│- Сабуро агар с глюкозой│Дрожжи, │Candida albicahs NCTC 885-653 или │5 сут. │
│и антибиотиками │плесени │Candida albicans ATCC 10231; │(22,5 +/- 2,5) град. C │
│- Среда N 2 для │ │Aspergillus niger ATCC 9642 │ │
│выращивания грибов │ │ │ │
│ │ │Штаммы-ассоцианты: │ │
│ │ │Staphylococcus aureus ATCC 6538-P │ │
│ │ │Bacillus cereus ATCC 10702 │ │
├────────────────────────┼──────────────┼──────────────────────────────────┼───────────────────────┤
│- Бульон Мосселя │Обогащение │Escherichia coli ATCC 25922; │24-48 ч │
│- Мак-Конки бульон │энтеробактерий│Salmonella abony IHE 103/39 │(32,5 +/- 2,5) град. C │
│- Среда N 3 для │ │ │ │
│обогащения │ │Штаммы-ассоцианты: │ │
│энтеробактерий │ │Staphylococcus aureus ATCC 6538-P │ │
│ │ │Bacillus cereus ATCC 10702 │ │
├────────────────────────┼──────────────┼──────────────────────────────────┼───────────────────────┤
│- Мак-Конки агар │Энтеробактерии│Escherichia coli ATCC 25922; │24-48 ч │
│- Мосселя агар │ │Salmonella abony IHE 103/39 │(32,5 +/- 2,5) град. C │
│- Среда N 4 для │ │ │ │
│выделения энтеробактерий│ │Штаммы-ассоцианты: │ │
│ │ │Staphylococcus aureus ATCC 6538-P │ │
│ │ │Bacillus cereus ATCC 10702 │ │
├────────────────────────┼──────────────┼──────────────────────────────────┼───────────────────────┤
│- Дезоксихолат-цитратный│Сальмонеллы │Salmonella abony IHE 103/39 │24-48 ч │
│агар │ │ │(32,5 +/- 2,5) град. C │
│- Ксилоза-лизин- │ │Штаммы-ассоцианты: │ │
│дезоксихолат агар │ │Escherichia coli ATCC 25922 │ │
│- Агар с бриллиантовым │ │Staphylococcus aureus ATCC 6538-P │ │
│зеленым │ │Bacillus cereus ATCC 10702 │ │
│- Висмут-сульфитный агар│ │ │ │
│- Среда N 5 для │ │ │ │
│идентификации сальмонелл│ │ │ │
├────────────────────────┼──────────────┼──────────────────────────────────┼───────────────────────┤
│- Бульон с глюкозой │Энтеробактерии│Escherichia coli ATCC 25922; │24 ч │
│- Среда N 6 для │ │Salmonella abony IHE 103/39; │(32,5 +/- 2,5) град. C │
│идентификации │ │Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 │ │
│энтеробактерий │ │(P.aeruginosa ГИСК 453) │ │
├────────────────────────┼──────────────┼──────────────────────────────────┼───────────────────────┤
│- Нитратный бульон │Энтеробактерии│Escherichia coli ATCC 25922; │24 ч │
│- Среда N 7 для │ │Salmonella abony IHE 103/39; │(32,5 +/- 2,5) град. C │
│идентификации │ │Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 │ │
│энтеробактерий │ │(P.aeruginosa ГИСК 453) │ │
├────────────────────────┼──────────────┼──────────────────────────────────┼───────────────────────┤
│- Соево-казеиновый │Аэробные │Bacillus cereus ATCC 10702 или │24 ч │
│бульон │бактерии │Bacillus subtilis ATCC 6633; │(32,5 +/- 2,5) град. C │
│- Среда N 8 для │ │Escherichia coli ATCC 25922; │ │
│выращивания бактерий │ │Staphylococcus aureus ATCC 6538-P;│ │
│ │ │Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 │ │
│ │ │(P.aeruginosa ГИСК 453) │ │
├────────────────────────┼──────────────┼──────────────────────────────────┼───────────────────────┤
│- Лактозный бульон │Энтеробактерии│Escherichia coli ATCC 25922; │24 ч │
│- Среда N 11 для │ │Salmonella abony IHE 103/39 │(32,5 +/- 2,5) град. C │
│предварительной │ │ │ │
│инкубации энтеробактерий│ │ │ │
├────────────────────────┼──────────────┼──────────────────────────────────┼───────────────────────┤
│- Агар для выявления │Синегнойная │Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 │24-48 ч │
│пиоцианина P.aeruginosa │палочка │(P.aeruginosa ГИСК 453); │(32,5 +/- 2,5) град. C │
│- Среда N 9 для │ │Escherichia coli ATCC 25922 │ │
│идентификации │ │ │ │
│P.aeruginosa │ │ │ │
├────────────────────────┼──────────────┼──────────────────────────────────┼───────────────────────┤
│- Цетримидный агар │Синегнойная │Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 │24-48 ч │
│- ЦПХ-агар │палочка │(P.aeruginosa ГИСК 453) │(32,5 +/- 2,5) град. C │
│для выделения │ │ │ │
│P.aeruginosa │ │Штаммы-ассоцианты: │ │
│ │ │Escherichia coli ATCC 25922; │ │
│ │ │Staphylococcus aureus ATCC 6538-P │ │
├────────────────────────┼──────────────┼──────────────────────────────────┼───────────────────────┤
│- Фогель-Джонсона агар │Золотистый │Staphylococcus aureus АТСС 6538-Р;│48 ч │
