Возбудители туберкулёза и их изменчивость 15 страница

9 (контрольная) группа –диффузное поражение паренхиматозных органов (селезенки, печени, легких) и лимфатических узлов.

Полученные данные позволяют сделать вывод, что высокими протективными свойствами обладает вакцина БЦЖ с иммуномодуляторами БИС и СИС, комбинация которых обеспечивает защиту 80 % восприимчивых животных от заражения и развития туберкулезной инфекции.

Применение в составе вакцин мощных иммуномодуляторов или адьювантов обусловлено низкой иммуногенностью простых по строению белковых субъединиц, а также экспрессией антигенов, индуцирующих максимальную протекцию [3]. Известно, что в иммунорегуляторных процессах активное участие принимают эритроциты. Благодаря наличию на поверхностной мембране рецепторов к С₃b-компоненту комплемента эритроциты способствуют фагоцитозу, усиливают элиминацию циркулирующих иммунных комплексов. При индуцировании патологических процессов в циркулирующей крови появляются эритроциты, обладающие свойством антигеннеспецифически модулировать иммунный ответ

Иммуностимулирующая активность эритроцитов связана с адсорбцией на их поверхности разнообразных высокомолекулярных соединений, поступающих в кровоток из пораженных очагов Интенсивное возбуждение иммунокомпетентных клеток с помощью иммуномодуляторов СИС и БИС в процессе формирования кооперативного действия с вакциной БЦЖ позволило повысить защитные свойства организма животных к туберкулезной инфекции. По данной разработке получен патент Украины № 35036А от 15.03.2001 года.

Недостатком предложенной комбинации иммуностимуляторов СИС и БИС с вакциной БЦЖ является высокая степень аллергизации животных, а следовательно невозможность контролирования и дифференциации поствакцинального и постинфекционного процессов, а также технологические трудности в изготовлении иммуностимуляторов и их раздельном применении.

Поэтому дальнейший поиск протективных противотуберкулезных препаратов был направлен на конструирование неживых высокоиммуногенных субстанций, обладающих более высокими протективными свойствами.

Разработка противотуберкулезного комплексного препарата на основе белковых субстанций микобактерий туберкулеза.

Учитывая, что убитые клеточные и внутриклеточные фракции патогенных микобактерий туберкулеза, обладают иммуногенными и протективными свойствами, не уступающими по степени защиты живой вакцине БЦЖ, наличие супрессивных свойств последней, а также учитывая современные требования о том, что антигенный состав вакцинного препарата должен как можно ближе соответствовать составу патогена, при конструировании противотуберкулезного комплексного препарата ПКП‑2 использовали только патогенный штамм возбудителя туберкулеза (штамм Vallae).

При разработке этого препарата использовали схему наработки СИС. Способ приготовления противотуберкулезного комплексного препарата ПКП‑2 включает выращивание на жидкой синтетической питательной среде для культивирования микобактерий культуры возбудителя туберкулеза бычьего вида (штамм Vallae) в течение 55-60 суток.

После её термической обработки в автоклаве при 2·10⁵ Па (2 атм.) в течение 2 часов отделяли бактериальную массу от культурального фильтрата, и пропускали последний через стерилизующие пластины. Затем фильтрат центрифугировали при 100000g в течение 30 минут, осадок убирали, а надосадочную жидкость с концентрацией белка 2,0±0,1 мг/см³ адсорбировали на гидроокиси алюминия с 10 % содержанием последней в конечном продукте.

Бактериальную массу, после отделения от культурального фильтрата, разбивали в сосудах с бусами на шутель-аппарате в течение 2 часов, а затем центрифугировали полученную суспензию при 2000 об./мин в течение 30 минут. Осадок удаляли, а в надосадочной жидкости доводили концентрацию белка до 1,0±0,1 мг/см³.

Суспензии растворов после обработки фильтратных протеинов и внутриклеточных белковых фракций сливали в равных количествах в один сосуд и подвергали детоксикации и дезаллергизации с помощью добавления формальдегида до 0,4 % в готовом растворе и выдерживали в течение 2 недель в термостате при температуре 38±0,5°С. Затем добавляли 8,0±0,5 % гидроокиси алюминия и выдерживали в термостате при 38±0,5°С в течение 14 суток. Готовый препарат фасовали во флаконы и стерилизовали в автоклаве при 1,0 атм в течение 20 минут.

Определение безвредности и аллергенных свойств препарата ПКП‑2.

