Лейкоциты



Определение количества лейкоцитов (подсчет лейкоцитарной формулы крови)

Подсчет лейкоцитарной формулы крови производят в окрашенных мазках периферической крови. Считать лучше ближе к концу мазка в самом тонком месте, не менее 200 клеток (исключение составляют выраженные лейкопении), а затем выводят процентное соотношение отдельных видов лейкоцитов.

Подсчет рекомендуется производить в одном порядке: половину клеток считать в верхней, половину — в нижней части мазка, не заходя на самый край и середину, по зигзагу (3—4 поля зрения вдоль мазка, 3—4 поля под прямым углом к середине мазка, затем 3—4 поля в сторону параллельно краю, вновь под прямым углом вверх и так далее в одну сторону).

Приготовление мазков. Тщательно вымытым и обезжиренным предметным стеклом (его краем) прикасаются к капле крови на месте укола. Мазок делают шлифовальным стеклом, поставив его под углом в 45° к предметному стеклу впереди капли. Подведя стекло к этой капле, ждут, пока кровь расплывется вдоль его ребра, затем быстрым легким движением проводят шлифовальное стекло вперед, не отрывая от предметного раньше, чем иссякнет вся капля.

Правильно сделанный мазок имеет желтоватый цвет (тонкий), не достигает краев стекла и заканчивается в виде следа (усов).

Окрашивание сухих мазков производят после предварительной фиксации. Лучшая фиксация достигается в абсолютном метиленовом спирте (3—5 мин) или в смеси Никифорова из равных частей абсолютного этилового спирта и эфира (30 мин).

К основным гематологическим краскам относят метиленовый синий и его производное — азур I (метиленовый азуровый) и азур II (смесь равных частей азура I и метиленового синего), к кислым — водорастворимый желтый эозин.

Краска Романовского—Гимзе (заводского приготовления) имеет следующий состав: азур II — 3 г, водорастворимый желтый эозин — 0,8 г, метиловый спирт — 250 мл и глицерин — 250 мл. Рабочий раствор краски приготавливают из расчета 1,5—2 капли готовой краски на 1 мл дистиллированной воды. Краску наливают на мазок возможно более высоким слоем, длительность окраски — 30—35 мин. По истечении этого срока мазки промывают водой и высушивают на воздухе.

При этом способе удается хорошо дифференцировать ядро, но гораздо хуже — нейтрофильную зернистость цитоплазмы, поэтому его широко используют для окраски мазка периферической крови.

На фиксированный мазок наливают пипеткой готовый краситель — фиксатор Мая-Грюнвальда, представляющий собой раствор эозинметиленового синего в метиленовом спирте, на 3 мин. Через 3 мин к покрывающей раствор краске добавляют равное количество дистиллированной воды и продолжают окрашивание еще 1 мин. После этого краску смывают и мазок высушивают на воздухе. Затем высушенный мазок докрашивают свежеприготовленным водным раствором краски Романовского в течение 8—15 мин. Этот метод считается наилучшим, особенно для окраски мазков костно-мозговых пунктатов.

Увеличение числа лейкоцитов в периферической крови выше нормального уровня называют лейкоцитозом, уменьшение — лейкопенией. Лейкоцитоз (лейкопения) редко характеризуется пропорциональным увеличением (уменьшением) числа лейкоцитов всех видов, например лейкоцитоз при сгущении крови. В большинстве случаев имеется увеличение числа (уменьшение) какого-либо одного типа клеток. Увеличение или уменьшение числа отдельных видов лейкоцитов в крови может быть относительным или абсолютным в зависимости от общего содержания лейкоцитов — нормального, повышенного или пониженного. Изменение числа, соотношения отдельных форм и морфологии лейкоцитов зависит от вида и вирулентности возбудителя, характера, течения и распространенности патологического процесса, индивидуальной реакции организма.

