Методические рекомендации 4 страница

Примечание к таблице.

Схема Кауфмана-Уайта является таблицей антигенных формул известных сероваров сальмонелл и создана для целей практической идентификации штаммов. Детали, не нужные для определения серовара, в схеме не приводятся, однако некоторые из них будут обсуждены в данном примечании.

1. Антигены, входящие в состав О-антигенных комплексов, обусловленные

фаговой конверсией, в схеме подчеркнуты (например, О-антиген 1). Эти

-

антигены присутствуют только в том случае, если штаммы лизогенизированы

соответствующим конвертирующим фагом.

2. [] = Факторы О-антигенного комплекса, указанные в квадратных скобках, могут присутствовать или отсутствовать у штаммов вне зависимости от фаговой конверсии (например, О-фактор [5] серогруппы B О:4).

3. [] = Факторы Н-антигенов, заключенные в квадратные скобки, указывают, что они редко обнаруживаются и, как правило, были идентифицированы у "диких" штаммов. Например, подавляющее большинство штаммов S. Paratyphi A - монофазные. Они содержат Н-антиген 1-й фазы - "а". В редких случаях могут быть выделены дифазные штаммы S. Paratyphi A с антигеном 2-й фазы Н:1,5. Поэтому в схеме в формуле этого серовара Н-антиген 2-й фазы указан в квадратных скобках [1,5].

4. Наиболее важными в идентификации возбудителя брюшного тифа и паратифа С являются идентификация Vi-антигена. Однако содержание этого антигена в культурах S. Typhi и S. Paratyphi C может варьировать. Соответственно количеству его в культурах, в частности S. Typhi, последние можно подразделить на три группы:

V-форма - содержит Vi-антиген в большом количестве и является О-инагглютинабельной;

W-форма - не имеет Vi-антигена и является О-агглютинабельной;

VW-форма - промежуточная, она содержит Vi-антиген и тем не менее является О-агглютинабельной.

Большинство штаммов S. Typhi содержит Vi-антиген, особенно развит он в свежевыделенных штаммах и культурах, выращиваемых при 37 град. С.

Следует запомнить, что присутствие или отсутствие дополнительных О- или Н-факторов (подчеркнутых или в квадратных скобках) не влияет на определение серологического варианта штамма. В то же время, эти факторы интересны как эпидемиологические маркеры штаммов, принадлежащих к одному серовару.

5. Очень редко штаммы сальмонелл, включая возбудителей брюшного тифа и паратифов A, B и C, могут обладать так называемой "R-фазой" Н-антигена.

В практических лабораториях такие штаммы не смогут быть идентифицированы до уровня серовара при традиционном серотипировании.

Дальнейшее детальное изучение таких штаммов (идентичных по ферментативным свойствам S. Typhi, S. Paratyphi A, B, C) должно проводиться в национальных (региональных) сальмонеллезных центрах. Как правило, подтвердить серовар у таких штаммов можно с помощью дополнительных методов (молекулярно-генетических).

17. Чувствительность к антибактериальным препаратам

В настоящее время отмечен неуклонный рост резистентности штаммов энтеробактерий к широкому спектру антимикробных препаратов. Уже во второй половине прошлого столетия были зарегистрированы вспышки брюшного тифа, вызванные возбудителем, резистентным к левомицетину (в Мексике). В развивающихся странах Южной Азии (Индия, Бангладеш, Вьетнам, Пакистан и Таджикистан) и Южной Африки, эндемичных по брюшному тифу, появились штаммы S. Typhi, резистентные к нескольким антимикробным препаратам, традиционно применявшимся в качестве терапии первой линии - ампициллину, хлорамфениколу (левомицетину) и ко-тримаксозолу, и их число стало стремительно увеличиваться. В последние годы в странах Азии полирезистентные штаммы составляют до 80% всех выделенных возбудителей, поэтому указанные препараты утратили свое значение при терапии брюшного тифа.

Современными препаратами выбора при лечении брюшного тифа и паратифов являются фторхинолоны. В ряде случаев, особенно при лечении детей, возможно применение цефалоспоринов третьего поколения. Однако штаммы, резистентные к налидиксовой кислоте и обладающие пониженной чувствительностью к ципрофлоксацину, также становятся эндемичными для стран Азии.

