Студопедия
Случайная страница | ТОМ-1 | ТОМ-2 | ТОМ-3
АрхитектураБиологияГеографияДругоеИностранные языки
ИнформатикаИсторияКультураЛитератураМатематика
МедицинаМеханикаОбразованиеОхрана трудаПедагогика
ПолитикаПравоПрограммированиеПсихологияРелигия
СоциологияСпортСтроительствоФизикаФилософия
ФинансыХимияЭкологияЭкономикаЭлектроника

Методика: Первый день.

Объектов внешней среды | Исследование воздуха | Санитарно-микробиологическое исследование почвы | Определение количества МАФАнМ | Индикация кишечной палочки. | В 1 г парного мяса в соответствии с Санитарными правилами и нормами, бактерии группы кишечной палочки не допускаются. | В заключении указывают, обнаружены или отсутствуют сальмонеллы в 25 г исследуемого мяса. | Санитарно-микробиологическое исследование мяса кур | Выявление сальмонелл | Выявление золотистого стафилококка |


Читайте также:
  1. Quot;ДЕДУКЦИИ" РАЗДЕЛ ПЕРВЫЙ
  2. Августа . 4-ый день.
  3. Акт первый
  4. Антагонизм, как первый шаг на пути к симбиозу
  5. Бонус «Первый раз» от лица Кристиана.
  6. В первый раз я вкусил настоящей свободы, той свободы, которая возникает, когда ты решаешь раз и навсегда взять свою жизнь и все ее составляющие элементы в собственные руки.
  7. Вера в Судный день.

Засевают водопроводную воду в объеме 333 мл (три объема по 100 мл, три – по 10 мл и три объема по 1 мл). При этом вода в объемах по 100 и 10 мл засевается в колбы и пробирки с 10 и 1 мл концентрированной ГПС, а посев воды в объеме 1 мл – в пробирки с 10 мл среды с нормальной концентрации. Посевы инкубируют в термостате 24 часа при 370С.

Второй день. Учет результатов посева разных объемов воды:

- отсутствие помутнения, образования кислоты и газа в колбах и пробирках после посева воды, свидетельствуют о отсутствии кишечной палочки в исследуемом объеме воды;

- наличие кишечной палочки вызывает помутнение питательной среды, изменение цвета индикатора (красный цвет переходит в желтый) и появление пузырька газа в поплавках. Из подозрительных флаконов и пробирок проводят пересев штрихом на агар Эндо в чашках Петри, таким методом, чтобы появились изолированные колонии. Посевы инкубируют 24 часа при 370С.

Третий день. Учет результатов посева на агарЭндо:

- при отсутствии роста на агаре Эндо или при наличии колоний, не характерных для БГКП, дается отрицательный ответ;

- из колоний, характерных для бактерий БГКП (красных с металлическим оттенком), готовят мазки, окрашивают по Граму, микроскопируют. Изучают культуру по оксидазному тесту. Для этого на фильтровальную бумагу пропитанную раствором нафтола-диэтил-n-фенилендиамина наносят штрихом 2-3 колонии снятые с агара Эндо. Для кишечной палочки характерно: наличие грамотрицательных палочек в мазке и отсутствие изменений в окраске фильтровальной бумаги на оксидазный тест, т.е. кишечная палочка, относится к оксидазоотрицательным бактериям. Наличие в мазках грамотрицательных бактерий, с отрицательной реакцией на оксидазный тест, позволяет дать положительный ответ на наличие БГКП в исследуемом объеме воды. Полученные результаты сравнивают с нормативами на питьевую воду.

При положительном результате на оксидазный тест бумага, пропитанная индикатором, приобретает ярко-синюю окраску (в течение минуты), положительную реакцию дают БГКП, которые не учитываются.

Для установления свежего фекального загрязнения воды посевы культивируют при 430С для дифференциации кишечной палочки хладнокровных, не растущих при такой высокой температуре.

Метод мембранных фильтров

Суть этого метода заключается в концентрировании бактерий из определенного объема на мембранных фильтрах с выращиванием их на поверхности агара Эндо и последующим учетом количества БГКП в 1 л воды.

Первый день. Готовят прибор Зейтца – протирают спиртовым тампоном, обжигают в пламени спиртовки металлические детали (рис.9).

 
 

Рис. 9.Фильтр Зейтца

с приемной колбой.