Для определения безвредности и аллергенных свойств испытуемого препарата было отобрано 3 группы животных по 10 морских свинок в каждой. Животным вводили:

1 группа – вакцину БЦЖ;

2 группа – противотуберкулезный препарат ПКП‑2;

3 (контрольная) группа – стерильный физиологический раствор.

При изучении безвредности препарата ПКП‑2 и вакцины БЦЖ установлено, что введение изучаемого препарата на протяжении опыта не вызывает в организме морских свинок клинических изменений, свойственных туберкулезной инфекции.

При патологоанатомическом вскрытии морских свинок опытных и контрольной групп характерных для туберкулезной инфекции изменений во внутренних органах не обнаружено. В местах введения препарата ПКП‑2 обнаруживали подкожные уплотнения соединительной ткани.

С помощью бактериологических исследований патологоанатомического материала (включая биологическую пробу), полученного от опытных животных, возбудителя туберкулеза не выделено.

Результаты гистологических исследований патологоанатомического материала, полученного от морских свинок, иммунизированных вакциной БЦЖ и противотуберкулезным препаратом ПКП‑2, свидетельствуют, что в лимфатических узлах, печени селезенке, легких патологические процессы не развивались.

В гистологических образцах из патологоанатомического материала от животных выявлены:

1 группа – в региональных лимфатических узлах и селезенке усиление лимфоидо-гиперпластической, макрофагальной и плазмоцитарной реакций, в отдаленных лимфатических узлах – параспецифические процессы с продуктивной реакцией без характерных для туберкулезной инфекции изменений. Ткани селезенки, печени, легких, межлегочных лимфатических узлов были без свойственных для туберкулеза изменений;

2 группа – гиперплазированные мякотные тяжи в бронхиальных лимфатических узлах, содержащие малые лимфоциты, клетки плазмоцитарного ряда и очень мало бластов, а также обнаруживали эпителиальные клетки посткапилярных венул, которые были пролиферированы, ядра их просветлены.

Полученные данные позволили сделать вывод, что изучаемый противотуберкулезный вакцинный препарат ПКП‑2 безвреден.

Динамика развития аллергических реакций у опытных животных отражена в табл. 15.

Таблица 15. Динамика аллергических реакций у морских свинок

Группа животных	Количество реагирующих животных, %
Сутки после иммунизации

Результаты аллергических исследований свидетельствуют, что противотуберкулезный препарат ПКП‑2 обладает менее выраженными аллергенными свойствами.

Аллергические реакции у животных, иммунизированных препаратом ПКП‑2, сохраняются у 30 % морских свинок через 2,5 месяца после их применения.

Изучение иммуногенных и протективных свойств противотуберкулезного препарата ПКП‑2.

Для изучения иммуногенных и протективных свойств препарата ПКП‑2 было отобрано 3 группы животных по 10 морских свинок в каждой. Животным вводили:

1 группа – вакцину БЦЖ;

2 группа – противотуберкулезный препарат ПКП‑2;

3 группа – противотуберкулезный препарат ПКП‑2 с РБС;

4 (контрольная) группа – стерильный физиологический раствор.

Результаты аллергических исследований представленных в табл. 16.

Таблица 16. Динамика аллергических реакций у морских свинок

Группа животных	Количество реагирующих животных, %
Сутки после заражения

К концу опыта аллергические реакции у животных контрольной группы исчезали у 90 % морских свинок, что, по видимому, связано с развитием состояния анергии у животных с диффузным поражением туберкулезом [1], а у животных опытных групп, наоборот, сохранялись у 20–50 % морских свинок, что связано с заражением и заболеванием туберкулёзом и присутствием специфических антител у иммунизированных морских свинок.

Результаты патологоанатомических исследований, проведенных через три месяца после заражения морских свинок, приведены в табл. 17.

Таблица 17. Результаты патологоанатомических исследований внутренних органов морских свинок

Группа животных	Количество животных с различными степенями патологоанатомических изменений внутренних органов, свойственных туберкулезу, по классификации А. И. Тогуновой	% защиты
Слабая степень	Средняя степень	Тяжёлая степень	Генерализованная форма

Результаты патологоанатомических исследований подтверждены бактериологическими исследованиями с постановкой биологической пробы.

При проведении гистологических исследований полученного патологоанатомического материала установлено, что наиболее значительные изменения в органах и тканях животных произошли у животных четвертой (контрольной) группы, где наблюдались типичные, очень хорошо выраженные распространяющиеся туберкулезные изменения в легких, а в печени, селезенке лимфатических узлах обнаруживали очень сильные, тотальные поражения часто с преобладанием некрозов.

