Последнее разведение сыворотки, в котором наблюдается агглютинация, считают ее титром.

Постановка развёрнутой реакции агглютинации объём­ным способом.

Для постановки реакции агглютинации требуются компонен­ты:

1) сыворотка крови, подлежащая исследованию, в количестве 0,1-0,2 мл;

2) изотонический раствор хлорида натрия;

3) корпускулярный антиген, взвесь живых или убитых бактерий (диагностикум).

Приготовление разведений сыворотки больного. Из иссле­дуемой сыворотки готовят ряд последовательных двукратных разведений, чаще всего от 1:50-1:100 до 1:1600-1:3200. В отдель­ной пробирке готовят первое, основное, разведение сыворотки, обычно 1:50 или 1:100. Основное разведение сыворотки исполь­зуют для приготовления ряда последовательных разведений.

Две последние пробирки ряда предназначены для контроля антигена и сыворотки (КА - контроль антигена и КС - контроль сыворотки)

Последнее разведение сыворотки, в котором наблюдается агглютинация, считают ее титром.

Условия: строгое участие и подбор всех компонентов

Во все пробирки, за исключением первой и последней (КС), наливают по 1 мл изотонического раствора хлорида на­трия. Затем из пробирки с основным разведением сыворотки (например, 1: 100) берут З мл и наливают по 1мл в 1-ю, 2-ю и в последнюю пробирку (КС). Далее 1 мл содержимого 2-й пробир­ки переносят в 3-ю, из 3-й пробирки такое же количество - в 4-ю, из 4-й - в 5-ю. Из 5-й пробирки (последняя опытная) 1мл со­держимого выливают в банку с дезинфицирующим раствором для сохранения одинакового объема (1мл) во всех пробирках.

Таким образом, разведение сыворотки в первой пробирке соответствует основному ее разведению (1:100); в последующих пробирках получается ряд последовательных двукратных разве­дений: 1:200, 1:400, 1:800, 1:1600.

По окончании разведений во все пробирки ряда, за исключе­нием КС, прибавляют по 1-3 капли антигена, содержащего 2 млрд. живых или убитых микробных тел в 1 мл. После этого жидкость в пробирках становится слегка мутноватой.

После добавления антигена к разведенной сыворотке штатив с пробирками встряхивают для лучшего перемешивания сыво­ротки с изотоническим раствором хлорида натрия, ставят на 2 ч в термостат при 37 °С, а затем учитывают предварительный ре­зультат реакции. Окончательный результат регистрируют через 18-20 ч. Нахождения пробирок при комнатной температуре. Положительный результат реакции агглютинации характе­ризуется образованием на дне пробирки осадка с выраженным просветлением надосадочной жидкости. Остаток на дне пробир­ки, образовавшийся, в результате склеивания микробных тел, называется агглютинатом.

Механизм реакции основан на взаимодействии детерминантных групп антигена с активными центрами иммуноглобулина в электролитной среде. Реакции протекают в две фазы - соединение антигена с антителом, вторая фаза - выделение в осадок образовавшегося ком­плекса АГ+АТ. Характер осадка зависит от природы антигена: жгутиковые бактерии дают крупнохлопьевый осадок, безжгутиковые и бескапсулярные - мелкозернистый, капсульные – тяжистый.

Учет результатов реакции агглютинации начинают с про­смотра контрольных пробирок. Реакция может считаться поло­жительной лишь в том случае, если в пробирках с контролями жидкость остается совершенно однородной, в КА - слегка мут­ной, в КС - прозрачной.

Для регистрации результатов реакции агглютинации пользу­ются четырехкрестной системой обозначения:

+ + + + полная агглютинация, при которой большой оса­док на дне располагается кучкой или в форме открытого перевер­нутого зонтика, надосадочная жидкость в пробирке совершенно прозрачна,

+ + +почти полная агглютинация, осадок такой же, как

в предыдущем случае, жидкость почти прозрачная,

+ +слабая агглютинация, небольшой осадок, жидкость непрозрачная

+отмечают следы агглютинации, осадок едва заметен, жидкость непрозрачная,

—отрицательная реакция, содержимое пробирок равномерно мутное, без осадка, по виду неотличимо от содержи­мого пробирки КА.

Реакцию агглютинации исполь­зуют для определения антител в сыворотке крови больных, на­пример при брюшном тифе и паратифах (реакция Видаля), бру­целлезе (реакции Райта, Хеддлсона), туляремии и других инфек­ционных болезнях, а также для определения возбудителя, вы­деленного от больного. Эта же реакция применяется для опре­деления групп крови.

Дата добавления: 2015-09-05