть. Отмыв забуференным физ.р-ом и ставят мин 10 центрифугировать 1000 оборотов. Отмыв происх 2 раза. Должно остаться 1мл суспензии.Если меньше то разб физ.ром.Пробирки предв.обрабатыв. силиконом.

9. Оценка Т-клеточного звена иммунитета включает:а) Определение общего количества Т-лимфоцитов (CD 3) в крови.CD 3 выполняют в организме эффекторную и регуляторную функции.Эффекторная функция заключается в уничтожении чужеродных клеток.Регуляторная функция (система Т-хелперы - Т-супрессоры) состоит в контроле за интенсивностью развития иммунной реакции.Развитие любого воспалительного процесса сопровождается снижением содержания Т-лимфоцитов. Это наблюдается при воспалениях самой самой разнообразной этиологии: инфекциях, неспецифических воспалительных процессах, после операции, травмы, ожогов, инфаркта, злокачественных опухолей.Повышение Т-лимфоцитов в течение воспалительного процесса - благоприятный признак.Высокий уровень этих клеток при резко выраженных клинических проявлениях такого процесса - неблагоприятный признак, указывающий на вялое течение с тенденцией к хронизации.б) Определение количества Т-лимфоцитов - хелперов (CD 4) в крови. Увеличение количества хелперов свидетельствует о гиперактивности иммунитета, снижение - об иммунологической недостаточности.Ведущее значение в оценке иммунной системы принадлежит соотношению Т-хелперов и Т-супрессоров в периферической крови.Иммунорегуляторный индекс (ИРИ) CD4/CD8, равный 1,5-2 - это норма. Индекс равный более 2 говорит о гиперактивности, менее 1,0 - о иммунодефиците.в) Количество Т-лимфоцитов - супрессоров (CD 8)в крови.CD 8 - клетки-индукторы, которые тормозят иммунный ответ, ыработку антител. Увеличение количества CD 8 говорит о недостаточности иммунитета, снижение - о гиперактивности.

13. Метод выделения общего кол-ва Т-иВ-лимф. а)Т-л – СД2=СД58(эритроциты барана) Соединяются с эритроцитами только Т лимф(разеткообразование) Метод длится 2 суток и не все Тлимф имеют СД2 у с/х жив. б) Методика с применением антииммуноглобулинных сыв. В-л(ВСR)им.М,им.G.Подбирают антиимм.глоб.сыв. => АГ-АТ комплекс. Рецептор В-л – это АГ. Чашку Петри(мал.) обрабатывают антииммуноглобул.сывороткой, т.к. имеет рыхлую поверхность молекулы застревают. И если помещают кольцо лимфоцитов.В лимф.прикрепляются к стенке Тлимф.остаются в растворе,затем сливаются в пробирку под контролем микроскопа. Убир. В лимф. под давлением. в) Отмывание Т и В лимф. Получают объем 1 млТ лимф.и 1мл В лимф.

10. ОценкаB-клеточного звена иммунитета включает определение общего количества B-лимфоцитов (CD 20) в крови. CD 20 отвечают за синтез антител - это клетки гуморального иммунитета. Относительное количество B-лимфоцитов наиболее часто повышается во второй половине воспалительного процесса. Особенно это выражено при вирусных инфекциях.Иммуноглобулины – это гуморальные факторы специфического иммунитета синтезируются плазматическими клетками (В- лимфацитами). Классы:1) им-лин М.Находится в виде пентомера. Первый контактирует с АТ. Отвечает за первичный им –т. 2) Им-лин G. Мономер.Нейтрализует токсины, вирусы и др.микроорганизмы.Активирует фагоцитоз.Отвечает за вторичный иммуноответ.Единственный может проходить через плаценту у некоторых млекопитающих. 3)им-лин А. Представитель местного им-та.В основном защищ.слизистую и кожу(кишечник) 4) Им-ин Е.Концентрируется в сыв.крови очень мало. Резко возрастает в крови при аллергии и паразитах.5) им-лин Д. В рецепторном аппарате для распознавания АГ В-лимф. Метод: МЕТОДОМ PАДИАЛЬНОЙ ИММУНОДИФФУЗИИ (синоним «определение по Манчини»). Исследуемую сыворотку помещают в лунки агарового геля, который содержит АТ к иммуноглобулинам одного из классов IgG, IgA или IgM в известной концентрации. Иммуноглобулины, диффундирующие из лунок в агар, при взаимодействии с соответствующими АТ образуют кольца преципитации, размер которых прямо пропорционален содержанию иммуноглобулина.

11. Реакция Манчини (или радиальная иммунодифузия). Взаимодействие АГ-АТ.Реакция проходит на буферном агаре Дифко.Тест на опред.АТ указ.в любом биологическом материале.Основана на способности дифундировать в агар и образовывать со смешанной с агара специфические антисывороточные кольца преципитации,площадь которых прямоколлерирует с конц.АГ в иссл.крови. Смг/мл. Через 24ч имгл –ин А не разводят сывороткой. Через 24ч имгл-ин G разводят в 20 раз,через 48ч имгл-ин М разводят в 10 раз. 2мкл сыв. + 38 мкл буф.=G; 2мкл сыв. +18мкл.сыв. = М

14. Методы оценки функц.актив. Реакция бласттрансформации лимфоцитов. Если активно начинают размножаться., то похожи на бласты с большим ядром. ФГА(фитогемаглютинин) получают из семян красной фасоли,провоц. актив. Влимф. Ход реакции: 1) выделение и разделение лимфоцитов 2) клетки культивируют в круглых донных планшетах. Инкубируют их вместе с митогенами. В качестве контроля вместо митогена используют среду 199.За 6 ч до конца реакции в каждую лунку добавляют изотоп Н-3-Т имидин. С использованием радиосчетчика. Резко выр.импульсы в мин подсчитывают и в контроле и в ф. Выражается опыта к контролю.

