Подобные изменения описаны для гена TWIST, расположенного в районе хромосомы 7р21 и ответственного за развитие краниосиностоза Сатре-Котцен. Так же, как и ген РАХ6, TWIST относится к транскрипционным факторам. В одном случае у больного была описана транслокация, точка разрыва при которой находилась в 5 т.п.н. от 3' конца гена. В четырех других случаях точка разрыва выявлена в 50-250 т.п.н. от 3' конца гена (Milot et al., 1996).
Изменения, выявленные в семье 3, затрагивают область, удаленную на 60 т.п.н. от 3' конца гена ЕХГ1, что позволяет предполагать наличие регуляторных элементов, расположенных на значительном расстоянии от 3' конца гена ЕХТ1 и участвующих в регуляции транскрипции этого гена.
В семье 3 была проведена косвенная пренатальная диагностика у пробанда 4. Для этого были использованы высокополиморфные ДНК-маркеры D8S522, D8S592 и D8S67. При анализе ДНК-маркеров в семье 3 установлен гаплотип поврежденной хромосомы, который был определен и у плода (Рис. 9). Данная пренатальная диагностика МЭХД является первым опытом как в нашей стране, так и за рубежом.
Семья 4.
В семье 4 больны отец и ребенок. В результате определения гаплотипа установлено, что необходимо исследовать ген ЕХТ2. В результате проведенного SSCP -анализа была обнаружена аномалия подвижности однонитевой ДНК в экзоне 5 гена ЕХТ2. Прямое секвенирование экзона выявило нонсенс-мутацию, выраженную заменой цитозина на тимин в позиции 827 нуклеотидной последовательности, что приводит к образованию стоп-кодона TGA в 273 положении белковой последовательности (Рис. 13). Выявленная мутация проверяется при гидролизе амплификата ферментом рестрикции МаеI: в норме для данного фермента имеется один сайт узнавания, тогда как в мутантном аллеле - два сайта.
НОРМА
|
МУТАЦИЯ ^ ССТ АН А А-б с С С Т С Т Л С О <Г С А- А А С А. Т С 6 А
|
НОРМА МУТАЦИЯ |
С А С =>. О ТЮ => стоп
Рис. 13. Результат ввСР-анализа экзона 5 гена ЕХТ2: 1,3,4 - норма; 2 пробанд 5 и результат секвенирования экзона 5 гена ЕХТ2 у пробанда 5.
Семья 5.
В семье 5 больны мать и ребенок. При проведении SSCP-анализа первого экзона гена ЕХТ1 выявлен аномальный сигнал, который был обнаружен также у матери. В результате секвенирования выявлена нонсенс-мутация в результате замены цитозина на тшущнз 79 позиции нуклеотидной последовательности, что приводит к образованию стоп-кодона TAG положении 27 белковой последовательности (Рис. 14).
12 3 4
|
Т Т £ & Ш AG 6 С Т Т S -И A В * Т t А В В <5 С: А Т
|
НОРМА С AG => Q МУТАЦИЯ TAG СТОП
Рис. 14. Результат 88СР-анализа первого экзона гена ЕХТ1:1, 2,4 - норма; 3 - пробанд 6 и результат прямого секвенирования первого экзона гена ЕХТ1 у пробанда 6.
Семья 6.
В семье 6 больны оба ребенка, отец и двоюродная сестра по отцовской линии. В результате проведенного SSCP-анализа была обнаружена аномалия подвижности однонитевой ДНК в 1 экзоне гена ЕХТ1. Аналогичные изменения наблюдались у всех больных членов семьи. Прямое секвенирование экзона показало динуклеотидную делецию AG в 388 позиции нуклеотидной последовательности, что приводит к сдвигу рамки считывания и преждевременной терминации трансляции в результате образования стоп-кодона TGAb 188 позиции белковой последовательности (Рис. 15).
|
|
6 A. G А Дата добавления: 2015-08-27; просмотров: 35 | Нарушение авторских прав
|