│- Среда N 10 для │стафилококк │Staphylococcus epidermidis АТСС │(32,5 +/- 2,5) град. C │
│выделения S.aureus │ │14990 │ │
│- Берда-Паркера агар │ │ │ │
│ │ │Штаммы-ассоцианты: │ │
│ │ │Pseudomonas aeruginosa АТСС 9027 │ │
│ │ │(P.aeruginosa ГИСК 453); │ │
│ │ │Escherichia coli АТСС 25922 │ │
├────────────────────────┼──────────────┼──────────────────────────────────┼───────────────────────┤
│- Селенитовый бульон │Сальмонеллы │Escherichia coli АТСС 25922; │18-24 ч │
│- Тетратионатный бульон │ │Salmonella abony IHE 103/39 │(32,5 +/- 2,5) град. C │
│- Среда N 12 для │ │ │ │
│выделения сальмонелл │ │ │ │
├────────────────────────┼──────────────┼──────────────────────────────────┼───────────────────────┤
│- Трехсахарный агар с │Сальмонеллы │Escherichia coli ATCC 25922; │24 ч │
│солями железа │ │Salmonella abony IHE 103/39 │(32,5 +/- 2,5) град. C │
│- Среда N 13 для │ │ │ │
│идентификации сальмонелл│ │ │ │
├────────────────────────┼──────────────┼──────────────────────────────────┼───────────────────────┤
│- Цитратный агар │Кишечная │Escherichia coli ATCC 25922; │24 ч │
│Симмонса │палочка │Salmonella abony IHE 103/39 │(32,5 +/- 2,5) град. C │
│- Среда N 14 для │ │ │ │
│идентификации E.coli │ │ │ │
└────────────────────────┴──────────────┴──────────────────────────────────┴───────────────────────┘
ATCC - Американская коллекция типовых культур (American Type Culture Collection), Соединенные Штаты Америки.
ГИСК - Всероссийский музей патогенных бактерий ГИСК им. Л.А.Тарасевича, Россия.
IHE - Институт гигиены и эпидемиологии, Прага, Чехия.
CCM - Чешская коллекция микроорганизмов.
Требование к ростовым свойствам питательных сред
Испытуемая агаризованная среда считается годной к употреблению, если коэффициент прорастания не менее 0,7 по сравнению со стандартной питательной средой. Испытуемая жидкая (полужидкая) среда считается годной к употреблению, если после инкубации рабочей взвеси и пересеве подходящего разведения на агаризованную среду коэффициент прорастания не менее 0,7 по сравнению со стандартной жидкой питательной средой.
Требование к селективным свойствам питательных сред
Испытуемая селективная питательная среда при посеве тест-микроорганизма и штамма-ассоцианта должна обеспечивать доминирующий рост тест-микроорганизма при частичном или полном угнетении роста штамма-ассоцианта.
Стерильность
Не менее 10% емкостей (флаконов, пробирок) от каждой партии приготовленной питательной среды контролируют на стерильность, выдерживая их при соответствующей температуре в течение 48-72 ч. При обнаружении микробного роста хотя бы в одной из емкостей, испытанию на стерильность подлежит вся приготовленная партия среды.
Хранение питательных сред
Сухие питательные среды необходимо хранить в сухом, защищенном от света месте при температуре 2-30 град. C герметично закрытыми. После вскрытия упаковки на флаконе необходимо написать дату и далее хранить при комнатной температуре до окончания срока годности.
Приготовленные из сухих смесей и разлитые во флаконы питательные среды хранятся 1 месяц при комнатной температуре или 3 месяца при (5 +/- 1) град. C.
Срок годности сред, разлитых в чашки, составляет 7 дней при температуре (5 +/- 1) град. C.
Исключение составляют чашки со средой N 4, срок годности которых не более 3 сут. без доступа света.
33. ОПРЕДЕЛЕНИЕ АНТИМИКРОБНОЙ АКТИВНОСТИ АНТИБИОТИКОВ
МЕТОДОМ ДИФФУЗИИ В АГАР (ОФС 42-0068-07)
Определение антимикробной активности антибиотиков основано на их способности угнетать рост микроорганизмов. Определение проводят методом диффузии в агар на плотной питательной среде путем сравнения размеров зон угнетения роста тест-микробов, образующихся при испытании растворов определенных концентраций Государственного стандартного образца <*> и испытуемого препарата.
--------------------------------
<*> Далее "стандартный образец" следует читать "Государственный стандартный образец".
Антимикробная активность антибиотиков выражается в единицах действия - ЕД или "мкг". Для большинства антибиотиков 1 ЕД или "мкг" соответствуют 1 мкг активного вещества (кислоты или основания); для антибиотиков, имеющих иное количественное выражение единицы, соответствующие указания даются в частных фармакопейных статьях.