В гистологических образцах из патологоанатомического материала от животных выявлены:

1 группа – тотальные поражения с некрозами в паховых и межлегочных лимфатических узлах, типичные хорошо выраженные распространяющиеся изменения в селезенке, а в легочной ткани – параспецифические изменения;

2 группа – мелкие характерные для туберкулеза изменения в селезенке и отдаленных лимфатических узлах. В межлегочных лимфатических узлах были типичные, хорошо выраженные туберкулезные изменения. Обнаружены также параспецифические изменения в легких, а в печени свойственных туберкулезу изменений не выявлено;

3 группа – мелкие характерные для туберкулезной инфекции участки в межлегочных и отдаленных лимфатических узлах, а в паховых – диффузные некротические поражения. В селезенке и легких выявляли параспецифические изменения с продуктивной реакцией без туберкулезных поражений, а в печени не обнаружено отклонений от нормы;

4 (контрольная) группа –генерализованная форма туберкулеза с диффузным поражением селезенки, печени, легких и лимфатических узлов.

Полученные данные позволили сделать вывод о том, что препарат ПКП‑2 значительно превосходит по своим иммуногенным и протективным свойствам вакцину БЦЖ, но в тоже время уровень защитного действия не позволяет эффективно использовать данный препарат для вакцинопрофилактики туберкулёза, что сопровождается поражением паренхиматозных органов и лимфоидных тканей.

Применение вместе с препаратом ПКП‑2 биостимулятора РБС серьезным образом не повлияло на его протективные свойства.

Дальнейший поиск высокоиммуногенного противотуберкулезного препарата для профилактики туберкулеза был направлен в сторону разработки и испытания молекулярно-субъединичных препаратов, содержащих в своем составе как корпускулярные, так и молекулярные субстанции микобактерий туберкулеза.

Разработка противотуберкулезного молекулярно-субъединичного комплексного препарата ПКП‑3

По данным В. В. Еремеева (2001) [24] наиболее перспективными противотуберкулезными вакцинными препаратами являются субъединичные вакцины, которые состоят из секретируемых белков микобактерий туберкулеза (белки культурального фильтрата).

Известна высокая эффективность адъювантного действия низкомолекулярных пептидов, действующих не только на макрофаги, но и на Т- и В-лимфоциты.

Данные J. Joumans (1974) и E. Ribi (1975) [95] об иммуномодулирующих и протективных свойствах цитоплазматических субстанций (рибосомальных и отдельных фракций клеточных оболочек микобактерий) в сочетании с микобактериями вакцинного штамма БЦЖ подтверждены Л. А. Гореловой (1996) [13].

Эфективность иммуногенного действия противотуберкулезных препаратов из культуральных фильтратов микобактерий M. tuberculosis, M. bovis и штамма БЦЖ была продемонстрирована в опытах на мышах и морских свинках [59; 74; 93; 96; 28].

Были изучены антигенные и иммуногенные свойства отдельных белков (антигенов) МРТ 59 [90; 58; 73], ESAT-6 [101], MPT64 [92], MTB12 [104], MTB8.4 [67], CFP29 [98], TB10.4 [100].

Исходя из того, что микробными токсинами можно считать все белки бактерий (простые и сложные), способные в чрезвычайно низких концентрациях оказывать на клетки и ткани макроорганизма действие, приводящее в конечном счете к нарушению его гомеостаза и развитию основного симптомокомплекса заболевания [16; 7], нами были получены белковые субстанции микобактерий туберкулеза для разработки высокоиммуногенных протективных комплексных препаратов.

С целью получения противотуберкулезного препарата, который обладал бы широким набором антигенов, находящихся как на поверхности клеточной мембраны, так и в продуктах распада микобактерий, нами был разработан молекулярно-субъединичный комплексный препарат, названный ПКП‑3, включающий в себя широкий спектр презентабельных антигенов, которые встречает иммунная система макроорганизма при развитии инфекционного процесса.

