Лютинации с применением желатина в пробирке с подогревом

Оснащение: пробирка с исследуемой кровью в количе-стве 5_8 мл без стабилизатора; стандартная сыворотка антирезус анти_D; стандартные эритроциты Rh+ и Rh— для контроля;, стеклянные пробирки емкостью 10 мл: штатив для пробирок; длинная стеклянная пипетка; во-дяная баня 46_48 °С или суховоздушный термостат 46_ 48 °С; 10% раствор желатина во флаконе; карандаш; часы; резиновые перчатки.

Техника определения:

• на двух стеклянных пробирках одинаково подписывают фамилию, инициалы лица, кровь которого исследуется. Пробирки нумеруют и устанавливают на штативе. Про-бирка № 1 устанавливается в первом ряду штатива, про-бирка под № 2 — во второй ряд (контрольный ряд);

• подписывают еще две пробирки, одну — «стандартные Rh+ эритроциты», вторую — «стандартные Rh_ эрит-роциты» и устанавливают их в 1_й ряд штатива;

• в пробирки № 1 и № 2 при помощи длинной стеклян-ной пипетки вводят по одной капле (0,05 мл) исследу-емых эритроцитов;

• длинной стеклянной пипеткой помещают по одной капле (0,05 мл) стандартных Rh+ и Rh_ эритроцитов на дно пробирок соответственно обозначениям «стан_

₄₆ Общехирургические навыки

дартные Rh+ эритроциты» и «стандартные Rh_ эрит-роциты»;

• на дно всех пробирок первого ряда длинной стеклян-ной пипеткой добавляют по 1 капле (0,05 мл) сыво-ротки антирезус;

» на дно всех пробирок (в два ряда) длинной стеклянной пипеткой добавляют по 2 капли (0,1 мл) 10% раство-ра желатина, предварительно подогретого до разжи-жения;

• содержимое пробирок перемешивают встряхиванием и штатив с пробирками помещают в водяную баню при 46_48 °С на 15 минут или в суховоздушный тер-мостат на 25_30 минут;

• по истечении указанного времени штатив с пробирка-ми извлекается из термостата, в них доливают 5_8 мл изотонического раствора NaCl и перемешивают содер-жимое путем одно_двухкратного перевертывания про-бирок.

Оценка результатов. Пробирки просматривают на светневооруженным глазом или через лупу. Оценка резус_ принадлежности определяется реакцией в пробирке № 1.

Кровь считается резус_положительной при появлении агглютинатов и отрицательной — при их отсутствии.

Однако окончательные результаты учитывают как ис-тинные только после проверки контрольных образцов, подтверждающих специфичность и активность сыворот-ки антирезус, т. е. при отсутствии агглютинации со стан-дартными резус_отрицательными эритроцитами и нали-чии агглютинации со стандартными резус_положитель-ными эритроцитами одноименной группы или группы 0 (I). В пробирке второго ряда (контрольный ряд) агглю-тинации быть не должно. Наличие агглютинации в про-бирке контрольного ряда (положительная прямая жела-тиновая проба) говорит о неспецифичности реакции. При

2, Переливание крови

этих условиях положительный результат с сывороткой антирезус (в пробирке № 1) не может быть учтен как ис-тинный. В таких случаях рекомендуется отмыть иссле-дуемые эритроциты теплым изотоническим раствором NaCl для элюирования с них аутоантител и повторить исследование. При сомнительном результате для опреде-ления резус_принадлежности следует применить метод аг-глютинации в солевой среде с использованием сывороток антирезус, содержащих полные антитела.

Определение резус_принадлежности цоликлоном «Анти_D Супер»

Оснащение: пробирка с исследуемой кровью в количе-стве 5_8 мл без стабилизатора; Анти_D Супер цоликлон (жидкий диагностический реагент для определения ре-зус_принадлежности человека); керамические или стек-лянные планшеты; пипетки вместимостью ОД мл; палочки стеклянные для смешивания реагента с образцом крови; физиологический раствор; карандаш; часы; резиновые перчатки.

Техника определения:

• на смачиваемую (обезжиренную) поверхность планше_

' ты или керамической пластинки нанести одну каплю (ОД мл) Анти_D Супер цоликлона;

• рядом положить маленькую (0,01 мл) каплю исследу-емой крови;

• перемешать внесенные ингредиенты стеклянной па-лочкой.

Реакция гемагглютинации развивается уже через 30 се-кунд при мягком покачивании планшетки, практически полностью реакция происходит за 60 секунд.

Оценка результатов. Результат учитывается через3 минуты после смешивания капель, поскольку реакция эритроцитов, несущих слабую форму D_антигена проте-кает медленнее. Положительный результат тестирования

48 Общехирургические навыки

выражается в появлении агглютинации эритроцитов, которую можно наблюдать невооруженным глазом. При этом, капля с исследуемой кровью практически полнос-тью обесцвечивается, а эритроциты образуют крупные, хорошо различимые ярко_красные агрегаты. При отри-цательном результате гемагглютйнация не развивается, капля продолжает оставаться равномерно окрашенной в красный цвет, агрегаты в ней не обнаруживаются.

Проведение проб на совместимость

Пробы на совместимость по группам крови АВО и ре-зус_антигену D проводятся отдельно и не могут заменить друг друга, так как антитела разного характера требуют разных методов для своего выявления. Если больному пе-реливается кровь из нескольких флаконов (контейнеров), пробы на совместимость должны быть сделаны с кровью из каждого флакона (контейнера), даже если на них обо-значено, что кровь получена от одного и того же донора. Сыворотка больного должна быть свежей, полученной в тот же день, когда делается переливание крови, или нака-нуне при условии сохранения ее при температуре 4_8 °С.

Дата добавления: 2015-07-11