Л. В. Галатова с соавт. [11] для усиления действия вакцины БЦЖ применяли иммуномодуляторы – Т-активин, эракондом, витамин С и нуклеинат натрия. Было изучено влияние вакцинации в сочетании с иммуномодуляторами на концентрацию нейраминовой кислоты в сыворотке крови телят и получены положительные результаты.
Учитывая высокую эффективность Т и В-активинов для повышения протективных свойств противобруцеллезной вакцины, И. Д. Александров, И. П. Хабузов и Н. С. Ладан [3] испытали эти природные иммуномодуляторы для увеличения протективной активности вакцины БЦЖ при адъювантном и реиммуномодулирующем использовании. Молодняк крупного рогатого скота 6–7-суточного возраста иммунизировали вакциной БЦЖ Ставропольского НИИ вакцин и сывороток и Т- и В-активинами Покровского биозавода. Эффективность комбинированного использования иммуномодуляторов сравнивали с применением на фоне вакцины БЦЖ только Т-активина, только Т- и В-активинов без вакцинации, Т-активина без иммунизации, вакцины БЦЖ без иммуномодуляторов.
Установлено, что Т- и В-активины адъювантно вводимые вместе с вакциной БЦЖ в течение первых трех суток и используемые повторно через 30 и 180 суток, повышают иммуномодулирующее влияние последней, обеспечивая стабильный рост иммунобиологических показателей естественной резистентности, клеточного и гуморального иммунитета.
При патологоанатомическом, гистологическом и бактериологическом исследованиях убитых телят развитие туберкулёзного процесса подтверждено у 66 % контрольных (не иммунизированных) животных. В группах, где иммунизированным животным вводили Т- и В-активины, изменений, свойственных туберкулёзной инфекции, не обнаружили, а возбудитель из отобранного патологического материала не выделен.
Авторы отмечают, что иммуномодуляторы природного происхождения, представляющие собой низкомолекулярные пептиды, не только корригируют активность иммунной системы и показатели естественной резистентности, особенно на фоне иммунодефицита у животных в ранний неонатальный период, но и положительно влияют на протективные свойства такой слабоаглютиногенной вакцины, как БЦЖ. Т- и В-активины не только ликвидируют иммунодефицит у новорождённых животных, но и в течение первого года жизни способствуют поддержанию активности иммунной системы и естественной резистентности в пределах показателей здоровых животных. При этом реиммунизация через 30 и 180 суток повышает иммунобиологические показатели, а также специфическое, профилактическое влияние вакцины БЦЖ, пролонгируя продолжительность противотуберкулёзного иммунитета с 10 до 12 месяцев и предотвращая заражения животных в условия спонтанного инфицирования.
Иммуномодулирующее влияние вакцины БЦЖ связывают с адъювантной ролью низкомолекулярного мурамоилдипептида, который является участком полимерной пептидогликановой основы клеточной стенки микобактерий. Низкомолекулярные мурамоилдипептиды, Т- и В-активины, не являясь антагонистами, стимулируют высвобождение и накопление мононуклеарных клеток (макрофагов), участвующих в первой стадии иммунного ответа в качестве антигенпредставляющих клеток, а также выделяемых макрофагами различных классов цитокинов, интерлейкинов.
По мнению авторов, монокины и ИЛ-1 стимулируют Т-хелперы к секреции лимфокина ИЛ-2 – ростового фактора Т-клеток. При совместном действии ИЛ-1 и ИЛ-2 происходит активная выработка Т-хелперов – будущих продуцентов В-клеток, иммуноглобулинов класса G, выполняющих роль антител. Авторы считают, что мишенями для адъювантного действия низкомолекулярных пептидов являются не только макрофаги. Аналогичную роль могут выполнять Т- и В-лимфоциты, уровень которых повышается под влиянием Т- и В-активинов.