КонсультантПлюс: примечание.

В официальном тексте документа, видимо, допущена опечатка: имеется в виду МУК 4.2.1890-04, а не МУК 4.12.1890-04.

Согласно действующим методическим указаниям по определению чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам МУК 4.12.1890-04 следует проводить определение чувствительности выделенного микроорганизма к АБП, если уровень его устойчивости не может быть предсказан на основании данных идентификации или вероятной таксономической принадлежности микроорганизма. Важной задачей является выявление приобретенной резистентности к АБП у природно-чувствительных к ним микроорганизмов. S. Typhi, как и сальмонеллы других сероваров, обладает природной чувствительностью к широкому спектру АБП. Но т.к. в последние годы отмечается распространение штаммов S. Typhi, резистентных к большинству традиционных антибактериальных препаратов, применявшихся ранее для лечения брюшного тифа, у всех выделенных культур S. Typhi необходимо в обязательном порядке определять чувствительность к АБП.

Рекомендуемый перечень АБП, подлежащих исследованию при изучении чувствительности штаммов возбудителей брюшного тифа и паратифов (МУК 4.12.1890-04):

- ампициллин;

- цефалоспорин третьего поколения (цефотаксим и/или цефтазидим);

- налидиксовая кислота <*>;

- триметоприм-сульфаметоксазол (ко-тримоксазол);

- хлорамфеникол <**>;

- тетрациклин <**>.

--------------------------------

<*> В случае устойчивости к налидиксовой кислоте необходимо определить чувствительность к ципрофлоксацину, т.к. у штамма высока вероятность пониженной чувствительности к этому препарату. Действующие в нашей стране МУК 4.12.1890-04 рекомендуют включить в набор для тестирования Enterobacteriaceae из группы хинолонов только препараты, относящиеся к фторированным хинолонам (норфлоксацин, ципрофлоксацин или офлоксацин). В то же время, убедительно доказано, что устойчивость к этой группе антимикробных препаратов развивается ступенчато и затрагивает в первую очередь налидиксовую кислоту. Как правило, штаммы, резистентные к налидиксовой кислоте, характеризуются сниженной чувствительностью к фторхинолонам, хотя при тестировании их в лаборатории они рассматриваются как чувствительные к фторированным хинолонам согласно действующим критериям оценки (МПК <= 1 мг/л). В связи с этим целесообразно включить налидиксовую кислоту в перечень препаратов, обязательных для тестирования возбудителей брюшного тифа и паратифов A, B и C. Так как диско-диффузионный метод не позволяет уловить низкие уровни устойчивости к ципрофлоксацину, у штаммов, резистентных к налидиксовой кислоте, необходимо определять МПК ципрофлоксацина или других фторхинолонов методом серийных разведений.

<**> В перечень препаратов для определения чувствительности включены хлорамфеникол и тетрациклин; эти препараты не применяются в настоящее время для лечения, но результаты определения чувствительности к ним могут иметь определенное значение для эпидемиологического мониторинга. При проведении эпидемиологического надзора за антимикробной резистентностью, а также с целью проведения дополнительного типирования штаммов (внутри серовара) перечень исследуемых АБП может быть расширен.

Определение чувствительности штаммов S. Typhi, S. Paratyphi A, B и C к АБП следует проводить в строгом соответствии с МУК 4.12.1890-04 диско-диффузионным методом или методом серийных разведений с обязательным контролем качества проводимого исследования (с использованием контрольных референтных штаммов). Интерпретация результатов изучения штаммов представлена в табл. 7.

