Постановка РНГА с сывороткой крови пациента

Ход исследования:

РНГА с парными сыворотками пациента и эритроцитарным диагностикумом из R.sibirica:

I – первая неделя заболевания,

II – вторая неделя заболевания.

Пояснения: нарастание титра АТ; «+» – эритроциты оседают в виде зонтика,

«-» – скопление эритроцитов в виде пуговки.

КЭ – контроль несенсибилизированных эритроцитов на отсутствие спонтанной агглютинации.

КА – контроль сенсибилизированных эритроцитов.

КС – контроль сыворотки обследуемого.

	11/20	11/40	11/80	11/160	11/320	КЭ	КС	КД
I
II

Вывод: Титр АТ_I – 1/20, Титр АТ_II – 1/80, Титр АТ_II> Титр АТ_I => произошло увеличение титра АТ к АГ R.sibirica в крови (сыворотке) обследуемого - это является показателем___________________________________________________________________

2. Исследование биоптата лимфоузлов пациента

Рис.2. Пораженная R. ____________ клетка человека Просвечивающая электронная микроскопия, Х______

Заключение:_________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Задача №3. Микробиологическая диагностика урогенитального хламидиоза

В женскую консультацию обратилась пациентка с жалобами на боли внизу живота, жжение и рези в мочеиспускательном канале при мочеиспускании, зуд в области промежности, наличие выделений из влагалища от белесых до прозрачных. При обследовании гинеколог выявил невыраженную кровоточивость шайки матки, эрозию. Для исследования взяли материал из шейки матки.

1. Окрасить препарат по Романовскому – Гимзе:

Цитологический метод окраски для световой микроскопии. Эффект окрашивания по Романовскому-Гимзе (смесью азура, эозина и метиленового синего)заключается в том, что синий катионный краситель азур B и красно-оранжевый анионный краситель эозин Y при взаимодействии с биологическими субстратами окрашивают цитоплазму в голубой цвет, а ядра в красно-фиолетовый.

Специальный стандартный раствор красителя:

Азур 1 — 3,772 г

Эозин — 2,165 г

Метиленовая синька (медиц.) — 1,563 г

Метанол (ЧДА) — 750,0 мл

Глицерин (ЧДА) — 256,0 мл

Методика окраски: Мазки, фиксированные в метиловом спирте, окрашивают раствором (1 мл готовой жидкой краски + 2 мл основного буферного раствора + 47 мл дистиллированной воды) в течение 40—120 мин.

Рис.3. Мазок клеток эпителия шейки матки. Окраска по Романовскому-Гимзе. Увеличение Х 1000

Вывод:_______________________________________________________________________________________________________________________________________________

2. Учет и оценка непрямой РИФ с материалом от пациентки с подозрением на урогенитальный хламидиоз

Рис.4. Мазок клеток эпителия шейки матки. РИФ. Люминисцентная микроскопия. Увеличение Х 1000

Вывод: В мазке выявлены ярко-зеленые светящиеся мелкие, круглые (элементарные тельца хламидий) и овальные (ретикулярные тельца хламидий) частицы. Тельца располагаются отдельно, на поверхности эпителиальных клеток и внутриклеточно. Эпителиальные клетки окрашены в красно-оранжевый цвет.

3. Культуральный метод: посев материала от пациентки на культуру клеток линии HeLa. Ультратонкий срез клеток линии HeLa зараженных C. trachomatis. Укажите элементарные (Э), ретикулярные (Р) и промежуточные (П) тельца.

Рис.5. Культура клеток линии HeLa зараженных C. trachomatis. Окраска по Романовскому-Гимзе. Увеличение Х 1000

Вывод:_______________________________________________________________________________________________________________________________________________

4. Учет и оценка ИФА с сывороткой пациентки на урогенитальный хламидиоз с хламидийным антигеном C. trachomatis

В лунке наблюдается окрашивание в желто-коричневый цвет, ИФА +, при достоверных контролях

	опыт	Кматериала	Кантигена
I

Вывод:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Заключение:_________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Задача №4 Исследование соскоба из цервикального канала от обследуемой с бесплодием с помощью тест-системы MуcoplasmaDUO

Набор Mуcoplasma DUO позволяет культивировать, идентифицировать и дифференциально титровать урогенитальные микоплазмы, а также определять чувствительность культуры к антибиотикам. Метод позволяет получить результаты в течение 24-48 ч.

Материалом для исследования являются соскобы из уретры, цервикального канала, влагалища (и др.). Так как микоплазмы прилипают к поверхности эпителиальных клеток, материал следует собирать со слизистой с помощью специальной цервикальной щеточки после чего погрузить щеточку в 2 мл транспортной среды и взбалтать, чтобы смыть все клетки в среду.

Идентификация и титрование урогенитальных микоплазм основаны на специфических метаболических свойствах каждого микроорганизма, которые гидролизуют:

- Ureaplasmaurealiticum (UU) – мочевину;

- Mycoplasma hominis (MH) – аргинин.

При этом образуется ион аммония и происходит защелачивание среды. Вследствие этого изменяется цвет (с желтого на красный) индикатора кислотности среды, что позволяет визуализировать реакцию. Таким образом, при желтой окраске содержимого лунок – микоплазмы отсутствуют, при красной окраске – микоплазмы присутствуют в пробе. Если покраснела лунка U – в пробе присутствует UU; если покраснела лунка Н – в пробе присутствует МН; если покраснели лунки U и Н – в пробе присутствуют и UU, и МН.

Т и т р о в а н и е (определение количества) основано на принципе разведения исследуемого материала в жидкой среде. Проба последовательно разводится в транспортной среде, в лунке D (разведение 10^-1) и, наконец, в лунках U> 10⁴ и Н > 10⁴ (разведение 10^-2). Таким образом, может быть определен титр микоплазм. Этот титр соответствует лунке, цвет которой изменился на красный через 24-48 ч инкубации.

Данный набор позволяет определить титры порядка 10^-3 – 10^-4 мл, которые уже считаются этиологически значимыми.

Учет результатов: первые результаты считываются через 24 ч инкубации. При наличии положительной реакции в лунке с высоким титром (10⁴), получают окончательный результат. Второй раз считывают результаты через 48 ч в следующих случаях:

- если нужно подтвердить отрицательный результат,

- определить присутствие микоплазм в низких титрах,

определить штаммы, присутствующие в высоком титре, но характеризующиеся медленным метаболизмом

Вывод: __________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Дата добавления: 2015-08-02