Также возможно влияние низкомолекулярных пептидов непосредственно на В-клетки, что делает их способными к ответу и в отсутствие Т-клеток. Подтверждением этого может служить скорость наступления ответной реакции иммунных органов на введение иммуномодуляторов. Так, уже через сутки после введения Т- и В-активинов в крови возрастает содержание Т- и В-лимфоцитов, иммуноглобулинов класса G, в составе которых изменяется соотношение G1 и G2 в сторону увеличения Ig G1, обеспечивающего антибактериальный иммунитет. Под влиянием Т- и В-активинов происходит относительно быстрая коррекция спонтанного иммунодефицита в условиях соответствия технологии кормления и содержания животных, иммунная система функционирует в пределах физиологической нормы, что является основой пролонгирования иммунной защиты животных на фоне специфической профилактики туберкулёзной инфекции.
Также была проведена иммунизация крупного рогатого скота против туберкулёза с использованием модифицированной вакцины БЦЖ, инкапсулированной липосомами. K. K. Addo et al. [1] удалось таким образом значительно повысить протективные свойства вакцинного препарата по сравнению со стандартной лиофильной формой БЦЖ.
Отечественными и зарубежными авторами, кроме вакцины БЦЖ были предложены вакцины: Vole, «M.P», B-115, H37Ra, RiRa, Франк, «Академия», AIR, VDS, БК-Харьков, К и др. [2, 44].
Создаются новые рекомбинантные вакцины на базе БЦЖ. Для этой цели пытаются использовать микобактерии M. vaccae и M. smegmatis. Изучается возможность изменения и замены аллелей в микобактериях, а также реинтродукция локусов от M. bovis в ДНК БЦЖ.
Были попытки изготовления и применения векторных вакцин, где в качестве носителя служил возбудитель туберкулёза мышиного вида с измененным геном вирулентности.
Исследования D. G. Newell и R. G. Hewinson [91] привели к значительным успехам в разработке микобактериальных вакцин, сконструированных на основе последних достижений в области молекулярной генетики. Авторы говорят о перспективе получения смоделированных эффективных микобактериальных вакцин.
Введение в организм животного большого количества екзоантигенов микобактерий, продуктов, содержащих белковые специфические антигены, фрагментов пептидов, вызывает быструю продукцию Т- и В-клеточных популяций и достигается значительный протективный эффект при экспериментальном туберкулёзе.
По данным других исследователей иммуногенными и протективными свойствами обладают и внутриклеточные протеины M. tuberculosis, их дальнейшее изучение продолжается.
T. Fifis et al. [69] предлагают применять в качестве иммуногенных и протективных средств смеси антигенов, состоящих из микобактерий с измененными аллелями генов патогенности и продуктов их распада.
Для стимуляции активного Т-клеточного иммунного ответа S. H. Kaufmann [80] и S. H. Kaufmann и D. B. Young [81] предлагают применять адъюванты комплекса ISCOMS и липосомы.
Существует другое направление конструирования протективных противотуберкулёзных препаратов, заключающееся в переносе генов патогенности и специфичности в векторные вакцинные штаммы – аденовирусные, сальмонеллёзные и др.
Защитные туберкулёзные антигены были экспрессированы в коды ДНК векторных штаммов сальмонелл и вызывали бурные Т- и В-клеточные ответы, которые сопровождались значительными аллергическими реакциями. В качестве адъюванта были взяты убитые микобактериальные клетки и выделенные из последних гликозиды. Полученные таким образом противотуберкулёзные препараты могут быть применены как парентерально так и оральным способами.
H. Gulle et al. [71] были получены фракции лизатов разбитых культур микобактерий туберкулёза и культуральных фильтратов для изучения Т-клеточного иммунного ответа у иммунизированных и инфицированных животных. Полученные фракции лизатов оказались не только пригодными для использования их с целью дифференциации поствакцинальных реакций, но и были замечены высокие протективные свойства в опытах на морских свинках. Авторы считают, что большинство фракций лизатов пригодны для использования в качестве кандидатов в вакцинные антигены.
M. S. Hughes et al. [75] изучали значение вакцинации барсуков против бычьего туберкулёза в условиях лабораторного и производственного экспериментов. Авторы отмечают необходимость разработки вакцин, не обладающих аллергическими свойствами и позволяющих использовать кожный тест в программе по искоренению туберкулёза.
