Студопедия
Случайная страница | ТОМ-1 | ТОМ-2 | ТОМ-3
АрхитектураБиологияГеографияДругоеИностранные языки
ИнформатикаИсторияКультураЛитератураМатематика
МедицинаМеханикаОбразованиеОхрана трудаПедагогика
ПолитикаПравоПрограммированиеПсихологияРелигия
СоциологияСпортСтроительствоФизикаФилософия
ФинансыХимияЭкологияЭкономикаЭлектроника

Практическое использование значения экспрессии онкогенов Е6/Е7 папилломавирусов и человеческого гена-регулятора клеточного цикла р16

Брестская область | Витебская область | Гомельская область | Гродненская область | Могилёвская область | Минская область | Распространённость генотипов папилломавирусов высокого и низкого онкогенного риска у пациенток, страдающих патологией вульвы и влагалища | Результаты обследования и обсуждения | Роль вирусной нагрузки в оценке риска вирусассоциированного канцерогенеза | Мониторинг элиминации ВПЧ-инфекции после хирургического лечения цервикальной интраэпителиальной неоплазии 1-3 степени тяжести |


Читайте также:
  1. II. Использование мастера отчетов
  2. II. Использование уличных телефонных кабин
  3. II.1 Использование мастера запросов для создания простых запросов с группированием данных
  4. III. Использование коечного фонда
  5. III. Использование конструктора отчетов
  6. III. ОБОЗНАЧЕНИЯ И СОКРАЩЕНИЯ
  7. V. Рабочее время, время отдыха, отпуска и его использование

Образцы нуклеиновых кислот. В работе использовались пробы кДНК, синтезированные на матрице РНК, выделенной из образцов многослойного плоского эпителия шейки матки женщин с различной патологией.

Праймеры. Использовалась пара праймеров к гену Е6/Е7 вируса папилломы человека. Прямой: TGTCAAAAACCGTTGTGTC, обратный: GAGCTGTCGCTTAATTGCTC. А также использовались две пары праймеров к гену р16 человека. Последовательности праймеров к промоторной области гена р16 приведены в таблице 12.

Таблица 12 - Последовательности праймеров, используемых в исследовании

№ Название Последовательность 5'-3' Размер кДНК Название маркера
1. P16 F CAGACATCCCCGATTGAAAG   р16
2. P16 R TGAAAACTACGAAAGCGGG
3. Cdk4 F AGTTCGTGAGGTGGCTTTAC   Циклин-зависимая киназа 4
4. Cdk4 R GTCCTGGTCTACATGCTCAA
5. Cdk6 F GCCCGCATCTATAGTTTCCA   Циклин-зависимая киназа 6
6. Cdk6 R ATATGCAGCCAACACTCCAG
7. p16 M (F) TTATTAGAGGGTGGGGCGGATCGC   Метилированный сайт в промоторной области р16
8. P16 M (R) GACCCCGAACCGCGACCGTAA
9. p16 U (F) TTATTAGAGGGTGGGGTGGATTGT   Неметилированный сайт в промоторной области р16
10. p16 U (R) CAACCCCAAACCACAACCATAA
11. D1 F CCGTCCATGCGGAAGATC   Циклин D1
12. D1 R GAAGACCTCCTCCTCGCACT

 

ПЦР. Для постановки полимеразной цепной реакции в реальном времени использовался набор MaximaTM SYBR Green/ROX qPCR Master Mix (Fermentas, # K0221). Реакция проводилась в объёме 10 мкл в пробирках объёмом 200 мкл (Plastibrand, # 0030 132.890) по инструкции производителя набора. Постановка ПЦР осуществлялась на приборе GeneAmp 2700 (Applied Biosystems, США). Состав 1 реакции ПЦР включал 5 мкл набора MaximaTM SYBR Green/ROX qPCR Master Mix, 2 мкл кДНК, праймеры в конечной концентрации 0,5 µМ и воду до объёма 10 мкл. Программа ПЦР состояла из: 95°С – 10 минут, 55 циклов по (95°С – 30 секунд, 55°С – 30 секунд, 72°С – 30 секунд). По окончании ПЦР образцы кДНК разгонялись электрофорезом в 1-процентном агарозном геле с добавлением бромистого этидия в конечной концентрации 0,1 мкг/мл.

Проведение бисульфитной реакции и последующая очистка ДНК осуществлялись с помощью набора EpiTect Bisulfite Kit (Qiagen, Германия). ПЦР проводили с помощью набора Quantitect SYBRGreen PCR Kit (Qiagen, Германия). Анализ наличия продукта кДНК производился методом агарозного гель-электрофореза с последующей съёмкой на системе документирования Kodak Molecular Image Station 2000R.

Дата добавления: 2015-07-16; просмотров: 51 | Нарушение авторских прав

<== предыдущая страница | следующая страница ==>
Тестирование праймеров к онкогенам E6/E7 папилломавирусов и человеческому гену-регулятору клеточного цикла р16.| Результаты и обсуждение.
mybiblioteka.su - 2015-2024 год. (0.006 сек.)