Реакция иммунофлюоресценции (РИФ)

Принцип реакции заключается в том, что меченная флюорохромом иммунная противовидовая сыворотка соединяется со специфическим ком­плексом антиген—антитело, обуславливая его свечение при исследова­нии препарата в сине-фиолетовых лучах.

При проведении реакции пользуются люминесцентным микроскопом ДРЩ-250 с иммерсионной системой.

В первой фазе реакции после добавления взвеси бледных трепонем к исследуемой сыворотке крови больного образуется комплекс антиген-— антитело.

Во второй фазе происходит соединение меченной флюорохро-мом иммунной сыворотки с образовавшимся комплексом, антиген — антитело.

Методика. В сухую пробирку берут 5 мл крови из вепы больного и пнактивируют в термостате при температуре 56 "С в течение 30 мин. Из антигена {трепонемы кролика, аналогичные получаемым при РИБТ, см. № 123) готовят препараты на обезжиренных предметных стеклах. Для этого на одной стороне стекла карандашом рисуют окружность диаметром 1 см, а на другую наносит равномерно распределенную взвесь бледных трепонем, занимающую всю окружность. После высушивания на воздухе препарат в течение 10 мин фиксируют химически чистым, аце­тоном, нумеруют и затем готовят испытуемые сыворотки.

С целью получения различных разведений сыворотки Сольного бе­рут три ряда пробирок: 1-й — цельная сыворотка, 2-й — 0,45 мл изото­пического раствора натрия хлорида (9 капель), 3-й ряд —0,95 мл изо­тонического раствора натрия хлорида (19 капель).

Из каждой пробирки 1-го ряда берут 0,05 мл сыворотки (1 капля) и переносят, хорошо перемешивая, в пробирки 2-го ряда, получая разведение 1: 10, из каждой пробирки 2-го ряда переносят одну кап­лю (0,05 мл) п 3-й ряд, что соответствует разведению 1: 200.

На предметные стекла с высушенным антигеном наносят по 1 кап­ле сыворотки в разведениях 1: 10 к 1:200, препараты помещают во влажную камеру, которую закрывают крышкой и ставят в термостат на 30 мин при температуре 37 "С (1-я фаза реакции). Затем стекла извле­кают из термостата, 2 раза осторожно промывают изотоническим ра­створом натрия хлорида, помещают на 10 мин в изотонический раствор натрия хлорида и высушивают. На стекла наносят по 1 капле флюорес­цирующей сыворотки, помещают их на 30 мни во влажную камеру, сно­ва 2 раза промывают изотоническим раствором натрия хлорида (2-я фаза реакции).

К готовому препарату добавляют I каплю забуферного глицерина, накрывают покровным стеклом, на которое наносят 1 каплю иммерси­онного нелюиииссцснтного масла (диметилфхалат).

Результаты реакции учитывают по степени свечения бледных тре­понем. При отсутствии в испытуемой сыпоротке антител свечения не

блюдается. Яркость свечения обозначают плюсами. При интенсивном свечении на темной поле видны ярко светящиеся бледные трепонемы желто-зеленого цвета (-|—|—1-+); если бледные трепонемы светятся не ярко, результат обозначают ++~Н при слабом свечении ++; при не­значительном свечении {+) реакцию считают отрицательной; ++++, +-Ы-, ++ обозначаются реакции положительные, различной сте­пени интенсивности.

РИФ 10 применяют при серодиагностике первичного серонегатив-ного сифилиса, когда все другие реакции (Вассермана, осадочные, РИБТ) отрицательные; РИФ 200—для серодиагностики всех других форм си­филиса, включая и латентную.

Дата добавления: 2015-07-10