Существующие данные о том, что основной защитный эффект, вырабатываемый иммунной системой хозяина на введение иммуногенного специфического антигена, включает выработку клеток CD4 Th1 и цитолитических клеток CD8, позволяют выдвигать требования к новым вакцинам, которые бы вызывали в организме значительные изменения в Т-клеточной системе. Исследователи отмечают, что вакцина, вызывающая такие изменения в организме животного, способна препятствовать начальному инфицированию после заражения M. bovis, уменьшать степень инфицирования и устранять из организма антигенное начало.
Необходимость использовать различные антигены микобактерий для профилактики туберкулёза, а также совершенствование применения вакцины БЦЖ – наиважнейшая проблема всей стратегии по искоренению туберкулёза в Европейском Союзе. Новая вакцина должна значительно превосходить по своим иммуногенным и протективным свойствам БЦЖ, быть доступной в цене и в применении.
В качестве альтернативного способа противотуберкулёзной иммунизации была предложена иммунизация неживыми вакцинами. Было показано, что для сохранения иммунологической памяти при туберкулёзе не обязательна персистенция живых микобактерий.
По данным А. А. Авербаха [1] итальянские исследователи Menzetti и Signorini провели клиническое изучение препарата, состоящего из смеси убитых формалином культур M. tuberculosis, M. bovis и M. avium. Указанная вакцина при внутрикожном методе апликации туберкулиноотрицательным лицам вызывала вираж туберкулиновой чувствительности при однократном введении у 50 % и при двукратном – у 70–80 % привитых. Авторы также заявили о защитном эффекте использованного ими препарата. Позже работы в этом направлении сводились главным образом к изучению трех типов вакцин:
1) из внутриклеточных фракций;
2) из полисахаридных фракций;
3) из клеточных оболочек.
Защитный эффект вакцин из клеточных оболочек микобактерий наблюдали в опытах на мышах и обезьянах. Этот тип вакцины является наиболее перспективным в отношении напряженности и стабильности иммунитета.
J. Sarvda [99] провел исследования, направленные на получение синтетической туберкулёзной вакцины. Он синтезировал октапептид Asp-Gly-Gly-Ser-Glu-Ser-Glu-Gly и гексадекапептид Asp-Gly-Gly-Ser-Glu-Ser-Gly-Gly-Lys-Asn-Gly-Ser-Gln-Met-Arg-Leu, которые воспроизводят фрагменты туберкулинактивного внутриклеточного микобактериального белка, но иммуногенные свойства этих пептидов оказались незначительными.
Белки и нуклеопептиды микобактерий – это полные антигены, вызывающие образование у животных специфических антител, являющиеся активными и специфичными в серологических реакциях. Протективные свойства белковых и пептидных компонентов микобактерий изучены в единичных экспериментальных работах. Удалением клеточных оболочек из гомогената микобактерий получают «частичковую» фракцию, содержащую рибосомы, обрывки цитоплазматической мембраны, низкомолекулярные белки и полипептиды, которые обладают иммуногенными и протективными свойствами.
Из гликопептидов клеточных стенок, обладающих адъювантной активностью, наиболее изучены пептидогликаны микобактерий. К ним относятся нерастворимые адъюванты: пептидогликолипид (скелет клеточной оболочки), экстракты клеточных стенок, тригалоза-6,6-димиколат и водорастворимые адъюванты: гликопептид мурамовой кислоты, связанный с арабиногалактаном, и N-ацетилмурамил-L-аланил-D-изоглутамил (т. е. МДП). МДП-компонент водорастворимого адъюванта, обладает выраженными иммуностимулирующими свойствами и представляет собой минимальную адъювантно-активную структуру бактериальных пептидогликанов. Все гликопептиды стимулируют продукцию антител и реакции гиперчувствительности замедленного типа при введении вместе с антигеном в водно-масляных эмульсиях. F. Toullet et al. [103] считают, что МДП и его аналоги представляют собой простейшую структурную единицу бактериальных пептидогликанов и способствуют замещению целых убитых микобактерий или их компонентов.
При введении с белковым антигеном, МДП особенно эффективно усиливает вторичный иммунный ответ с повышением уровня преимущественно Ig G- антител.
Многие исследователи указывают на токсино-аллергизирующее и иммунизирующее действие различных фракций микобактерий.
Большинство внутриплазматических включений, белков (в том числе эндотоксинов), рибосомальных фракций, по данным G. Joumans и A. Joumans [79] не обладают аллергическими свойствами, но достаточно иммуногенны.
