Среди основных направлений поиска новых цельноклеточных вакцин наиболее разработанными представляются следующие:
1. Модифицированные вакцины БЦЖ. Их существенными недостатками являются:
а) отсутствие важных протективных антигенов. В геноме вирулентной M. bovis идентифицированы два кластера генов (RD1, RD2), отсутствующие в БЦЖ;
б) в БЦЖ имеются супрессивные антигены, препятствующие развитию протекции. Так, исследователями Королевского медицинского университета (Лондон) на модели мышиного туберкулёза было показано, что внедрение в геном общего для M. tuberculosis и БЦЖ гена белка с молекулярной массой 19 кД, отсутствующего в быстрорастущих микобактериальных штаммах (M. vaccae и M. smegmatis) приводит к ослаблению вакцинной эффективности данных микобактерий;
в) БЦЖ не способна стимулировать «правильное» сочетание субпопуляций Т-лимфоцитов, необходимое для создания протекции. Известно, что у человека и у мышей защита от туберкулёза опосредована сочетанным действием хелперных и супрессорных Т-клеток, а вакцина БЦЖ стимулирует преимущественно супрессорные Т-клетки, что возможно не является оптимальным для создания протекции.
Данные литературы о применении с лечебной целью другого средства – вакцины БЦЖ ограничены и в известной мере противоречивы. По данным ряда авторов, действие БЦЖ-терапии состоит в её способности стимулировать реактивность организма, активировать репаративные процессы [32, 54].
По данным В. А. Стаханова и соавт. [48] лечение вакциной БЦЖ и туберкулинотерапия методом электрофореза ускоряют исчезновение симптомов интоксикации, способствуют значительному рассасыванию инфильтративных изменений в легочной ткани, сокращают сроки прекращения бактериовыделения и закрытия полостей распада. Лечение вакциной БЦЖ было более эффективным при назначении его пациентам с первоначально низкими титрами противотуберкулёзных антител. Эффективность туберкулинотерапии в зависимости от первоначальных титров противотуберкулёзных антител была иной. Лечение этим методом было более эффективным при первоначально высоких величинах титров и при большом числе высоких и средних титров противотуберкулёзных антител. Неэффективному лечению соответствовали первоначально более низкие значения титров противотуберкулёзных антител, при этом их динамика не коррелировала с её эффективностью.
Как указывает Л. И. Мыколышин [35] на 19-й сессии Международного союза борьбы с туберкулёзом отмечалось, что вакцина БЦЖ позволяет предупредить развитие туберкулёзного менингита, милиарного туберкулёза и ряда других тяжелых его форм, однако остается не до конца установленной продолжительность иммунитета, а также механизмы его развития. Что касается направлений для поиска новой вакцины и совершенствования БЦЖ, ведутся работы по созданию ДНК вакцины с использованием «защитного» гена, фильтратных протеинов, протеин-цитокинов, рекомбинантных и субъединичных вакцин, создаются новые атенуированные вакцины, путем изменения гена вирулентности.
Подсчитано, что создание новой вакцины даже с эффективностью 50 % к 2050 году предотвратит 30 млн. случаев заболевания, а с эффективностью 80 % – 130 млн.
Ведущие ученые Н. П. Овдиенко и А. С. Донченко [38] видят решение проблемы профилактики туберкулёза крупного рогатого скота в разработке нового поколения средств и схем специфической защиты, создании принципиально новых экологически безопасных молекулярных вакцин (протективных антигенов).
В заключение следует сказать, что поиск иммуногенных и протективных антигенов микобактерий с целью конструирования на их основе противотуберкулёзных вакцин ведется беспрерывно во многих направлениях. На сегодняшний день к решению этой проблемы ближе всего стоят работы по усилению иммуногенных свойств вакцины БЦЖ различными иммуномодуляторами, а также по конструированию противотуберкулёзных вакцин, созданных на основе фильтратных протеинов, внутриклеточных протеиновых антигенов [19, 22, 23, 37, 55].
