Теоретичні відомості. Фарбування за Грамом (або метод Грама) — емпірічно виведений метод розрізнення

Фарбування за Грамом (або метод Грама) — емпірічно виведений метод розрізнення бактерій за допомогою фарбування їх певним методом на дві великі групи: Грам-позитивні і Грам-негативні), що розрізняються хімічними та фізичними властивостями їх клітинної стінки.

Фарбування за Грамом відноситься до складного способу фарбування, коли на мазок впливають двома фарбниками, з яких один є основним, а інший — додатковим. Окрім фарбувальних речовин при складних способах забарвлення застосовують обезбарвлюючі речовини: спирт, кислоти та ін. Для фарбування по Граму частіше використовують фарбники тріфенілметанової групи: генциановий, метиловий фіолетовий або крісталлвіолет. Грам-позитивні (Грам (+)) мікроорганізми дають міцне з'єднання з вказаними фарбниками і йодом. При цьому вони не обезбарвлюються при дії на них спиртом, унаслідок чого при додатковому забарвленні фуксином Грам (+) мікроорганізми не змінюють спочатку прийнятий фіолетовий колір.

Грам-негативні (Грам (-)) мікроорганізми утворюють з основними фарбниками і йодом з'єднання, що легко руйнується під дією спирту. В результаті мікроби обезбарвлюються, і потім забарвлюються фуксином, набуваючи червоного кольору

Електронна мікроскопія

Розглядаючи характеристики світлового мікроскопа, можна переконатися, що єдиним шляхом збільшення дозволу оптичної системи буде використання джерела освітлення, що випускає хвилі з найменшою довжиною. Таким джерелом може бути розпечена нитка, яка в електричному полі викидає потік електронів, останній можна фокусувати, пропускаючи через магнітне поле. Це послужило основою для створення електронного мікроскопа, в якому вже зараз досягнуто дозвіл в 1 А (0,1 нм). За принципом конструкції електронний мікроскоп дуже схожий з оптичним: в ньому є джерело освітлення (катод електронної гармати), конденсорних система (конденсорних магнітна лінза), об'єктив (об'єктивна магнітна лінза), окуляр (проекційні магнітні лінзи), тільки замість сітківки ока електрони потрапляють на люминесцирующий екран або на фотопластинку

Основна частина такого мікроскопа являє собою порожнистий циліндр (колонка мікроскопа), з якого відкачано повітря для того, щоб не було взаємодії електронів з молекулами газів і окислення вольфрамової нитки розжарювання в катоді електронної гармати. Між катодом і анодом подається висока напруга (від 50 до 200-5000 кВ), що служить причиною прискорення електронів. У центрі анода є отвір, проходячи через яке електрони формують пучок, що йде вниз по колонці мікроскопа. Лінзи електронного мікроскопа є електромагніти, поле яких може змінювати шлях електронів (як скляні лінзи змінюють шлях фотонів). В конденсорних лінзі пучок електронів фіксується і потрапляє на об'єкт, з яким електрони взаємодіють, відхиляються, розсіюються, поглинаються або проходять без зміни. Електрони, що пройшли через об'єкт, фокусуються об'єктивної лінзою, яка формує збільшене первинне зображення об'єкта. Так само як в світловому мікроскопі, об'єктивна лінза визначає його основні показники. Первинне зображення збільшується проекційної лінзою і проектується на екран, покритий люмінесцентним шаром, що світиться при попаданні на нього електронів. Замість світиться екрану зображення можна помістити на фотопластинку і отримати знімок.

Напруга, яка використовується для прискорення електронів в більшості просвічують (трансмісійних) електронних мікроскопів, досягає 50-150 кВ. При напрузі в 50 кВ електрон має довжиною хвилі в 0,05 А, і в цьому випадку).lтеоретично можна було б отримати дозвіл в 0,025 А (d ~ 0,5 Однак в сучасних конструкціях електронних мікроскопів досягається дозвіл близько 1 А через недостатню стабільності напруги, стабільності струму лінз, неоднорідності металу магнітних лінз і інших недосконалостей приладу (теоретично можливо ще підвищити дозвіл електронного мікроскопа в 100 разів). Але й досягнуте дозвіл величезно (згадаємо, що величина О-Н зв'язку в молекулі води дорівнює 0,99 А): воно зараз вже в 106 разів вище роздільної здатності очі!

На екранах і фотопластинках електронних мікроскопів можна отримати збільшення до 50 000 разів, надалі при фотодруку можна отримати ще 10-кратне збільшення, так що кінцеве збільшення, при якому максимально реалізується дозвіл, може досягати 106 раз (наприклад, якщо 1 мм збільшити в 106 раз, то він досягне довжини в 1 км).

В даний час електронно-мікроскопічне зображення з флуоресціюючого екрана за допомогою цифрової телекамери передається прямо в комп'ютер, де на екрані монітора його можна обробляти різним чином (змінювати збільшення, контрастність зображення, застосовувати денситометрію, плани-і морфометрію окремих компонентів). Використовуючи принтер можна отримати відбитки отриманих зображень

Дата добавления: 2015-07-11