Для отличия одних видов бактерий от других (грамположительных от грамотрицательных), что является важным таксономическим признаком

	Метод Грама	Метод Бурри-Гинса
Цель применения	Для отличия одних видов бактерий от других (грамположительных от грамотрицательных), что является важным таксономическим признаком	Для выявления капсул у чистых культур капсульных бактерий
Реактивы: Красящие растворы	1. Карболовый генцианвиолет или пропитанная им фильтровальная бумажка 2. Водный раствор фуксина или пропитанная им фильтровальная бумажка	1. Тушь 2. Разведённый (1:3) карболовый фуксин Циля
Протрава	Раствор Люголя – на 300 мл дист воды 1,0 г йода и 2,0 г KI
Дифференцирующее вещество	Этиловый спирт
Способ фиксации, состав фиксатора	В пламени горелки	В пламени горелки
Этапы окраски	1. На фиксированный мазок поместить фильтр.бумажку, пропитанную генцианвиолетом, смочить её водой, выдержать 3 минуты 2. Снять бумажку, слить с препарата оставшуюся краску и налить р-р Люголя на 1 минуту. 3. Слить р-р Люголя, провести дифференциацию, погрузив препарат несколько раз в стаканчик со спиртом (пока не перестанут отходить фиолетовые струйки) 4. Тщательно промыть препарат водой 5. Дополнительно подкрасить препарат с помощью красящей бумажки, пропитанной р-ром карболового фуксина, в течение 3 минут. 6. Промыть водой, высушить.	1. На предметное стекло нанести рядом каплю туши и каплю воды, в которой суспензировать внесённую петлёй капсульную культуру 2. Обе капли соединить в одну и размазать её тонким слоем с помощью второго предметного стекла 3. Высохший на воздухе мазок осторожно фиксировать в пламени горелки 4. Докрасить препарат разведённым карболовым фуксином Циля в течение 2-3 мин, после чего промыть водой и высушить.
Сущность метода	При окраске генцианвиолетом и последующем воздействии раствором Люголя образуется комплексное соединение краски с йодом, которое при дифференциации спиртом удерживается в клетках грамположительных (они остаются фиолетовыми) и удаляются из грамотрицательных (при дополнительной окраске фуксином приобретают красный цвет). Способность бактерий удерживать комплекс генцианвиолета с йодом зависит, главным образом, от строения клеточной стенки, имеющей существенные различия у грамположительных и грамотрицательных бактерий.	Фуксин окрашивает тела бактерий в красный цвет, капсулы остаются неокрашенными.
Результат: описание микроскопической картины	В поле зрения видны стафилококки сине-фиолетового цвета – грамположительные – и расположенные между ними кишечные палочки, имеющие красный цвет, т.е. грамотрицательные.	В поле зрения видны бациллы красного цвета, окруженные белыми ореолами капсул, которые хорошо видны на серовато-коричневом тушевом фоне.
Рисунок

	Метод Циля-Нельсона	Метод Пешкова
Цель применения	Для дифференцирования кислотоустойчивых бактерий от некислотоустойчивых, к которым относятся подавляющее число микроорганизмов.	Для выявления клеточной стенки
Реактивы: Красящие растворы	1. Карболовый фуксон 2. Метиленовый синий	1. водный фуксин
Протрава	Подогревание препарата с краской	10% водный раствор танина
Дифференцирующее вещество	5% H2SO4
Способ фиксации, состав фиксатора	В пламени горелки	Жидкость Карнуа (смесь этилового спирта, хлороформа и ледяной уксусной кислоты в соотношении 6:3:1)
Этапы окраски	1. Окрасить мазок карболовым фуксином при подогревании (три раза до появления паров – примерно 3 минуты) 2. Промыть водой 3. Обесцветить препарат 5% H2SO4 4. Промыть водой 5. Докрасить мазок контрастной краской – метиленовым синим (5 минут) 6. Промыть водой. Высушить.	1. Приготовленный и высушенный препарат из бактериальнйо культуры зафиксировать в жидкости Карнуа в течение 15 минут 2. Промыть водой 3. Держать в 10% водном растворе танина 6-8 мин 4. Промыть и окрасить водным фуксином 30-60 сек 5. Промыть водой, высушить с помощью фильтровальной бумаги.
Сущность метода	Кислотоустойчивость зависит от наличия в клеточной стенке липидов, воска и особенно миколовой кислоты. Кислотоустойчивые бактерии требуют интенсивной окраски (конц. фуксином Циля при нагревании), они прочно удерживают краситель, не обесцвечиваются серной кислотой и остаются рубиново-красными. Некислотоустойчивые при дифференцировке серной кислотой обесцвечиваются и докрашиваются метиленовым синим.
Результат: описание микроскопической картины	В поле зрения видны небольшие палочки рубиново-красного цвета (Mycobacterium tuberculosis) и окрасившиеся в дополнительный синий цвет некислотоустойчивые стафилококки.	В поле зрения видны крупные стрептобактерии светло-розового цвета, они окаймлены клеточной стенкой красного цвета.
Рисунок

	Метод Романовского-Гимзы	Метод Нейссера	Метод Ожешке
Цель применения	Для выявления нуклеоида бактерий.	Для выявления цитоплазматических включений валютина	Для окраски спор бактерий
Реактивы: Красящие растворы	1. краска Романовского-Гимзы (азур, эозин, метиленовый синий)	1. уксуснокислая синька 2. везувин	1. Карболовый фуксон 2. Метиленовый синий
Протрава	Кислотный гидролиз в р-ре соляной к-ты при нагревании	Р-р Люголя	0,5% р-р HCl при нагревании
Дифференцирующее вещество
Способ фиксации, состав фиксатора	Жидкость Карнуа	В пламени горелки	Не фиксируют
Этапы окраски	1. Готовят мазок из чистой культуры бактерий 2. Фиксируют в жидкости Карнуа 3. Проводят кислотный гидролиз в р-ре соляной к-ты при нагревании 4. Мазок окрашивают краской Романовского-Гимзы в течение 40-60 мин 5. После каждого этапа мазок промывают дист. водой	1. Мазок окрашивают уксусной синькой (1мин) 2. Промывают водой 3. Докрашивают везувином 20-30 сек 4. Промывают водой	1. На нефиксированный мазок 0,5% раствор HCl и подогревают 2 мин. 2. Промывают, высушивают и фиксируют 3. Докрашивают по методу Циля – Нильсена
Сущность метода	Краситель окрашивает ацидофильные компоненты клетки в различные оттенки красного, а базофильные - в цвета от пурпурного до фиолетового.		Основан на кислотоустойсивости бактерий.
Результат: описание микроскопической картины	В поле зрения видны бактерии с розовой цитоплазмой, в которой видны один или несколько компактных нуклеоидов красновато-фиолетового цвета, имеющих разную форму (округлую, овальную, палочковидную)	В поле зрения видны бактерии, тела которогых светло-коричневого цвета, зёрна валютина, расположенные на обоих концах бактерий, окрашены в сине-чёрный цвет.	В поле зрения видны рубиново-красные споры, вегетативные клетки голубого цвета
Рисунок

Дата добавления: 2015-08-28