Заслуживает внимания работа А. А. Евглевского [21] о возможности редуцирования аллергенной активности и инактивации токсических свойств эндотоксинов микобактерий туберкулёза для получения вакцинных противотуберкулёзных препаратов (анатоксинов) и целенаправленной десенсибилизации животных.
Для специфической профилактики туберкулёза А. А. Евглевским [23] предложен туберкулёзный анатоксин. По данным автора анатоксин предотвращает развитие туберкулёзной инфекции у 100 % морских свинок и кроликов после двукратного заражения возбудителем туберкулёза бычьего вида. Испытание защитных свойств вакцинного препарата проведено и на крупном рогатом скоте при спонтанном инфицировании животных в условиях эпизоотологического эксперимента. При этом было установлено, что двукратное введение туберкулёзного анатоксина 496 коровам и нетелям обеспечивало защиту животных от заражения микобактериями туберкулёза. В тоже время в течение 18 месяцев выделено 220 животных, реагирующих на внутрикожное введение туберкулина с утолщением кожной складки на 3–7 мм при отрицательной внутривенной аллергической пробе. При проведении контрольного диагностического убоя 67 коров и нетелей опытной группы, установлено, что при патологоанатомическом и гистологическом исследованиях не установлено наличия патологоанатомических изменений свойственных туберкулёзной инфекции, при бактериологическом – возбудитель туберкулёза не обнаружен.
С. Ю. Стебловская [49] в основу изготовления нового варианта туберкулёзного анатоксина положила инактивацию экзо- и эндотоксинов культуральной жидкости M. bovis растворами формальдегида 0,3–0,4 % в конечной концентрации. Антигенная активность исходного материала эндо- и экзотоксинов равнялась 90–100 тыс. Т. Е./см3. Полученные аллергены, лишенные аллергических свойств после детоксикации, адсорбировались на гидроокись алюминия с последующим декантированием неактивной надосадочной жидкости. Уровень иммунного ответа определялся интенсивностью антигенного воздействия. Двукратная иммунизация здоровых животных в дозе 500 тыс. и 1 млн. инактивированных формальдегидом туберкулиновых единиц обеспечивала одинаковый по напряженности иммунный ответ на протяжении 4–6 месяцев. Иммунизация животных анатоксином способствовала активации клеточного и гуморального иммунитета, более выраженные показатели наблюдались среди коров, не реагирующих на туберкулин. Достоверно выраженные изменения иммунобиологической реактивности организма иммунизированных животных проявлялись в последовательном накоплении в сыворотке крови общего белка и иммуноглобулинов класса G и M. Изменения в Т-системе клеточного иммунитета наблюдались в сторону увеличения Т-хелперов и уменьшения Т-супрессоров. Автором предложена методика повышения иммуногенных свойств противотуберкулёзного анатоксина с помощью иммуномодулятора – левамизоля. Установлено, что специфическая иммунизация животных противотуберкулёзным анатоксином в сочетании с иммуномодулятором левамизолем вызывает более выраженную начальную иммунологическую реакцию и позволяет повысить резистентность организма к заражению возбудителем туберкулёза.
Вакцинопрофилактика
Для сохранения благополучия по туберкулёзу Европейским союзом принята программа вакцинации природного источника возбудителя инфекции – грызунов (опоссумы, хомяки, крысы). Вакцинацию проводят оральным путём (с кормом) с использованием вакцины БЦЖ.
В нашей стране в 80-е годы были предприняты попытки применения вакцины БЦЖ в борьбе с туберкулёзом животных и пушных зверей. Были достигнуты определённые успехи, но широкого распространения вакцинопрофилактика не нашла. Это было связано с трудностями диференциации поствакцинальных и инфекционных аллергических реакций и низкими протективными свойствами БЦЖ.
Обстоятельными экспериментами, выполненными отечественными и зарубежными учёными, доказано, что на сегодняшний день наиболее перспективными являются субъединичные вакцинные препараты, полученные из секреторных белков микобактерий, цитоплазматических компонентов, антигенов клеточных стенок, которые обладают высокими протективными свойствами и вызывают временную аллергизацию привитых животных. К таким препаратам относятся туберкулёзный анатоксин и молекулярно-субъединичный комплексный препарат “ПКП-3”, предложенные Бусолом В.А. и Коваленко А.М. Согласно результатам предварительных испытаний этих препаратов в условиях эпизоотологического эксперимента, они позволяют надёжно защитить до 80% восприимчивых животных при применении их в общем комплексе противотуберкулёзных мероприятий [27; 25; 26; 41].