Для приготовления компонентов фильтратных протеинов и фракций низкомолекулярных белков необходимо накопление бактериальной массы культуры микобактерий, и в связи с чем актуальным является разработка новой и не дорогой синтетической питательной среды, которая бы содержала незначительное количество солей.
Стратегия создания новых вакцин
Разрабатываемая стратегия создания новых вакцин на базе БЦЖ включает попытки дополнить геном БЦЖ генами из участков RD1 или RD2, но необходимо учитывать возможность восстановления вирулентности вакцинного штамма.
Существует возможность удалить «супрессивные» последовательности из генома БЦЖ, создавая так называемые штаммы-нокауты по данному гену. Такая возможность в отношении гена белка с молекулярной массой 19 кД была реализована, однако существенного усиления протективных свойств зарегистрировано не было.
Разрабатываются способы преодоления жесткой компартментализации антигенов, доставляемых вакциной БЦЖ, посредством создания рекомбинантной вакцины, экспрессирующей гены белков-цитолизинов. Такие белки способны индуцировать образование пор в мембранах и стимулировать презентацию антигена по механизму, рестриктированному генами главного комплекса гистосовместимости класса 1.
Конструкция на основе экспрессирующей листериолизин БЦЖ была получена Хессом и Кауфманом, показавшими, что она действительно способна усилить активирующее действие БЦЖ в отношении CD8 Т-клеток.
Известно, что дентритные клетки микобактерий способны одинаково эффективно презентировать бактериальные антигены на молекулах классов 1 и 2.
К. Демангель с соавт. использовали нагруженные БЦЖ дентритные клетки для иммунизации мышей против туберкулёза. На используемой модели им удалось показать, что при равной эффективности с обычной схемой БЦЖ-вакцинации схема вакцинации нагруженными живой БЦЖ дентритными клетками занимает на порядок меньше времени.
2. Живые аттенуированные штаммы. Антигенный состав вакцинного штамма должен как можно ближе соответствовать составу патогена. Трудности направленного создания мутантов впервые удалось преодолеть группе исследователей института Пастера (Париж), разработавших методы аллельного обмена транспозонного мутагенеза применительно к медленно растущим микобактериям.
Используя метод аллельного обмена, сумели сконструировать аксотрофный мутант purC (один из генов пути биосинтеза пуринов) M. tuberculosis и продемонстрировать определенную степень защиты, создаваемую данным мутантом в модели аэрозольного заражения морских свинок.
Созданный аналогичным образом под руководством Б. Джекобса мутант M. tuberculosis H37Rv (mc 23026), лишенный гена lys A и, соответственно, не способный расти в отсутствие экзогенного источника лизина, в модели на безмикробных мышах C57BL/6 создает уровень протекции сравнимый с БЦЖ.
3. Живые вакцины немикобактериального происхождения. Исследуется потенциал векторов вирусов Vaccinia sp., aro A – мутанты сальмонеллы и некоторых других микроорганизмов.
4. Микобактерии, аттенуированные естественным путем. В качестве терапевтических и профилактических препаратов предлагаются M. vaccae, М. microti, М. habana. Продемонстрированы слабопротективные свойства M. smegmatis и M. vaccae на модели мышиного туберкулёза.
Применение убитой нагреванием M. vaccae в комплексной терапии впервые выявленного туберкулёза позволило ускорить прекращение бактериовыделения с мокротой и улучшить рентгенологическую картину через 6 месяцев после начала лечения.
5. ДНК-вакцины. Для генетической или полинуклеотидной вакцинации используют кольцевую двунитевую ДНК бактериальной плазмиды, в которой экспрессия нужного (встроенного) гена находится под контролем сильного вирусного промотера.
