Постановка серологических реакций

Для диагностики инфекционных болезней наиболее часто пользуются реакцией агглютинации, или иначе серологическая реакция сущность которой состоит в склеивании бактерий между собой под влиянием специфических антител — агглютининов, вырабатывающихся в процессе болезни в организме больного.
Серологическая реакция агглютинации может быть поставлена в пробирке и на стекле. Реакция в пробирке ставится следующим образом: 0,1 мл сыворотки крови больного разводят физиологическим раствором в 100, 200, 400, 800 и более раз. Затем в каждую пробирку добавляют по одной капле диагностикума (убитой культуры того или иного возбудителя) и все пробирки ставят в термостат при температуре 37° на 12—24 часа.
В тех пробирках, где произошло склеивание бактерий (агглютинация) и оседание их на дно пробирки, реакция считается положительной. Сыворотку можно одновременно использовать для постановки реакции агглютинации с различными диагностикумами: убитыми брюшнотифозными палочками (реакция Видаля), риккетсиями Провачека, бруцеллами (реакция Райта), протеем OXi9 (реакция Вейля—Феликса) и многими другими возбудителями инфекционных болезней.
Для постановки серологической реакции агглютинации обычно достаточно 0,2—0,3 мл сыворотки. Для получения такого количества сыворотки у больного необходимо взять 1—2 мл крови из мякоти пальца или из вены. Перед взятием крови из пальца на серологическую реакцию необходимо его тщательно обмыть, место укола протереть спиртом, а затем подсушить на воздухе или протереть эфиром.
Место прокола и инструменты должны быть сухими. Прокол кожи производят на глубину 2—3 мм либо иглой Франка, либо обычной инъекционной иглой. Укол должен быть настолько глубоким, чтобы кровь самопроизвольно выступала на поверхность кожи. Палец больного фиксируют первым и вторым пальцем левой руки, захватывая его с боков ногтевой фаланги. Первую выступившую каплю крови стирают сухой стерильной ватой. Последующие капли выдавливают в пробирку, для чего палец массируют по направлению к периферии. Руку при этом лучше держать несколько опущенной. Кровь на реакцию агглютинации можно брать в нестерильную пробирку.
Из вены кровь на серологические реакции берут обычным путем. При этом во избежание гемолиза нельзя пользоваться шприцем для насасывания крови из вены; кровь должна свободно вытекать в пробирку через иглу.
Реже в диагностических целях пользуются реакцией преципитации (осаждения) и лизиса (растворения).
Наиболее специфичными и высокочувствительными реакциями, но в то же время и наиболее сложными являются серологическая реакция связывания комплемента и реакция гемапунотинации. Кровь для этих исследований берут аналогичным образом, но в несколько большем объеме (3—5 мл).
Серологические реакции становятся положительными у больных оконце 1—2-й недели болезни; в дальнейшем титр их нарастает, что является в диагностическом отношении очень важным симптомом. Поэтому серологические реакции рекомендуется брать в динамике, т. е. повторять с интервалом в 5—10 дней.
Серологические исследования крови при вирусных болезнях обязательно производят дважды. Первую пробу берут на 1—7-й день болезни, вторую —после 15-го дня. Реакции ставятся одновременно с обеими сыворотками. Положительной серологическая реакция считается только в том случае, если титр её, со второй пробой крови превышает титр с первой пробой более чем в 2 раза.

Исследуемый материал: В первую очередь для проведения серологического анализа используют биологический материал, собранный от пациента: сыворотка крови слюна фекальные массы В некоторых случаях исследуется материал, выделенный из определённых объектов окружающей среды: вода почва

Методика проведения анализа или забора крови: Данный анализ не требует специальной подготовки пациента. Забор крови проводится утром натощак и, производится в процедурных кабинетах лечебных учреждений, согласно общепринятым гематологическим методикам. Для серологического исследования забор крови производится двумя методами: венозную кровь забирают из локтевой вены пациента, а капиллярную кровь – из безымянного пальца. Кровь помещают в стерильные герметичные пробирки.

Особенности транспортировки крови и хранения сыворотки: Сразу же после забора крови её транспортируют в специальную лабораторию, где в тот же день производится подготовка сыворотки. Хранение сыворотки допускается не более 4 – 6 дней в холодильной камере при температуре 2 – 4 градусов. При необходимости более длительного хранения, сыворотка замораживается. Во избежание нарушения качества сыворотки допускается однократное её замораживание и, соответственно, размораживание. При длительном хранении антитела теряют свои свойства и становятся частично неактивными, наиболее чувствительными к замораживанию являются иммуноглобулины класса М. После размораживания сыворотки необходимо тщательное перемешивание её до однородной массы, что способствует восстановлению концентрации антител, содержащихся в данной сыворотке.

Дата добавления: 2015-08-02