Определение витаминов в биологически-активных веществах и фармацевтических препаратах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Один из самых популярных методов определения хроматографии является высокоэффективная жидкостная хроматография, благодаря возможности одновременного определения сразу нескольких соединений [10]. Для определения оптимальных условий определения витаминов необходимо изучить влияние на их удерживание хроматографических параметров. Наиболее значительно на удерживание соединений влияют природа неподвижной фазы, рН подвижной фазы, содержание ацетонитрила в элюенте. Поскольку многие витамины по своей природе являются кислотами или основаниями, большое влияние на их удерживание оказывает рН элюента. Одно из основных условий для достижения наиболее эффективного разделения веществ – выбор оптимального градиентного режима.

Витамины: 1 – пиридоксамин; 2 - тиамин; 3 –никотинамид; 4 – никотиновая кислота; 5 - аскорбиновая кислота; 6 – пиридоксаль; 7 – пиридоксин; 8 –пантотеновая кислота; 9 – фолиевая кислота; 10 – цианокоболамин; 11 – рибофлавин; 12 – биотин Рисунок 17 – Хроматограмма стандартного раствора витаминов  

Используя различные градиентные профили, можно добиться хорошего разрешения хроматографических пиков веществ, имеющие близкие значения времени удерживания, а также существенно снизить общее время проведения анализа. Выбор и поддержание оптимальной температуры колонки важно для успешного разделения и определения анализируемых веществ.

Оптимальными условиями для разделения витаминов являются: элюент а – 0,6% фосфорная кислота, элюент b – ацетонитрил, температура колонки 20ºС.Представлена хроматограмма модельной смеси витаминов в выбранных условиях (рисунок 17).

Были проведены анализы медицинского витаминного препарата «Ундевит», БАД «Алфавит», витаминного премикса «GS-vit 12». Для извлечения витаминов из исследуемых объектов использовали 1%- й раствор фосфорной кислоты (рН 1,5). Экстракцию витаминов из исследуемых объектов проводили в ультразвуковой бане. Точную навеску анализируемого образца помещали в стеклянную колбу вместимостью 250,0 мл, заливали экстрагентом и помещали в ультразвуковую ванну. Величину навески препарата рассчитывали таким образом, что бы получившиеся концентрации для всех определяемых витаминов попадали в диапазон всех определяемых концентраций. Для проведения анализа в форме таблеток отобрали 15 – 20 штук, взвесили и тщательно растерты в фарфоровой ступке. Расчеты содержания витаминов проводилось по отношению к массе, эквивалентной одной таблетке. Данные по полученным результатам хорошо согласуются с паспортными данными. Приведена хроматограмма экстракта драже «Ундевит» (рисунок 18) [3]:

Витамины: 1 – тиамин; 2 – никотиновая кислота; 3 – аскорбиновая кислота; 4 – пиридоксин; 5 – пантотеновая кислота; 6 – фолиевая кислота; 7 – рибофлавин Рисунок 18 - Хроматограмма экстракта дражже «Ундевит»  

Дата добавления: 2015-08-17