R. E. Tascon с соавт. [103] продемонстрировали протекцию от внутриперитонеального заражения M. tuberculosis у аутбредных мышей Паркса, вакцинированных белком теплового шока с молекулярной массой 65 кД из M. leprae. Полученный уровень защиты оказался сравним с протекцией, создаваемой вакциной БЦЖ.
Несколько менее эффективными оказались плазмиды, экспрессирующие еще один белок теплового шока hsp70, а также богатый пролином антиген с молекулярной массой 36 кД и ESAT-6. Обнадеживающие результаты получены при изучении ДНК-вакцин на базе комплекса Аг 85 (3 микобактериальных белка с молекулярной массой 30–32 кД).
Так, иммунизация мышей C57BL/6 ДНК Аг 85А не только индуцирует у них специфический иммунный ответ по варианту Т-хелперов 1-го типа, но и защищает их от последующего внутривенного или аэрозольного заражения M. tuberculosis.
А. Т. Камат с соавт., иммунизируя мышей одновременно тремя генами M. tuberculosis – МРТ64 (23 кД), Аг85В (30 кД) и ESAT-6 (6 кД) получили достаточно высокий уровень защиты животных от заражения, несколько уступающий вакцине БЦЖ.
Предпринимаются попытки усиления иммуногенности ДНК-вакцин путем объединения в одну молекулу антигенных последовательностей и генов, модулирующих иммунный ответ факторов. Иммунизация мышей ДНК МРТ 64 Аг85В в комбинации с геном фактора, стимулирующего образование колоний гранулоцитов-макрофагов, усиливает специфический иммунный ответ, но не оказывает влияние на протективность вакцины.
6. Субъединичные вакцины. Наиболее перспективным с точки зрения конструирования новых противотуберкулёзных субъединичных вакцин представляются секретируемые белки микобактерий (так называемые белки культурального фильтрата), что хорошо увязывается с большей эффективностью живых вакцинных препаратов по сравнению с убитыми [28].
Группой ученых из Дании во главе с П. Андерсеном выделено семейство белков раннего культурального фильтрата M. tuberculosis (ESAT-6, TB10.4, TB9), обладающих существенной протективной активностью в экспериментальных моделях. Авторами предложена довольно удачная комбинация бромида диоктадециламмония (DDA) и монофосфориллипида А (MPL).
Изучение иммуногенности 2 препаратов, состоящих из белков культурального фильтрата M. tuberculosis, на приматах продемонстрировало безопасность и эффективность использования адъюванта RIBI. Однако пока не существует разрешенного к применению в клинической практике адъюванта, сочетающего абсолютную безопасность с высокой эффективностью.
В некоторых случаях комбинация белков или отдельных эпитопов, объединенных в единую молекулу, способна генерировать более эффективную протекцию, чем отдельные составляющие.
В. В. Еремееву [24] удалось продемонстрировать, что смесь ESAT-6 и МРТ59 (антиген 85В) либо гибридный белок, состоящий из двух молекул, в сочетании с комбинированным адъювантом MPL/DDA способны защитить мышей от туберкулёза не хуже БЦЖ.
Группе американских исследователей путем скрининга иммунодоминантных эпитопов микобактериальных белков с помощью Т-клеток от здоровых ППД-позитивных доноров удалось выделить ряд протективных антигенов. Объединение этих эпитопов в полипротеин позволило создать весьма перспективную вакцину.
До настоящего времени не выработано единое мнение о целесообразности применения вакцины БЦЖ для профилактики туберкулёза крупного рогатого скота.
Противники вакцинопрофилактики крупного рогатого скота с помощью БЦЖ единственным и основным недостатком считают отсутствие тестов, позволяющих дифференцировать поствакцинальную и инфекционную аллергии.
Хотя вакцинация БЦЖ предупреждает появление значительных туберкулёзных поражений, препятствует распространению возбудителя инфекции, но в недостаточной степени профилактирует развитие туберкулёзного процесса. По данным некоторых авторов, она защищает от 33 до 50 % восприимчивых животных от спонтанного заражения.
