Устойчивость фагов в окружающей среде.

В окружающей среде фаги более устойчивы, чем клетки бактерий.

Поэтому если в окружающей среде трудно обнаружить клетки возбудителя,

то можно обнаружит его бактериофаги. Фаги более устойчивы в окружающей среде, чем вирусы человека и животных. Фаги устойчивы к замораживанию, высушиванию, нагреванию до 65 – 70С, устойчивы к фенолу, хлороформу. Фаги чувствительны к формалину, УФЛ и ионизирующей радиации.

Особенности фаговой инфекции:

1. Адсорбция фага на поверхности клетки основана на рецепторном узнавании. На поверхности чувствительной клетки обязательно должны быть рецепторы к соответствующему фагу.

2. Лизогенные культуры бактерий устойчивы к действию подобных фагов.

3. Нарушение репродукции фага может произойти на любой стадии его взаимодействия с клеткой: адсорбции (нет рецепторов для данного фага), проникновения, нуклеиновая кислота фага может быть разрушена в цитоплазме нуклеазами клетки и т. д.

Культивирование фагов:

Фаги культивируют на чувствительных культурах бактерий. На жидких питательных средах получают фаголизаты. На плотных средах можно получить негативные колонии, или бляшки. Из изолированной бляшки можно получить чистую культуру бактериофага.

Методы обнаружения и титрования фагов:

Метод стекающей капли. На газон чувствительной культуры наносят каплю фаголизата. Посевы культивируют сутки. По ходу стекающей капли наблюдают зону лизиса бактериальной культуры.

Титрование фагов в жидкой питательной среде по Аппельману. В жидкой питательной среде делают серийные десятикратные разведения фаголизата (с первого по десятое разведение). В каждую пробирку добавляют по 0,1 мл чувствительной тест-культуры бактерий, посевы помещают на сутки в термостат. В качестве контроля используют культуру бактерий без фага. Определяют титр бактериофага – самое большое разведение фага, при котором наблюдается лизис тест-культуры бактерий.

Титрование фагов на плотной питательной среде по Грациа. Делают серийные десятикратные разведения фаголизата в физрастворе. В пробирку с 5мл расплавленного и остуженного агара добавляют 1 мл соответствующего разведения фаголизата и 0,1 мл чувствительной тест-культуры бактерий. Эту смесь верхним слоев выливают на чашку Петри с агаром. Посевы помещают в термостат, через сутки на газоне бактериальной культуры появляются негативные колонии бактериофага. Это методика точная, так как позволяет определить количество фага в фаголизате с точностью до одной фаговой частицы.

Применение фагов в медицине:

Бактериофаги делят диагностические и лечебно-профилактические.

Диагностические фаги используют:

1. Для идентификации культур бактерий.

2. Для типирования культур бактерий с целью определения источника инфекции и путей ее распространения (используют типовые наборы фагов).

3. Для индикации возбудителя (есть фаг, следовательно, есть и возбудитель).

Лечебно-профилактические фаги:

1. Для профилактики инфекционных заболеваний в очагах инфекции.

2. Для комплексного лечения инфекционных заболеваний.

Производят брюшнотифозный, дизентерийный, синегнойный, стафилококковый фаги и комбинированные препараты.

Способы введения фагов в организм человека: местно, энтерально и реже парентерально.

Фаги используют ограниченно для лечения инфекционных заболеваний,так как не все штаммы возбудителей будут чувствительны к фагам. Фаги не позволяют полностью очистить организм от возбудителя, но способны существенно снизить дозу возбудителя.

Умеренные фаги используют в генной инженерии и биотехнологии в качестве векторов для получения рекомбинантных ДНК.

СТРОЕНИЕ БАКТЕРИОФАГА Т4:

1 – головка

2 – хвостовой отросток

3 – нуклеиновая кислота

4 – капсид

5 – воротничок

6 – чехол хвостового отростка

7 – фибриллы

8 – шипы

9 - базальная пластинка

Дата добавления: 2015-08-27