Таблица 7

КРИТЕРИИ ИНТЕРПРЕТАЦИИ РЕЗУЛЬТАТОВ

ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ ШТАММОВ ENTEROBACTERIACEAE

(В ТОМ ЧИСЛЕ S. TYPHI, S. PARATYPHI A, B И C) И ПОГРАНИЧНЫЕ

ЗНАЧЕНИЯ ДИАМЕТРОВ ЗОН ПОДАВЛЕНИЯ РОСТА (ММ) И МПК (МГ/Л)

(МУК 4.12.1890-04)

Антибактериальные препараты	Диаметр зон подавления роста и значения МПК	E. coli АТСС 25922
У	П	Ч
Ампициллин	<= 13 мм >= 32 мг/л	14-16 мм 16 мг/л	>= 17 мм <= 8 мг/л	16-22 мм 2-8 мг/л
Триметоприм- сульфаметоксазол (ко-тримоксазол)	<= 10 мм >= 4/76 мг/л	11-15 мм -	>= 16 мм <= 2/38 мг/л	23-29 мм <= 0,5/9,5 мг/л
Цефотаксим	<= 14 мм >= 64 мг/л	15-22 мм 16-32 мг/л	>= 23 мм <= 8 мг/л	29-35 мм 0,03-0,12 мг/л
Цефтазидим	<= 14 мм >= 32 мг/л	15-17 мм 16 мг/л	>= 18 мм <= 8 мг/л	25-32 мм 0,06-0,5 мг/л
Налидиксовая кислота	<= 13 мм >= 32 мг/л	14-18 мм -	>= 19 мм <= 16 мг/л	22-28 мм 1-4 мг/л
Ципрофлоксацин	<= 15 мм >= 4 мг/л	16-20 мм 2 мг/л	>= 21 мм <= 1 мг/л	30-40 мм 0,004-0,016 мг/л
Хлорамфеникол	<= 12 мм >= 32 мг/л	13-17 мм 16 мг/л	>= 18 мм >= 8 мг/л	21-27 мм 2-8 мг/л
Тетрациклин	<= 14 мм >= 16 мг/л	15-18 мм 8 мг/л	>= 19 мм <= 4 мг/л	18-25 мм 0,5-2,0 мг/л

18. Ускоренные методы выделения и идентификации возбудителей

В настоящее время бурно развиваются методы для ускоренной лабораторной диагностики различных заболеваний, включая тифопаратифозные. К ним относятся молекулярно-генетические, иммунохроматографические методы, иммуноферментный анализ и др. Эти методы могут быть использованы на различных этапах бактериологического исследования (непосредственно в биологическом материале, на этапе идентификации микроорганизма на уровне колоний или чистой культуры, при определении чувствительности к антибактериальным препаратам). На современном этапе эти методы носят ориентировочный характер и дополняют, но не заменяют классическое бактериологическое исследование.

Каждая лаборатория в зависимости от своих возможностей и наличия на рынке тест-систем может использовать их для ускоренной диагностики брюшного тифа и паратифов A, B и C согласно инструкции производителя.

Для ускоренного выявления возбудителей сальмонеллезов, включая брюшной тиф и паратифы, была неоднократно рекомендована реакция иммунофлюоресценции. При необходимости может быть использован и непрямой метод РИФ. Диагностические препараты для постановки РИФ прямым методом (иммуноглобулины сальмонеллезные к антигенам групп A, B и D диагностические флуоресцирующие сухие) производятся ГУ НИИЭМ им. Н.Ф.Гамалеи РАМН (филиал "Медгамал"). С помощью РИФ возможна идентификация возбудителя только до уровня серологической группы. Постановка реакции осуществляется согласно рекомендациям производителя диагностических препаратов.

Список литературы

1. Профилактика брюшного тифа и паратифов: СП 3.1.1.2137-06. М.: Роспотребнадзор, 2006.

2. Техника сбора и транспортирования биоматериалов в микробиологические лаборатории: МУ 4.2.2039-05.

3. Приказ МЗ СССР от 22.04.1985 N 535 "Об унификации микробиологических (бактериологических) методов исследования, применяемых в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений".

4. Методические указания по определению чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам: МУК 4.12.1890-04. М., 2004.

5. Методические указания по микробиологической диагностике заболеваний, вызываемых энтеробактериями: МУ 04-723/3. М.: МЗ СССР, 1984.

6. Antigenic formulas of the Salmonella serovaras/Michel Y. Popoff,

th

WHO Collaborating Center for Reference and Research on Salmonella. 8

edition. France, Paris, Institute Pasteur, 2001.

Дата добавления: 2015-07-12