Анализируя результаты собственных исследований Д. Д. Новак и М. Базарбаев [36] утверждают, что в организме экспериментальных животных микобактерии штамма БЦЖ персистируют до 12 месяцев и способствуют сдерживанию развития туберкулёзной инфекции.
Использование вакцинопрофилактики в общем комплексе противотуберкулёзных мероприятий дает возможность не только сдерживать развитие туберкулёзной инфекции но и приостанавливать этот процесс. В организме привитых животных вакциной БЦЖ, микобактерии проходят следующие фазы развития:
1 – адаптации, до 15 суток;
2 – максимального вегетирования, до 50 суток;
3 – стационарного развития, до 150 суток;
4 – постепенного угасания.
Авторы предлагают прививать вакциной БЦЖ молодняк крупного рогатого скота, полученный в хозяйствах неблагополучных по туберкулёзу. В таких хозяйствах иммунизации подвергают всех телят как на благополучных, так и неблагополучных фермах. Вакцину БЦЖ вводят телятам в возрасте от 2 недель до 2 месяцев. На неблагополучных фермах, где вакцину применяют впервые, прививают всех телят в возрасте до 12 месяцев.
Вакцинированных телят выращивают изолированно от взрослых животных. В послемолозивный период им выпаивают пастеризованное молоко или заменитель цельного молока. Через 1,5–2 месяца после вакцинации телят исследуют внутрикожной туберкулиновой пробой с помощью ППД-туберкулина для млекопитающих. Проявление чувствительности к туберкулину свидетельствует о выработке в организме животного иммунитета.
В хозяйствах, где применялась вакцина БЦЖ для иммунизации молодняка крупного рогатого скота, после их оздоровления и снятия ограничений, вновь рождающихся телят подвергают в течении года однократной прививке.
О целесообразности вакцинации животных против туберкулёза сообщают А. А. Бойко и Е. П. Сапегина [4]. Они обращают внимание на сложность осуществления эффективного противоэпизоотического комплекса борьбы с туберкулёзом крупного рогатого скота при отсутствии вакцины.
Б. Я. Хайкин и В. А. Зубакин [52], рассматривая профилактическую эффективность вакцины БЦЖ при разных схемах её применения, указывали на эффективность использования вакцины в откормочных хозяйствах, в результате чего снижалась заболеваемость, а при убое не регистрировали поражений паренхиматозных органов и лимфатических узлов.
Авторами проанализированы результаты использования вакцины БЦЖ в хозяйствах с разной эпизоотической ситуацией и при вакцинации животных разных возрастных групп. Перед вакцинацией всех животных старше 2 месяцев подвергали туберкулинизации. Вакцинировали только здоровых животных и телят от здоровых матерей. Телят в возрасте до 1 месяца вакцинировали без исследования на туберкулёз. Исследовано 26 ферм, в т. ч. на 10 фермах иммунизацию проводили строго по инструкции, т. е. вакцинировали телят в возрасте от 10–15 суток и проводили ревакцинацию через 12 месяцев. За этими животными вели наблюдения в течение 3–5 лет. В двух откормочных хозяйствах вакцинировали телят разных возрастных групп от 1 месяца до 1 года. На 6 фермах с разным уровнем эпизоотической ситуации вакцинировали коров. Результаты учитывали по выборочным аллергическим исследованиям и данным ветеринарно-санитарной экспертизы туш и органов после убоя на мясокомбинате. Установлено, что для защиты животных от туберкулёзной инфекции вакцину БЦЖ следует применять на поголовье крупного рогатого скота как можно в более раннем возрасте. В благополучных зонах при ограниченном распространении туберкулёза возможно однократное вакцинирование. После ревакцинации у отдельных телят реакция на туберкулин может сохранятся в течение 2–2,5 лет. Поэтому, хотя ревакцинация телят через 12 месяцев удлиняет сроки иммунитета, она нарушает систему отбора нетелей в возрасте 16–18 месяцев из-за наличия у многих животных реакций на туберкулин. Авторы отмечают, что в зонах длительного неблагополучия по туберкулёзу иммунизация коров вакциной БЦЖ нецелесообразна.