Технология получения молекулярно-субъединичного комплексного препарата ПКП‑3, состоящего из двух компонентов: № 1 – молекулярной и № 2 – субъединичной субстанций включает следующие этапы:

Получение компонента № 1 (молекулярной субстанции). Выращенную на жидкой синтетической питательной среде культуру микобактерий туберкулеза бычьего вида (штамм Vallae) подвергали автоклавированию при 1,2±0,2·10⁵ Па (1,2 атм.) в течение 2–3 часов до содержания 2,8 мг/см³ (вариант № 1), 2,0 мг/см³ (вариант № 2), 1,5±0,1 мг/см³ (вариант № 3) и 1,0±0,1 мг/см³ (вариант № 4) растворимого туберкулопротеина. Отделение культурального фильтрата от инактивированной бактериальной массы проводили с помощью фильтрации через стерилизующие пластины, в результате чего получали фильтратные протеины.

Белковые фракции из микобактериальной массы, полученные при разрушении их на ультразвуковой установке «УЗДН» при частоте 22,0 кГц и продолжительности действия 30 минут, после пропускания их через стерилизующие пластины, подвергали центрифугированию при 100000 g для получения очищенных белково-нуклеотидных фракций и удаления высокотоксичных липидно-восковых фракций до достижения концентрации белков в готовом растворе 2,8 мг/см³ (вариант № 1), 2,0 мг/см³ (вариант № 2), 1,5±0,1 мг/см³ (вариант № 3) и 1,0±0,1 мг/см³ (вариант № 4) (субстанция дезинтеграта) (таблица 18).

Затем полученные субстанции фильтратных протеинов и белковых фракций дезинтегратов соединяли по номерам вариантов и подвергали детоксикации и дезаллергизации с помощью добавления формальдегида в три этапа в следующей последовательности 0,3 %, 0,1 %, 0,1 % с интервалом 7 ± 2 суток. При этом температурный режим детоксикации увеличивают с 40±3°С на первом этапе до 44±3°С на заключительном процессе полимеризации.

Таблица 18. Содержание компонентов препарата в вариантах ПКП‑3

Вариант ПКП‑3	Компонент № 1	Компонент № 2
Концентрация фильтратных протеинов, мг/см^3	Концентрация белково-нуклеотидных фракций, мг/см^3	Концентрация корпускулярных частиц, мг/см^3
	2,8	2,8 2,0 1,8 1,0	2,0
	2,0	1,0
	1,5	0,1
	1,0	0,05

Затем добавляли гидроокиси алюминия до 5–6 % и опять ставили в термостат при температуре 37–38°С на три недели. Расфасовывали во флаконы и стерилизовали в автоклаве при 1,0±0,2·10⁵ Па (1,0 атм.) в течение 20 минут.

Таким образом было приготовлено четыре варианта компонента № 1 (молекулярной субстанции) с содержанием фильтратных протеинов и субстанции дезинтеграта в варианте № 1 – по 2,8 мг/см³, в варианте № 2 – по 2,0 мг/см³ обеих субстанций, а в вариантах № 3 4 – по 1,5 мг/см³ и 1,0 мг/см³ фильтратных и внутриклеточных протеинов (дезинтегратов) соответственно.

Получение компонента № 2 (субъединичной субстанции). Бактериальную массу БЦЖ, полученную из жидкой питательной среды для выращивания микобактерий, разрушали на «УЗДН» при частоте 22 кГц на протяжении 30–40 минут. Полученную суспензию из дезинтегрированных разрушенных микобактериальных клеток цитоплазматического содержимого (рибосомальных и белковых фракций), а также обрывков клеточных оболочек центрифугировали в течении часа при 100000 g.

Осадок удаляли, а надосадочную жидкость сливали в 4 сосуда и доводили концентрацию белка в варианте № 1 – 2,8 мг/см³, № 2 – 2,0 мг/см³, № 3 – 1,8 мг/см³ и № 4 – 1,0 мг/см³.

Затем к ним добавляли разрушенную на шутель-аппарате бактериальную массу БЦЖ, доводя концентрацию корпускулярных частиц в варианте № 1 до 2,0 мг/см³, № 2 – 1,0 мг/см³, № 3 – 0,1 мг/см³ и № 4 – 0,05 мг/см³) (табл. 18).

Добавляли адьюванта КЭ-10-01 (производства Запорожского химического завода) к каждому из вариантов компонента № 2 до 10 % концентрации.

Расфасовывали во флаконы и стерилизовали в автоклаве при 1,0±0,2·10⁵ Па (1,0 атм.) в течение 20 минут.

