Схема постановки реакции преципитации

1. По типу реакции флоккуляции. Реакция ставится в узких преципитационных пробирках диаметром 0,5 см, высотой 7— 10 см.

Ингредиенты	Опыт	Контроль
Преципитирующая сыворотка, мл	0,5	-
Нормальная сыворотка того же вида животного, мл	-	0,5
Преципитиноген в различных или одних разведениях	0,5	0,5
Встряхнуть, инактивировать при +37 С° 2 часа или 18 – 20С° 18 – 20 часов
Учет реакции по наличию хлопьев преципитации	+	-

При положительной реакции на дно пробирки выпадают хлопья преципитата (флокулята — рыхлые хлопьевидные агрегаты).

2. По типу реакции кольцепреципитации. В 2 узкие (преципитационные) пробирки налить по 0,1 — 0,2 мл иммунной преципитирующей сыворотки (опыт) и нормальную неиммунную сыворотку того же вида (контроль), затем осторожно по стенке пробирки наслоить термопреципитиноген (например, гаптен). Реакцию учитывают при содержании пробирок либо в термостате, либо при комнатной температуре. В опытной пробирке на границе обеих жидкостей в течение З — 10 минут образуется плотное мутно-белое кольцо — кольцо преципитации. В контроле такого кольца нет.

З. Диффузионный метод преципитации в геле. Принцип метода: вещества (антиген, антитела), диффундирующие в геле навстречу друг другу, реагируя между собой, образуют преципитат беловатого цвета разной конфигурации. В контроле он не наблюдается.

Ингредиенты и техника постановки реакции:

- Готовят 1 - 1,5 % голодный агар - агар, разливают его в горячем расплавлен­ном виде в любые стеклянные объекты: в чашки, на отмытые фотопластины, на предметные стекла (для микрометода). Дают застыть.

- Под объекты подкладывают бумажные расчерченные ориентиры и специальным пробойником делают на равном расстоянии друг от друга лунки. Дно их заливают 1 каплей жидкого агара для избежания затекания реагентов под агар.

- Вносят в лунки 0,1 - 0,5 мл испытуемого вещества (антигена) и напротив специфические преципитирующие сыворотки с антителами.

АТ-6

АТ-1

АТ-2

АТ-3

АТ-4

АТ-5

АГ

а)

б)

в)

АГ-1

АГ-2

АГ-3

АГ-4

АТ

- Выдержать в термостате 18 - 24 часа, накрыв реагенты крышкой или стеклом для предохранения от испарения.

- Учет результатов ведут по появлению линии преципитата между содержи­мым лунок.

- Метка позволяет дифференцировать родство между антигенами (рис. справа). Концевое слияние полос свидетельствует о полной идентичности антигенов; (а) при стыке полос - неполное родство (б) перекрест - разные антигены, но есть групповые антигены (в).

4. Капиллярная реакция преципитации подобна первым методам, но ставится в капиллярах из комплекта для определения СРБ (С реактивного белка).

ОПЫТ

КОНТРОЛЬ

АГ

СЫВОРОТКА

АТ-(N)

+АТ

Методика: В отличие от пробирочного метода первым набирают лёгкий по массе АГ, затем сюда же – сыворотку с тяжелым АТ. После этого оба капилляра вертикально фиксируют в пластине.

Учёт результата производят в опытной пробе по кольцу преципитации на границе АГ и АТ. В контроле его нет.

Дата добавления: 2015-09-05