Также приведены результаты наблюдений по 4 хозяйствам Троицкого и Увельского районов Челябинской области, где вакцину начали применять с 1985 г. Все хозяйства были неблагополучными по туберкулёзу более 8 лет. Выявляемость реагирующих на туберкулин в среднем за год составляла от 7 до 15 % от общего поголовья животных, а уровень подтверждения диагноза на туберкулёз на мясокомбинате составлял от 5 до 13 %. В изоляторах каждого хозяйства содержалось до 1000 голов крупного рогатого скота, реагирующего на туберкулин. В колхозе «Южный Урал» вакциной БЦЖ одновременно привили все поголовье крупного рогатого скота. Взрослых животных до иммунизации исследовали внутрикожной туберкулиновой пробой путем двукратного введения туберкулина с 30-суточным интервалом. Реагирующий скот выделяли в отдельные дворы, но оставляли на территории фермы на 2 месяца. Нереагировавшим коровам, нетелям, молодняку всех возрастов вакцину вводили внутрикожно в среднюю треть шеи в дозе 1,0 мг с 0,3 см3 растворителя. В остальных хозяйствах вакцину применяли в той же дозе, только на молодняке. Коров и телят через 45–60 суток после прививки проверяли внутрикожной туберкулиновой пробой. В результате этих исследований установлено, что вакцина БЦЖ предохраняет молодняк крупного рогатого скота от заражения в течении года.
Исследования В. Е. Симбирцева и А. А. Петрова [45], проведенные в Челябинской области, также свидетельствуют о высокой эффективности применения вакцины БЦЖ на телятах. С помощью вакцинопрофилактики повышалась эффективность комплекса противотуберкулёзных мер, снижались затраты и сокращались сроки оздоровления хозяйств.
Головко Н. Д. и соавт. [12]. Выбирали оптимальную схему иммунизации для достижения лучших результатов, а также определяли минимальный возраст телят для получения лучшего иммунного ответа для чего провели сравнительные исследования результатов внутрикожного введения вакцины БЦЖ телятам – до 14 суток; 1 мес.; 3 мес.; 4 мес.; 7 мес. Установлено, что иммунные реакции зависят от возраста; они были меньшими у телят до 14 суток и возрастали соответственно к высшей точке у 7-месячных животных. Кроме того, у телят, привитых до 14 суток, туберкулиновая реакция через 12 месяцев после вакцинации не проявлялась, а у привитых в 2 месяцев отмечалась от 0,5 до 2 % опытных животных. Авторы отмечают, что эффективность иммунизации определяется степенью активации специфической защиты у привитых животных. В частности, она повышается в результате ревакцинации; для молодняка реиммунизация была особенно эффективной.
Н. А. Донченко [20] утверждает, что вакцинация БЦЖ не только обеспечивает надежную иммунологическую защиту животных от заражения, но и способствует выявлению ареактивных к туберкулину особей. Для выявления ареактивного к туберкулиновой пробе молодняка крупного рогатого скота использовали противотуберкулёзную вакцину БЦЖ. Автору удалось ликвидировать скрытые источники возбудителя туберкулёза среди телят и взрослых животных и значительно ускорить сроки оздоровления стад от туберкулёзной инфекции с помощью схемы выявления ареактивного к туберкулиновой пробе крупного рогатого скота, иммунизированного вакциной БЦЖ.
Изучена эффективность вакцины БЦЖ для специфической профилактики туберкулёза у телят. Определены сроки и кратность введения вакцины. Изучена динамика ответной аллергической иммунологической реакции телят на введение вакцины, напряженность и длительность иммунитета. В опытах на телятах в возрасте до 3 месяцев установлена оптимальная доза для вакцинации – 1,0 мг.