Разработка иммуностимуляторов для повышения протективных свойств вакцины БЦЖ.
При введении вакцины БЦЖ в организм животного иммунная система организма сталкивается со сложным набором антигенов.
Цельноклеточные вакцины, сложные по своему составу фракции клеточных стенок и цитоплазматические субстанции иммуногенны и содержат собственные встроенные в мембраны иммуностимулирующие молекулы. Антигены таких вакцин конкурируют за презентирующие клетки, а иммунодоминирующие антигены не всегда индуцируют максимальную протекцию.
Для повышения протективных свойств вакцины БЦЖ нами были разработаны два иммуностимулятора: синтетический (СИС) и биологический (БИС).
СИС содержит продукты жизнедеятельности микобактерий (туберкулопротеины), адсорбированные на гидроокись алюминия.
Технология получения СИС. На жидкой синтетической питательной среде для выращивания микобактерий выращивали в течение 55–60 суток культуру возбудителя туберкулеза бычьего вида (штамм Vallae). После термической обработки в автоклаве при 2·105 Па (2 атм.) в течение 2 часов бактериальную массу отделяли от культурального фильтрата и пропускали его через стерилизующие пластины. Затем фильтрат центрифугировали при 100000g в течение 30 минут, отбирали надосадочную жидкость и в ней доводили концентрацию белка до 2,0±0,1 мг/см3. Белок адсорбировали на гидроокиси алюминия с 10 % содержанием последней в конечном продукте. В стерильных условиях готовый препарат расфасовывали по флаконам.
БИС – суспензия сенсибилизированных к микобактериям и законсервированных эритроцитов крови крупного рогатого скота.
Технология получения БИС. В благополучном по туберкулезу хозяйстве клинически здоровой, нереагирующей на ППД-туберкулин корове вводили взвесь микобактерий вакцинного штамма БЦЖ на физиологическом растворе в дозе 10,0 мг/см3, двукратно, с интервалом 14 суток. Через 30 суток после повторного введения вакцинного штамма у животного отбирали кровь и удаляли фибрин и лейкоциты.
Брали 50,0 см3 отмытых эритроцитов, добавляли такой же объём фосфатного буфера с рН=7,2 и 80,0 см3 16,5 % раствора формальдегида. Смесь ставили на 2 часа на водяную баню при температуре 37°С, взбалтывая сосуд через каждые 15 минут.
Полученную суспензию клеток крови центрифугировали при 1500 об./мин в течение 10 минут. Надосадочную жидкость декантировали, а к осадку добавляли 40,0 см3 фосфатного буфера (рН=7,2), взбалтывали жидкость и опять центрифугируя при том же режиме.
После 6-кратного отмывания отбирали 20,0 см3 эритроцитов и готовили из них 10,0 % суспензию на фосфатном буфере (рН=7,2), к которой добавляли 200,0 см3 раствора таннина, разбавленного фосфатным буфером (рН=7,2) в соотношении 1:20000, и выдерживали при температуре 20°С в течении 10 минут.
Полученный раствор отмывали трехкратно фосфатным буфером (рН=7,2) с помощью центрифуги в вышеописанном режиме.
Готовили 5 % суспензию эритроцитов, добавляя к 400,0 см3 10 % суспензии равный объём культурального фильтрата микобактерий туберкулеза бычьего вида с концентрацией белка 1,1 мг/см3 и выдерживали на водяной бане при температуре 37±0,5°С в течение 2 часов.
Затем этот раствор центрифугировали при 1500 об./мин в течение 10 минут, сливали надосадочную жидкость, а к осадку добавляли раствор фенола с конечной концентрацией его в готовой суспензии 0,25 %. Готовую стерильную суспензию фасовали в стерильные флаконы.