При определении антимикробной активности антибиотиков используют стандартные образцы, активность которых, как правило, устанавливают в соответствии с Международными биологическими стандартами. При отсутствии последних для указанных целей могут быть использованы международные химические стандарты, антимикробную активность которых рассчитывают на основании показателей качества, установленных физико-химическими методами. Антимикробную активность стандартных образцов антибиотиков, не имеющих аналогов в международной коллекции стандартов, рассчитывают также на основании показателей качества, установленных физико-химическими методами.
Стандартные образцы антибиотиков хранятся и используются в соответствии с рекомендациями, указанными на этикетке стандартного образца.
Метод определения. Тест-микробы, растворители, буферные растворы, питательные среды и прочие условия проведения испытания указаны в табл. 33.1.
В чашки Петри (стеклянные или пластмассовые), установленные на столиках со строго горизонтальной поверхностью, разливают расплавленные питательные среды определенного состава в один или два слоя. Для нижнего слоя используют незасеянные среды, для верхнего или одного слоя - агаровую среду, предварительно засеянную соответствующим тест-микробом. Если культура представляет собой суспензию вегетативных клеток, то температура расплавленной среды, в которую вносят тест-микроб, должна быть (49 +/-1) град. C, при использовании суспензии спор - 65-70 град. C. К среде следует добавить такое количество суспензии вегетативных клеток или спор, которое обеспечивает оптимальный рост тест-микроба и четкость зон угнетения его роста.
Таблица 33.1
Характеристика культуральных свойств тест-микроба
┌──────────────────┬─────────────────────────────────────┬──────────────────────────────┬───────────────────┐
│ Название │ При росте на плотной питательной │ При росте на жидкой │ При │
│ тест-микроба │ среде │ питательной среде │ микроскопическом │
│ ├──────────────────┬──────────────────┼────────────┬─────────────────┤ изучении мазка │
│ │ условия │ описание │ условия │описание культуры│агаровой культуры, │
│ │ выращивания │ культуры │выращивания │ │окрашенной по Граму│
├──────────────────┼──────────────────┼──────────────────┼────────────┼─────────────────┼───────────────────┤
│Staphylococcus │Среда N 1, │Гладкие с ровными │Мясо- │Равномерное │Однородные по │
│aureus 209 Р │T град. (36 +/- 1)│краями колонии, с │пептонный │помутнение │величине и │
│ │град. C, │равномерной │бульон, │бульона без │расположению в виде│
│ │18-20 ч, затем при│золотистой │рН 7,2-7,4, │пленки и │гроздьев кокки с │
│ │комнатной │пигментацией │18-20 ч │слизистого осадка│хорошо выраженной │
│ │температуре 24 ч │ │ │на дне │грамположительной │
│ │ │ │ │ │окраской │
├──────────────────┼──────────────────┼──────────────────┼────────────┼─────────────────┼───────────────────┤
│Candida utilis │Среда N 3, │Круглые, кремового│МПБ, │Рост в виде │Овальные, иногда с │
│ЛИА-01 │T град. (30 +/- 1)│цвета с матовой │pH 7,2-7,4 │равномерной мути │отростками клетки; │
│ │град. C, │поверхностью │с 1% │и осадка на дне │расположены │
│ │48 ч │колонии с ровными │глюкозой, │ │отдельно, цепочками│
│ │ │краями │18-20 ч │ │или группами │
├──────────────────┼──────────────────┼──────────────────┼────────────┼─────────────────┼───────────────────┤
│Bacillus subtilis,│Среда N 1, │Колонии │МПБ, │Рост в виде │Палочки с │
│var. Л │T град. (36 +/- 1)│желтоватого цвета,│pH 7,2-7,4, │пленки с осадком │закругленными │
│ 2 │град. C, │круглой формы, │18-20 ч │на дне │краями, │
│ │18-20 ч │влажно блестящие с│ │ │располагающиеся │
│ │ │шагреневой │ │ │отдельно и │
│ │ │поверхностью, │ │ │цепочками с хорошо │
│ │ │слегка │ │ │выраженной │
│ │ │зазубренными │ │ │грамположительной │
│ │ │краями и │ │ │окраской │
│ │ │приподнятым │ │ │ │
│ │ │центром │ │ │ │
├──────────────────┼──────────────────┼──────────────────┼────────────┼─────────────────┼───────────────────┤
│Bacillus subtilis │Среда N 1, │Мелкие сероватые │МПБ, │Рост в виде │Тонкие палочки, │
│ATCC 6633 │T град. (36 +/- 1)│колонии с зубчатым│рН 6,8-7,0, │пленки с осадком │располагающиеся │
│ │град. C, │краем │18-20 ч │на дне │отдельно или │
│ │18-20 ч │ │ │ │цепочками, с хорошо│
│ │ │ │ │ │выраженной │
│ │ │ │ │ │грамположительной │
│ │ │ │ │ │окраской │
├──────────────────┼──────────────────┼──────────────────┼────────────┼─────────────────┼───────────────────┤
Дата добавления: 2015-09-29; просмотров: 30 | Нарушение авторских прав
| <== предыдущая лекция | | | следующая лекция ==> |