Установлено, что микобактерии вакцинного штамма БЦЖ до 6 месяцев вегетируют в организме крупного рогатого скота в виде смеси бактериальных и L-форм, а после 6 месяцев только в L-форме. Аллергические реакции на туберкулин до 6 месяцев сохраняются у 73 % животных, а к 12 месяцам полностью исчезают. Вакцина создает напряженный клеточный иммунитет: уровень бластообразования у вакцинированных животных выше (16 %), чем у контрольных (3 %) и реакция сохраняется до 3 лет.
Организм крупного рогатого скота на введение вакцины БЦЖ отвечает проявлением морфологических реакций и активацией иммуннокомпетентных органов до 6 месяцев после вакцинации, а в отдаленные сроки интенсивность их снижается.
Противоэпизоотическую эффективность специфической профилактики туберкулёза с помощью вакцины БЦЖ и особенности вакцинного процесса у крупного рогатого скота изучались Я. Г. Диких [17].
Специфическую профилактику туберкулёза маралов с помощью вакцины БЦЖ в условиях Сибири проводил С. И. Огнев [39].
Наряду с положительными отзывами о профилактической ценности вакцины БЦЖ рядом исследователей были отмечены и ее недостатки в ряде экспериментов.
B. M. Buddle с соавт. [63] провели испытания протективных свойств вакцины БЦЖ и убитой культуры M. vacce на молодняке крупного рогатого скота. Животных иммунизировали интратрахеально и подкожно, а заражение культурой M. bovis проводили через 54 суток после иммунизации. В результате проведенных исследований установлено, что только у животных, иммунизированных интратрахеальным путем, не обнаружено патологоанатомических изменений в легочной ткани.
При вакцинации путём подкожного введения БЦЖ наблюдали незначительные изменения в лёгких. В группе животных, иммунизированных убитой культурой M. vacce обнаруживали патологоанатомические изменения, не отличающиеся от таковых в контрольной (не вакцинированной) группе, хотя авторами отмечены значительные иммунные реакции после введения препарата. Исследователями также доказано, что защитный эффект вакцины БЦЖ не зависит от дозы препарата полученного животным в защитных целях.
После первой иммунизации вакциной БЦЖ происходит мобилизация Т- и В-систем иммунитета, усиливается фагоцитарная активность макрофагов, происходит сенсибилизация Т-лимфоцитов, что сопровождается развитием гиперчувствительности замедленного типа, а также наработкой противотуберкулёзных антител, которые сдерживают развитие туберкулёзной инфекции.
Ревакцинация БЦЖ стимулирует угасающий после первой вакцинации иммунитет, о чем свидетельствует повышение уровня противотуберкулёзных антител.
В Новозеландском научно-исследовательском ветеринарном центре проведено сравнительное изучение эффективности интрагастральной и интрадуоденальной иммунизации вакциной БЦЖ опоссумов с целью профилактики туберкулёза бычьего вида.
Исследователи B. M. Buddle и F. E Aldwell [64] доказали, что более эффективен интрадуоденальный метод введения вакцины. Он дает возможность защитить от искусственного заражения туберкулёзом значительно большее количество животных, хотя вне зависимости от метода введения вакцинированные животные оказались более устойчивыми при искусственном заражении, чем контрольные (невакцинированные).
Aldwell et al. [57] и Buddle et al. [63; 64] доказали надежность вакцинации БЦЖ опоссумов и высокий уровень их защиты при интратрахеальном заражении M. bovis.
При изучении полевых штаммов M. tuberculosis и M. bovis установлено, что все они могут быть применены для конструирования вакцины против туберкулёза.
Для защиты животных от M. bovis были предложены живые аттенуированные вакцины, химические, с измененным генным аппаратом и искусственные рекомбинантные. А также были выделены из инфицированного и вакцинированного крупного рогатого скота Т-клеточные антигены крови для скрининга космид M. bovis и експресированы в M. smegmatis.