Готовят мембранные фильтры №3 из нитроцеллюлозы, с диаметром пор 0,7 мкм, которые задерживают на своей поверхности БГКП. Фильтры кипятят 10-15 мин в дистиллированной воде, затем с соблюдением правил асептики фильтр матовой поверхностью вверх кладут на сетку фильтрационного прибора Зейтца. В воронку прибора наливают

исследуемую воду, а в приемной колбе Бунзена создают вакуум при помощи водоструйного насоса. Исследуемая вода фильтруется через мембранный фильтр, бактерии, находившиеся в ней, остаются на поверхности. После окончания фильтрации воды мембранный фильтр матовой стороной вверх переносят на поверхность агара Эндо в чашках Петри (на одной чашке можно разложить четыре фильтра). Чашки ставят в термостат при 370С на сутки. Через поры мембранного фильтра происходит диффузия питательных компонентов среды Эндо, вследствие этого оставшиеся БГКП размножаются и за сутки на поверхности фильтра образуют типичные колонии - красные с металлическим оттенком.

Водопроводная вода засевается (исследуется) в объеме 333 мл, которые последовательно пропускают через четыре фильтра по 200, 100, 30 и 3 мл воды.

Второй день. Учитывают наличие или отсутствие колоний на поверхности фильтров, находящихся на агаре Эндо в чашках Петри:

- отсутствие колоний на поверхности фильтра или наличие колоний не характерных для БГКП, позволяет дать отрицательный ответ на присутствие кишечной палочки в исследуемом объеме воды;

- при наличии на фильтре колоний, характерных для БГКП, красных с металлическим блеском, исследование продолжают. Для этого готовят препараты из подозрительных колоний, окрашивают по Граму, микроскопируют. При обнаружении грамотрицательных палочек, ставят оксидазную пробу (см. 187 стр.) – кишечная палочка относится к оксидазоотрицательным. При отрицательном результате оксидазного теста бумага на месте нанесения бактериальной культуры цвет не изменяет, следует учесть, что кишечная палочка относится к оксидазоотрицательным бактериям.

Результат выражают в виде коли-индекса, определяемого суммированием числа колоний кишечных палочек, выросших на поверхности всех мембранных фильтров из всех проб воды, и пересчета этого количества на 1000 мл воды. Зная показатель коли-титра, можно определить коли-индекс: для перевода коли-титра в коли-индекс 1000 делят на показатель коли-титра, а для перевода коли-индекса в коли-титр 1000 делят на число, выражающее коли-индекс.

Например, при исследовании пробы воды профильтровано 3 объема по 100 мл. На первом фильтре выросло 3, на втором фильтре выросло всего 2 колонии, на третьем – 10 колоний, т.е. в общей сложности на трех фильтрах выросло 15 колоний.

Коли-титр этой воды будет равен: 300 мл: 15 = 20 мл, т.е. 20 мл это наименьший объем воды, в котором находится одна кишечная палочка.

Теперь зная коли-титр мы определяем коли-индекс по формуле:

 

 

1000 1000

Коли-индекс этой воды = ------------- = --------- = 50

коли-титр 20

 

1000 1000

Коли-титр этой воды = --------------- = -------- = 20

коли-индекс 50

 

Таким образом, коли- индекс исследуемой воды равен 50, т.е. в 1000 мл воды находится 50 кишечных палочек.

Требования к санитарно-микробиологическому состоянию воды представлены в таблице 7.

Таблица 7

Микробиологические нормативы санитарного состояния воды

Объект контроля   Количество МАФАнМ, КОЕ, не более Коли-титр не менее Коли-индекс, не более Периодичность контроля
Вода водопроводная 100 в 1 мл     1 раз в месяц
Вода открытых водоемов 1000 в мл     -

Из таблицы видно, что для питьевой воды установлены следующие бактериологические нормативы:

- количество МАФАнМ в 1 мл – не более 100;

- коли-титр - не менее 333;

- коли-индекс не должен превышать 3 кишечных палочек в 1000 мл.

Вода открытых водоемов считается доброкачественной, если количество МАФАнМ – не более 1000, коли-титр – не менее 111, коли-индекс – не более 9.

Наличие в воде патогенных бактерий устанавливают путем посева на дифференциально-диагностические и элективные питательные среды с последующей их идентификацией методами, принятыми в микробиологии.


Дата добавления: 2015-07-16; просмотров: 58 | Нарушение авторских прав


<== предыдущая страница | следующая страница ==>
Санитарно-бактериологическое исследование воды| Санитарно-микробиологическое исследование мяса животных

mybiblioteka.su - 2015-2024 год. (0.008 сек.)