Лейкоцитарная формула — процентное соотношение различных форм лейкоцитов в крови, подсчитываемых в окрашенном мазке. Она подвержена значительным индивидуальным колебаниям (табл. 1). Для правильного представления о происходящих в крови сдвигах необходимо учитывать не только процентные (относительные), но и абсолютные величины (содержание каждого вида лейкоцитов в 1 мм³ крови). Для этого процент данных клеток умножают на общее число лейкоцитов крови без двух нулей. Например: число лейкоцитов в 1 мм³ крови — 6500, моноцитов — 7%. Абсолютное число моноцитов в 1 мм³ крови — 7X65=455. Содержание одного вида лейкоцитов (см.) может изменяться независимо от других. Так, при угнетении костного мозга абсолютное число нейтрофилов уменьшается, а лимфоцитов может остаться неизмененным, но процент их нарастает. Это будет относительным лимфоцитозом. Например: при брюшном тифе число лейкоцитов может снизиться до 3000 в 1 мм³, а лимфоцитов оказаться 50%. Между тем абсолютное число лимфоцитов здесь 50X30=1500, т. е. абсолютного лимфоцитоза нет. Сдвиги в лейкоцитарной формуле могут зависеть от перераспределения лейкоцитов в сосудистом русле или от изменения деятельности кроветворных органов. При ускоренной регенерации клеток, главным образом нейтрофилов, в крови увеличивается число палочкоядерных клеток, обнаруживаются молодые, незрелые формы — метамиелоциты, миелоциты. Такое изменение лейкоцитарной формулы (характерное, в частности, для воспалительных процессов) называется сдвигом нейтрофилов влево (увеличиваются числа на левой стороне записи). Изменения лейкоцитарной формулы нельзя рассматривать в отрыве от общей клинической картины. Так, например, для инфекций, вызванных кокковой флорой, типичен нейтрофильный лейкоцитоз со сдвигом влево и эозинопенией, для тифо-паратифозных заболеваний, вирусного гриппа, бруцеллеза характерна картина угнетения костного мозга с нейтропенией и относительным лимфоцитозом. Однако увеличение числа нейтрофилов при вирусном гриппе может свидетельствовать не только о выздоровлении, но и об осложнении болезни бактериальной инфекцией. При

Лейкоцитарная формула — процентное соотношение в крови отдельных видов лейкоцитов. Лейкоцитарные формулы составляют на основании подсчета в окрашенном сухом мазке крови по возможности большего числа лейкоцитов, но не менее 200. Она позволяет оценивать функциональное состояние тех различных кроветворных тканей, которые поставляют в кровь отдельные виды лейкоцитов. Лейкоцитарная формула подвержена значительным колебаниям и у здоровых людей. Практически чаще всего пользуются Л. ф. крови человека, предложенной Шиллингом (V. Schilling) (табл. 1).
Для правильного представления о реальных соотношениях отдельных форм лейкоцитов необходимо знать общее количество их в 1 мм³ крови и процентные показатели количества лейкоцитов перевести в абсолютные числа. Количество лейкоцитов отдельных видов может изменяться независимо друг от друга, в связи с чем следует различать их относительное и абсолютное увеличение и уменьшение. Например, при лимфолейкозе увеличивается как относительное, так и абсолютное количество лимфоцитов; относительное количество нейтрофилов остается низким, а абсолютное их число может увеличиться.
Различают также два типа сдвига: регенеративный и дегенеративный. Первый состоит в численном увеличении юных и вместе с ними палочкоядерных с соответственным уменьшением сегментированных. Сдвиг этот указывает на «омоложение» белой крови в результате повышенной деятельности костного мозга и увеличенной убыли нейтрофилов. Сдвиг дегенеративный состоит в увеличении только одной формы — палочкоядерных. При этом общее количество лейкоцитов не увеличено, а нормально или даже уменьшено. Сдвиг этот указывает на угнетение функции костного мозга.
Для наглядного отображения абсолютных количеств и соотношения отдельных форм лейкоцитов в 1 мм³ крови предложено графическое изображение лейкоцитарной формулы — так называемый лейкоцитарный профиль (рис. 1). За норму для взрослого человека приняты следующие цифры: нейтрофилы 3000—5500, лимфоциты 1200—2000, моноциты 200—600, эозинофилы 100—250, базофилы 0—80, а общее число лейкоцитов 4000—8000. Соединив в каждом столбце точки, поставленные на местах, соответствующих абсолютному количеству того или иного вида лейкоцитов, получаем ломаную линию, которая и представляет собой лейкоцитарный профиль.

ОЦЕНКА ИММУНОЛОГИЧЕСКОГО СТАТУСА ОРГАНИЗМА

Современные методы определения иммунологического статуса организма человека включают ряд тестов для дифференцированной оценки Т- и В-систем иммунитета. Оценка клеточного иммунитета (Т-системы) проводится путем определения:

1) количества Т-лимфоцитов в крови методом спонтанного розеткообразования лимфоцитов с эритроцитами барана (Е-ро-зетки); 2) функциональной активности Т-лимфоцитов в реакции бласттрансформации лимфоцитов (РБТЛ) in vitro под влиянием митогенов или антигена либо по уровню продукции лимфоцитами гуморальных медиаторов клеточного иммунитета (лимфо-кинов) в тестах подавления миграции макрофагов и др., а также при постановке кожных проб гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) для оценки возможной предварительной сенсибилизации организма к данному антигену (аллергену).

Оценка гуморального иммунитета (В-системы) проводится путем определения количества В-лимфоцитов в крови реакцией иммунофлюоресценции с антисывороткой против иммуноглобулинов человека или путем выявления на В-лимфоцитах рецепторов для комплемента — с помощью теста розеткообразования лимфоцитов с эритроцитами, несущими на себе комплекс: антиэритроцитарные антитела+комплемент (ЕАС-розет-ки). Функциональная активность В-лимфоцитов оценивается косвенно по уровням сывороточных иммуноглобулинов (Ig) различных классов: A,G, М.

Дата добавления: 2015-08-20