Исследователями из Англии, Ирландии, Новой Зеландии проведено сравнительное изучение экономической эффективности и целесообразности вакцинации БЦЖ популяций барсуков и рогатого скота животноводческих хозяйств. Было установлено, что нецелесообразно проводить иммунизацию популяций барсуков вакциной БЦЖ из-за значительной плотности особей, постоянной миграции особей данной популяции в различные регионы и невозможностью постоянного контроля, хотя иммунизация барсуков экономически более рентабельна, чем вакцинация рогатого скота.
На протяжении последнего десятилетия происходит поиск новых поколений вакцин. Проблема сочетанной патологии туберкулёза и приобретенного иммунодефицита поставила вопрос о целевой разработке иммуностимулирующих препаратов. Всего в мире предлагается для исследований 600 новых веществ в качестве иммуностимуляторов.
Еще в 1988 г. K. Matsuo с соавт. [88] выделили ген экстрацеллюлярного L-антигена. Последний состоит из 323 аминокислот, и содержит сигнальный пептид из 40 аминокислот. В культуральном фильтрате M. tuberculosis и M. bovis найден белок MPB 64, ген которого клонирован с использованием олигонуклеотидных зондов. Секвенирование показало, что структурный ген белка MPB 64 состоит из 618 пар нуклеотидов и кодирует белок с молекулярной массой 22,4 кД.
M. Cohen с соавт. [66] отмечали, что при иммунизации без адъюванта белки микобактерий с молекулярной массой 35 кД в дозе 1,0 мг вызывали лишь выработку антител, а при внутрикожном введении 10 мкг происходила активация гуморального и клеточного иммунного ответа.
В. Н. Лазаренко и соавт. [33] считают перспективными разработки рекомбинантных вакцин на основе вакцинного штамма БЦЖ и других видов микобактерий, и положительно оценивают значение в этих исследованиях данных о плазмидах микобактерий, а также конструирование химерных векторов.
Идея специфической иммуномодуляции возникла еще в 60–70-е гг., когда J. Joumans [77] показали значение рибосомальной фракции, а E. Ribi [95, 94] – клеточных стенок микобактерий туберкулёза в осуществлении защиты против туберкулёза. Л. А. Гореловой с соавт. [13] получен специфический иммуномодулятор из цитоплазмы M. bovis БЦЖ (ЦП), который в экспериментальных условиях давал достаточно высокий (до 60 %) уровень защиты.
В. С. Гуткин, А. Н. Востряков, Б. А. Горбатов [14], И. Ф. Копылова [29], D. Granger, K. Jamamoto, E. Ribi [70], P. Langrange [84] также сообщают о протективных свойствах отдельных фракций и оболочек из микобактерий туберкулёза.
Так, В. С. Гуткин с соавт. [14] изучали иммуногенность клеточных оболочек микобактерий туберкулёза, проводя сравнительное изучение иммуногенных и протективных свойств вакцины БЦЖ и масляно-водной эмульсии оболочек микобактерий туберкулёза на морских свинках и мышах. В результате исследований установлено, что фракция оболочек микобактерий обладает выраженными протективными свойствами, поскольку средняя продолжительность жизни животных иммунизированных вакциной БЦЖ в дозе 1,0 мг, составила 82,4 суток; оболочками БЦЖ в дозе 0,1 мг – 84; оболочками M. bovis в дозе 0,37 мг – 83,5; а контрольные (не иммунизированные) животные жили в среднем 68,9 суток. Напряженность противотуберкулёзного иммунитета, вызванного введением оболочек микобактерий туберкулёза, через 4 месяца в сравнении с 2 месяцами сроком несколько снижалась: после иммунизации оболочками БЦЖ – на 10,8 суток, оболочками M. bovis – на 17,2 суток, но превышала среднюю продолжительность жизни контрольных (не иммунизированных) животных на 21,7 и 16,3 суток, соответственно.
