Связывания комплемента, их приготовление и применение

При ряде инфекционных заболеваний образуются так называемые комплементсвязывающие (лизирующие) антитела, которые выявляют в реакции связывания комплемента (РСК).

Реакция связывания комплемента заключается в том, что при соответствии друг другу антигенов и антител они образуют иммунный комплекс, к которому присоединяется комплемент (С), т.е. происходит связывание комплемента комплексом антиген - антитело. Если же комплекс антиген - антитело не образуется, то комплемент остается свободным.

PCK проводят в две фазы:

- 1-я фаза - инкубация смеси, содержащей комплекс «Антиген + антитело + комплемент»;

- 2-я фаза (индикаторная) - выявление в смеси свободного комплемента путем добавления к ней гемолитической системы, состоящей из эритроцитов барана и гемолитической сыворотки, содержащей антитела к ним (антиэритроцитарные антитела).

Рис. 8. Реакция связывания комплемента с сывороткой крови

больного животного (положительная реакция)

В 1-й фазе реакции при образовании комплекса антиген - антитело происходит связывание им комплемента, и тогда во 2-й фазе гемолиз сенсибилизированных антителами эритроцитов не произойдет (реакция положительная).

Если антиген и антитело не соответствуют друг другу (в исследуемом образце нет антигена или антитела), комплемент остается свободным и во 2-й фазе присоединится к комплексу эритроцит – гемолизин, вызывая гемолиз (реакция отрицательная).

Рис. 9. Реакция связывания комплемента с сывороткой крови

здорового животного (отрицательная реакция)

Чаще всего реакцию связывания комплемента применяют для диагностики бруцеллеза, сапа, кампилобактериоза, туляремии, лептоспироза, вирусных болезней (ящура, гриппа, ньюкаслской болезни и др.).

Для получения комплементсвязывающей сыворотки для диагностики туляремии используют кроликов, которых подкожно иммунизируют живой культурой F.tularensis вакцинного штамма 15 Н2ИЭГ. Антиген вводят 3-4 раза с интервалом 7-10 дней, затем тотально отбирают кровь и получают сыворотку.

Сыворотку проверяют в РСК на активность и специфичность.

Рис. 10.Четко положительный результат РСК (прозрачная надосадочная жидкость, четкий зонтик из эритроцитов)

Рис. 11.Четко отрицательный результат РСК (полный гемолиз эритроцитов (лаковая кровь), зонтик отсутствует)

Гемолитическую сыворотку (гемолизин) получают путем гипериммунизации кроликов эритроцитами баранов (валухов). Достижение титров антител гемолитической сыворотки 1:6000 и выше даёт основания к прекращению гипериммунизации кроликов. Через 7-10 суток после последней инъекции эритроцитов барана кроликов обескровливают, получают сыворотку и консервируют её фенолом.

При постановке РСК непременным условием является применение в качестве одного из её компонентов комплемента.

Комплемент - это неспецифический фактор гуморального иммунитета, содержащийся в сыворотках крови теплокровных и холоднокровных животных.

Комплемент представляет собой сложный комплекс белков (пептидогидролазы), транспортируемый (-глобулинами. 90% комплемента синтезируется клетками печени, 10% - моноцитами.

Наиболее изучен комплемент морской свинки. Поэтому при постановке РСК в качестве комплемента используют кровь морских свинок.

Дата добавления: 2015-08-27