Вакцину БЦЖ готовили из выращенной на синтетической питательной среде Сотона культуры вакцинного штамма БЦЖ. Снимали с питательной среды 50–60-суточную культуру во флаконы с бусами и шутулировали в течение 30–40 минут, добавляя 10 % стерильного глицерина и доводя физиологическим раствором концентрацию бактериальной массы в суспензии до 1,0 мг/см3, фасовали в стерильных условиях во флаконы.
Для изучения безвредности, иммуногенных и протективных свойств приготовленных опытных образцов иммуномодуляторов и вакцины БЦЖ были поставлены опыты на морских свинках.
Опыт по изучению безвредности и аллергенных свойств иммуностимуляторов и вакцины БЦЖ
Изучали безвредность и аллергенные свойства вакцины БЦЖ, синтетического (СИС) и биологичекского (БИС) иммуностимуляторов.
Для проведения опыта было отобрано 6 групп животных по 10 в каждой. Животным вводили:
1 группе – вакцину БЦЖ,
2 группе – иммуностимуляторы СИС и БИС по 0,95 см3,
3 группе – вакцину БЦЖ и иммуностимулятор БИС,
4 группе – вакцину БЦЖ и иммуностимулятор СИС,
5 группе – вакцину БЦЖ и иммуностимуляторы БИС и СИС,
6 группе – стерильный физиологический раствор.
При изучении безвредности вакцины БЦЖ и иммуностимуляторов установлено, что введение препаратов на протяжении опыта не вызывает в организме морских свинок клинических изменений, свойственных туберкулезной инфекции.
При патогоанатомическом вскрытии морских свинок установлено, что характерных для туберкулезной инфекции изменений во внутренних органах не обнаружено.
С помощью бактериологических исследований патологоанатомического материала, полученного от опытных животных, возбудителя туберкулеза не выделено.
Результаты гистологических исследований патологоанатомического материала, полученного от морских свинок, иммунизированных противотуберкулезными препаратами и иммуностимуляторами, свидетельствуют, что в лимфатических узлах, печени селезенке, легких патологические процессы не развивались.
В гистологических образцах из патологоанатомического материала от животных первой группы в региональных лимфатических узлах и селезенке установлено усиление лимфоидо-гиперпластической, макрофагальной и плазмоцитарной реакций, а также наблюдали повышенный распад зрелых лимфоцитов, в отдаленных лимфатических узлах выявляли параспецифические процессы с продуктивной реакцией без характерных для туберкулезной инфекции изменений. Ткани селезенки, печени, легких, межлегочных лимфатических узлов были без свойственных для туберкулеза изменений.
У морских свинок второй группы отмечали гиперплазию мякотных тяжей лимфатических узлов, содержащих в основном малые и средние лимфоциты, третьей – компактные скопления зрелых лимфоцитов в периферической зоне расширенных реактивных центров.
У животных четвертой группы в фолликулах заглоточных, предлопаточных, средостенных, бронхиальных лимфатических узлов наблюдали реактивные центры крупных размеров и значительное количество ретикулярных клеток, бластов, макрофагов, пятой – значительное количество реактивных центров в региональных и бронхиальных лимфатических узлах, содержащих много бластов, единичные лимфоциты и макрофаги. В цитоплазме макрофагов обнаруживали обломки ядер распавшихся клеток, что свидетельствует об активации клеток макрофагального звена иммунной системы.
Полученные данные позволили сделать вывод о том, что изучаемые иммуномодуляторы СИС и БИС, вакцина БЦЖ безвредны для животных.
Результаты аллергических исследований свидетельствовали, что наименьшими аллергенными свойствами обладают СИС и БИС, а наиболее высокими –СИС + БЦЖ и БЦЖ.
Аллергические реакции у животных, иммунизированных вакциной БЦЖ самостоятельно и в кооперации с БИС выявляли у 80 %, а в кооперации с СИС реакции сохранялись лишь у 40 % морских свинок через 2,5 месяца после их применения.
Высокий уровень сохранения клеточных иммунных ответов у 80 и 40 % животных после введения соответственно БЦЖ с БИС и СИС у морских свинок на протяжении 2,5 месяцев свидетельствуют о значительной активации предложенными комбинациями препаратов Т-клеточного звена иммунной системы.