Изучение безвредности и аллергенных свойств препарата ПКП‑3

Для изучения безвредности и аллергенных свойств четырех вариантов противотуберкулезного комплексного препарата ПКП‑3 и вакцины БЦЖ было отобрано 6 групп морских свинок по 10 животных в каждой, которым вводили:

1 группе – вакцину БЦЖ,

2 группе – вариант № 1 препарата ПКП‑3,

3 группе – вариант № 2 препарата ПКП‑3,

4 группе – вариант № 3 препарата ПКП‑3,

5 группе – вариант № 4 препарата ПКП‑3,

6 (контрольной) группе – стерильный физиологический раствор.

При изучении безвредности четырех вариантов противотуберкулезного препарата ПКП‑3 установлено, что введение препаратов на протяжении опыта не вызывает в организме морских свинок клинических изменений свойственных туберкулезной инфекции.

При патологоанатомическом вскрытии морских свинок установлено, что характерных для туберкулезной инфекции изменений во внутренних органах не обнаружено. В местах введения варианта № 1 образовывались большие подкожные инфильтраты, которые не рассасывались на протяжении периода исследований, а в местах введения вариантов № 2, 3 и 4 препарата ПКП‑3 обнаруживали подкожные уплотнения соединительной ткани величиной 2–3 мм.

С помощью бактериологических исследований (с постановкой биологической пробы) патологоанатомического материала, полученного от опытных животных, возбудителя туберкулеза не выделено.

Результаты аллергических исследований свидетельствуют, что все четыре варианта препарата ПКП‑3 обладают незначительными аллергенными свойствами (от 10 до 40 % реагирующих через 2,5 месяца после иммунизации).

Результаты гистологических исследований патологоанатомического материала, полученного от морских свинок, иммунизированных противотуберкулезными препаратами и иммуностимуляторами, свидетельствуют, что в лимфатических узлах, печени селезенке, легких патологические процессы не развивались.

В гистологических образцах из патологоанатомического материала от животных выявлены:

1 группа – в региональных лимфатических узлах и селезенке усиление лимфоидо-гиперпластической, макрофагальной и плазмоцитарной реакций, в отдаленных лимфатических узлах выявляли параспецифические процессы с продуктивной реакцией без характерных для туберкулезной инфекции изменений. Ткани селезенки, печени, легких, межлегочных лимфатических узлов были без свойственных для туберкулеза изменений;

2 группа – гиперплазию мякотных тяжей лимфатических узлов, содержащих в основном малые и средние лимфоциты;

3 группа – в периферической зоне расширенных реактивных центров компактные скопления зрелых лимфоцитов;

4 группа – скопление эозинофилов в лимфоаденоидной ткани мякотных тяжей, умеренное разрежение некоторых синусов лимфоидной ткани паракортикальной области регионального лимфатического узла, а также компактные скопления зрелых лимфоцитов, среди которых некоторые из них были представлены в виде ядер в периферической зоне реактивных центров;

5 группа – в региональных лимфатических узлах значительное количество реактивных центров, содержащих бласты, единичные лимфоциты и макрофаги, а также гиперплазированные мякотные тяжи в бронхиальных лимфатических узлах, содержащие малые лимфоциты, клетки плазмоцитарного ряда и очень мало бластов, а также обнаруживали эпителиальные клетки посткапилярных венул, которые были пролиферированы, ядра их просветлены.

Полученные данные позволили сделать вывод, что изучаемые варианты противотуберкулезного препарата ПКП‑3 безвредны.

Наименьшее количество реагирующих животных (по 10 %) сохранялось в группе животных иммунизированных вариантом №3и №4 препарата ПКП‑3 через 2,5 месяца после их применения.

Для изучения иммуногенных и протективных свойств четырех вариантов противотуберкулезного комплексного препарата ПКП‑3 и вакцины БЦЖ было отобрано 6 групп морских свинок по 10 животных в каждой, которым вводили:

1 группе – вакцину БЦЖ,

2 группе – вариант № 1 препарата ПКП‑3,

3 группе – вариант № 2 препарата ПКП‑3,

4 группе – вариант № 3 препарата ПКП‑3,

5 группе – вариант № 4 препарата ПКП‑3,

6 (контрольной) группе – стерильный физиологический раствор.

Через два месяца после иммунизации все животные были заражены возбудителем туберкулеза бычьего вида.

При проведении аллергических исследований установлено, что через месяц после заражения в опытных группах животных реагировало от 60 до 90 %, а уже через 75 дней – от 20 до 40 % морских свинок.

Динамика развития аллергических реакций у опытных животных отражена в табл. 19.