15. Метод опред.лимф разл.субпопул. Лимфотоксический (цитотоксический) тест.Способность мышиных МКА(моноклональных) АТ класса Мg к соответ. маркером. А также оказывает цитотоксическое воздействие на соотв. субпопуляции лимфоцитов, выделяют с помощью красителя иозина. В лимф.: -В СД5; - В СД20(СД19). Тлимф: Т СД4; - Т СД8. АГ-АТ + комплемент(цитотоксическое действие)Другие клетки будут бесцветными. Ход реакции: 1) выделяют лимфоциты в градиенте плотности 2)Разделяют Т и В лимфоциты 3) В планшет в каждую лунку вносят сусп.лимфоцитов; АТ выст. 40 мин, добавляют комлемент – сыв.морской свинки. Вносят 2% иозин. Считают 200лимфоцитов (окрашенные,красные) живые не окрашиваются.

17.Диагностич.антигены. Эритроцитарные диагностикумы. Представляют собой лиофильно высушенные препараты, полученные на основе эритроцитов барана, к которым химическим путем, присоединены антитела, выделенные из сывороток крови морских свинок, гипериммунизированных типоспецифическим инактивированным антигеном возбудителя соответствующей болезни.

22.Бактериц.активн. Отражает функциональную активность, действие в отношении м/о. И зависит от комплемента и отчасти лизоцима. Проводится в стерильных условиях, куда помещается тест культуру. E.Coli пат.штамм,который. Тест культуру помещают в бульон и помещают иссл.сыв.крови.Измеряют длину волны на спектрометре.Помещают в термостат на 3часа,затем снова на спектрометр. Измерение бактерицидной волны: БАСК% = 100 – дельта D опыт./ дельта D контр. * 100,где Д1 –длина волны после термостатирования, дельта Д2 – после дельта Д=Д2 – Д1

26. Лаб.модел.системы. 1)in vivo-лаб.животные. Достоинства:в условиях организма,недостатки:организм закрыт от нас. В основном используют мышей. Они имеют быстрый цикл развития 19-21 день беременность.Рождаются 10-12 детенышей,через 2-3 мес станоятся половозрелые.Так же используются кролики,крысы 2) in vitro-на культуре клеок. Достоинства: создаем условия;многократное использование.

18.Иммунологический анализ. Основной принцип всех иммунологических методов – это реакция между АТ-АГ.Решает 2 осн.задачи: 1)Выявление АГ применяя известн АТ 2)Определение АТ с помощью известных АГ. РИФ – реакция иммунофлюорисценции.АГ + АТ меченные флюорохромом. Дают контакт 30 минут при 37 С, затем производят тщательный отмыв в физрастворе. Метод обнаружения – флюоресцентное свечение под микроскопом. ИФА – иммуно-ферментный анализ.АГ + АТ с ферментом. Контакт, отмыв, затем добавляют субстрат, который при контакте с АТ-ферментным комплексом дает цветную реакцию. РСК – реакция связывания комплемента.АГ + АТ + комплемент. Контакт. Затем добавляют гем-систему (гемолизин + эритроциты барана). Контакт. Если гемолиза не происходит, значит АГ и АТ связали комплемент. Задержка гемолиза – реакция положительная. Если произошел гемолиз, значит комплемент связан гем-системой – реакция отрицательная. РДП - реакция диффузной преципитиции.АГ + АТ (диффузия в агаровом геле). Метод обнаружения – образование контура преципитации. РНГА – реакция непрямой гемаглютинации. Эритроциты нагружают АГ и при образовании комплекса АГ-АТ происходит агглютинация эритроцитов. РТГА – реакция торможения гамаглютинации. РТГАд – реакция торможения гемадсорбции. РН – реакция нейтрализации.Вирус + АТ. Контакт. Ввод в чувствительную к вирусу систему. Метод обнаружения – нейтрализация инфекционной активности вируса. РСК В основе ее лежит способность комплемента, многофункционального белкового фактора сыворотки теплокровных животных, связываться комплексом антиген-антитело; несвязавшийся комплемент достаточно легко определяется по лизису бараньих эритроцитов, предварительно сенсибилизированных специфическими гемолизинами. При подборе соответствующих концентраций комплемента он будет выявляться только в том случае, когда взаимодействия антигена и антител в испытуемой (или опытной) системе не происходит. На ранних этапах изучения гепатита В она использовалась как метод обнаружения поверхностного антигена вируса гепатита В и антител к нему. В реакции связывания комплемента удавалось титровать антитела к вирусу гепатита А, когда в качестве антигена бралась взвесь вирусных частиц, полученная в результате сложной многоступенчатой экстракции из печени зараженных обезьян. После появления твердофазных иммунологических тестов интерес к использованию реакции связывания комплемента был полностью утрачен.(РНГА; син. реакция пассивной гемагглютинации) метод обнаружения и идентификации антигенов или антител, основанный на возникающем в их присутствии феномене агглютинации эритроцитов, на поверхности которых были предварительно адсорбированы соответ специфич антитела или антигены.

Дата добавления: 2015-10-29