|
Читайте также: |
Ультрамікротомія
При вивченні об'єктів в електронному мікроскопі виникає ще одне ускладнення - це їх товщина. Справа в тому, що при проходженні пучка електронів через об'єкт частина електронів поглинається, що приводить до нагрівання об'єкта і до його деформації. Тому необхідно мати тонкі об'єкти (не вище 0,1 мкм). Інше обмеження полягає в тому, що навіть якщо ми будемо розглядати незмінних об'єкти великої товщини (близько 0,5-1 мкм), що в принципі можливо (наприклад, в мегавольтной електронному мікроскопі, див. нижче), то на кінцевому зображенні будуть нашаровуватися проекції структур, розташованих на різних рівнях по товщині об'єкта. Тим самим вивчати в трансмісійних мікроскопах внутрішню будову цілих клітин погано і незручно. Вихід із цього становища аналогічний тому, що було знайдено для світлової мікроскопії, - робити зрізи дуже малої товщини, ультратонкі зрізи (0,05-0,10 мкм).
Процедура їх виготовлення в принципі подібна стій, що використовується в світловій мікроскопії. Клітини і тканини для цього спочатку фіксують. В якості фіксаторів використовуються буферні розчини глутарового альдегіду або чотириокису осмію. Найбільш часто застосовується подвійна фіксація: спочатку глутаровий альдегід, а потім осмій, який як важкий метал контрастує клітинні структури. Потім, після зневоднення, тканини просочуються епоксидними смолами або іншими пластиками в рідкою, мономерний формі. При полімеризації таких пластмас просочений ними об'єкт виявляється ув'язненим в тверді блоки, які вже можна різати на тонкі зрізи. Тут виникають дві проблеми: де взяти ідеальні ножі, вади яких не позначалися б при вивченні клітин на майже молекулярних рівнях, і як виготовити зрізи товщиною в соті частки мікрона. Перша задача була вирішена таким чином: виявилося, що ідеально гострою і без зазубрин ріжучої поверхнею володіють відколи скла. Але скляні ножі дуже недовговічні, їх використовують тільки один раз. Застосовують алмазні ножі: це спеціальним чином заточені дрібні алмази, вони служать протягом декількох років.
 |
Дата добавления: 2015-07-11; просмотров: 165 | Нарушение авторских прав