В контрольной группе морские свинки начали реагировать на ППД-туберкулин через месяц после заражения и к 45 суткам реагировало 100% морских свинок, а к концу опыта реагировало всего 20% морских свинок, что по видимому связано с развитием состояния анергии у животных с тотальным поражением всех паренхиматозных органов [51]. У интактных животных на протяжении опыта аллергических реакций на введение ППД-туберкулина для млекопитающих не наблюдали.

Из пораженных лимфатических узлов и паренхиматозных органов был выделен возбудитель туберкулеза бычьего вида.

При проведении гистологических исследований полученного патологоанатомического материала установлено, что наиболее значительные изменения в органах и тканях животных произошли у животных контрольной группы, где наблюдались типичные, очень хорошо выраженные распространяющиеся туберкулезные изменения в легких, а в печени, селезенке лимфатических узлах обнаруживали очень сильные, тотальные поражения часто с преобладанием некрозов.

В гистологических образцах из патологоанатомического материала от животных выявлены:

1 группа – тотальные поражения с некрозами в паховых, бронхиальных и межлегочных лимфатических узлах, типичные хорошо выраженные распространяющиеся изменения в селезенке и печени, а в легочной ткани параспецифические изменения;

2 группа – мелкие туберкулезные очажки в некоторых участках селезенки и в паховых региональных лимфатических узлах;

3 группа – очень незначительные в начальном этапе развития туберкулезные очажки в отдельных участках селезенки и незначительные поражения в паховых лимфатических узлах;

4 группа – мелкие, очень слабые, но характерные для туберкулеза участки в паховых региональных лимфатических узлах, а в отдаленных лимфатических узлах выявляли параспецифические процессы с продуктивной реакцией без характерных для туберкулезной инфекции изменений. Ткани селезенки, печени, легких, межлегочных лимфатических узлов были без свойственных для туберкулеза изменений;

5 группа – характерные для туберкулеза очаги поражения в селезенке и региональных месту введения возбудителя туберкулеза лимфатических узлах;

6 (контрольная) группа –генерализованная форма туберкулеза с диффузным поражением паренхиматозных органов и лимфатических узлов.

Полученные данные позволяют сделать вывод о том, что перспективным вариантом препарата ПКП‑3 является №3, так как он значительно превосходит по своим иммуногенным и протективным свойствам другие варианты препарата и вакцину БЦЖ. Этот вариант решено было взять за основу при дальнейшем всестороннем изучении свойств препарата.

Его иммуногенные и протективные свойства решено было изучить в комиссионном межлабораторном опыте на морских свинках в остром эксперименте с заражением возбудителем туберкулеза бычьего вида и на крупном рогатом скоте в условия хозяйства при спонтанном заражении.

При изучении безвредности противотуберкулезного комплексного препарата ПКП-3 установлено, что введение препарата на протяжении опыта не вызывает в организме морских свинок клинических изменений свойственных туберкулезной инфекции.

При патологоанатомическом вскрытии морских свинок установлено, что характерных для туберкулезной инфекции изменений во внутренних органах не обнаружено. У 50 % животных в месте введения препарата обнаружены припухлости, которые на разрезе имели утолщенные участки грануляционной ткани.

С помощью бактериологических исследований патологоанатомического материала, полученного от животных этой группы, возбудителя туберкулеза не выделено.

Результаты гистологических исследований патологоанатомического материала, полученного от морских свинок, иммунизированных препаратом ПКП-3, свидетельствуют, что в лимфатических узлах, печени, селезенке, легких патологические процессы не развивались.

В селезенке одной морской свинки выявлены признаки атрофии, а в фолликулах одного из лимфатических узлов обнаружены мелкие полости на месте лизиса макрофагов, которые возникли, возможно, под действием антигена. В легочной ткани другой морской свинки обнаружили участки с утолщением альвеолярных перегородок.

Результаты аллергических исследований свидетельствуют, что препарат ПКП-3 обладает незначительными аллергенными свойствами. Динамика развития аллергических реакций у опытных животных отражена в табл. 19.

Таблица 19. Динамика аллергических реакций у морских свинок

Группы животных	Количество животных в группе	Количество реагирующих животных, %
Сутки после иммунизации	Сутки после заражения

При проведении гематологических и биохимических исследований крови от морских свинок всех групп через месяц после заражения было установлено, что показатели количества эритроцитов и концентрации гемоглобина у животных первой и второй групп были достоверно выше, чем у животных третьей группы.

Дата добавления: 2015-10-21