Для изучения протективных свойств изучаемых иммуностимуляторов, используемых самостоятельно и совместно с вакциной БЦЖ были поставлены опыты на морских свинках с заражением их возбудителем туберкулеза бычьего вида.
Изучение иммуногенных и протективных свойств иммуностимуляторов и вакцины БЦЖ
Испытание иммуногенных и протективных свойств вакцины БЦЖ, синтетического (СИС) и биологичекского (БИС) иммуностимуляторов, регенераторного биостимулятора (РБС), производства научно-производственного центра «Эрбис» (г. Киев) проводили как самостоятельно, так и совместно с вакциной БЦЖ.
Для проведения опыта было отобрано 9 групп животных по 10 в каждой. Животным вводили:
1 группе – вакцину БЦЖ,
2 группе – иммуностимуляторы СИС и БИС,
3 группе – вакцину БЦЖ и иммуностимулятор БИС,
4 группе – вакцину БЦЖ и иммуностимулятор СИС,
5 группе – вакцину БЦЖ и иммуностимуляторы БИС и СИС,
6 группе – вакцину БЦЖ и биостимулятор РБС,
7 группе – биостимулятор РБС,
8 группе – биостимулятор РБС и иммуностимуляторы БИС и СИС,
9 группе – стерильный физиологический раствор.
Всем животным опытных групп препараты вводили двукратно с интервалом 14 суток.
Динамика развития аллергических реакций у опытных животных после заражения возбудителем туберкулеза бычьего вида (штамм Vallae) отражена в табл. 14.
Таблица 14. Динамика аллергических реакций у морских свинок
Группа животных | Количество реагирующих животных, % | ||||
Сутки после заражения | |||||
При проведении патологоанатомических исследований, проведенных через три месяца после заражения, выявлены туберкулезные изменения во внутренних органах морских свинок.
Результаты патологоанатомических исследований подтверждены бактериологическими исследованиями. Из лимфатических узлов, паренхиматозных органов, пораженных туберкулезом, был выделен возбудитель туберкулеза бычьего вида на питательной среде Левенштейна-Иенсена.
При проведении гистологических исследований полученного патологоанатомического материала установлено, что наиболее значительные изменения в органах и тканях животных произошли у животных контрольной (девятой) группы, где наблюдались типичные, очень хорошо выраженные распространяющиеся туберкулезные изменения в легких, а в печени, селезенке и лимфатических узлах обнаруживали очень сильные, тотальные поражения часто с преобладанием некрозов.
В гистологических образцах из патологоанатомического материала от животных обнаружены:
1 группа – тотальные поражения с некрозами в паховых и межлегочных лимфатических узлах, типичные хорошо выраженные распространяющиеся изменения в селезенке, а в легочной ткани параспецифические изменения;
2 и 7 группы – мелкие, характерные для туберкулеза, поражения тканей легких и типичные туберкулезные распространяющиеся изменения в печени, селезенке и лимфатических узлах;
8 группа – слабые, мелкие туберкулезные участки в печени, селезенке, межлегочных и тотальные поражения с некрозами в паховых региональных отдаленных лимфатических узлах, а в легочной ткани параспецифические изменения с продуктивной реакцией без характерных туберкулезных изменений;
4 и 6 группы – мелкие, характерные участки в печени, межлегочных, отдаленных лимфатических узлах и параспецифические изменения в легочной ткани, в региональных лимфатических узлах очень сильные поражения с некрозами;
3 группа – мелкие участки с туберкулезными изменениями в селезенке, межлегочных лимфатических узлах. В отдаленных лимфоузлах выявляли ярко выраженные распространяющиеся туберкулезные изменения, а в паховых – диффузное некротическое поражение. Параспецифические изменения наблюдали в легочной ткани, а в печени изменений не наблюдали;
5 группа – параспецифические процессы с продуктивной реакцией без характерных для туберкулезной инфекции изменений в селезенке и межлегочных лимфатических узлах. Типичные, очень хорошо выраженные, распространяющиеся туберкулезные изменения выявлены в отдаленных и паховых лимфатических узлах. В легких наблюдали параспецифические изменения, а в печени без изменений;
Дата добавления: 2015-10-21; просмотров: 16 | Нарушение авторских прав
| <== предыдущая лекция | | | следующая лекция ==> |