С целью повышения протективных свойств вакцины БЦЖ ряд исследователей использовали различные иммуномодуляторы: соли высокомолекулярной РНК, полирибоната, Т- и В-активины, «ЦП-БЦЖ».
В опытах на морских свинках и кроликах изучено действие иммуномодулятора – высокополимерной РНК, выделенной из дрожжей Saccharomyces cerevisiae в сочетании с вакциной БЦЖ. Исследователями установлено, что вакцина БЦЖ и иммуномодулятор, введенные в организм одновременно, действуют угнетающе на развитие туберкулёзного процесса.
А. С. Донченко с соавт. [18] для повышения резистентности организма животных и иммуногенности вакцины БЦЖ использовали индуктор интерферона – ридостин. В опытах на инфицированных морских свинках установлено, что введение вакцины БЦЖ и ридостина приводит к снижению кожной аллергической реакции. Изучение протеинограммы, полученной в опытах на кроликах, показало, что во всех белковых фракциях происходят изменения. Содержание альбуминов у зараженных животных уменьшается, а повышается у животных, которым перед заражением вводили вакцину БЦЖ и ридостин.
По заключению авторов вакцина БЦЖ полностью не защищает животных от заражения туберкулёзной инфекцией, а вакцинация лабораторных животных БЦЖ вместе с индуктором интерферона –ридостином – повышает клеточный, гуморальный иммунитет и, таким образом, иммуногенность вакцины.
В опытах на морских свинках и телятах, проведенных этими же исследователями, изучено действие поливедрина – иммуномодулятора, представляющего собой высокополимерную РНК. Установлено, что морские свинки, зараженные возбудителем туберкулёза бычьего вида без предварительной иммунизации, погибли в течение 77,03±3,55 суток. Продолжительность жизни животных, привитых вакциной БЦЖ без поливедрина, составила 99,5±3,55 суток, что в 1,5 раза меньше, чем срок жизни животных, иммунизированных БЦЖ с иммуномодулятором. В опыте на телятах установлено, что сочетание поливедрина и вакцины БЦЖ значительно повышает иммунный статус организма животных.
Достоверные изменения отмечены в показателях опсонофагоцитарной активности, протеинограммы и в величине бласттрансформации лимфоцитов. У телят, привитых вакциной БЦЖ совместно с поливердином, в эксперименте достигается полная защита организма от заражения возбудителем туберкулёза. Авторы считают, что сочетанное введение вакцины БЦЖ и поливедрина необходимо использовать с целью профилактики туберкулёза у молодняка крупного рогатого скота, а поливедрин и способ повышения протективных свойств вакцины БЦЖ с указанным препаратом рекомендован для применения в ветеринарии Департаментом ветеринарии Минсельхозпрода РФ.
Теми же авторами изучалось влияние иммуномодуляторов поливедрина и ридостина на течение туберкулёзного процесса у морских свинок, вакцинированных БЦЖ и зараженных возбудителем туберкулёза бычьего вида. Прослеживали динамику развития туберкулёзного процесса под влиянием поливедрина и ридостина отдельно и вместе с вакциной БЦЖ, проводя забой морских свинок через кажде 10 суток. Установлено, что вакцина БЦЖ с иммуномодуляторами защищает морских свинок от заражения возбудителем туберкулёза. При использовании поливедрина эффективность составила 20 %, а ридостина – 40 %. У морских свинок, привитых вакциной БЦЖ с иммуномодуляторами, исчезает гиперчувствительность замедленного типа на внутрикожное введение ППД-туберкулина для млекопитающих на 180 сутки после введения данной композиции препаратов.
Дата добавления: 2015-10-21; просмотров: 14 | Нарушение авторских прав
| <== предыдущая лекция | | | следующая лекция ==> |