Студопедия
Случайная страница | ТОМ-1 | ТОМ-2 | ТОМ-3
АвтомобилиАстрономияБиологияГеографияДом и садДругие языкиДругоеИнформатика
ИсторияКультураЛитератураЛогикаМатематикаМедицинаМеталлургияМеханика
ОбразованиеОхрана трудаПедагогикаПолитикаПравоПсихологияРелигияРиторика
СоциологияСпортСтроительствоТехнологияТуризмФизикаФилософияФинансы
ХимияЧерчениеЭкологияЭкономикаЭлектроника

Микробиологическая диагностика сибирской язвы

Читайте также:
  1. IV. Лабораторная диагностика ВИЧ-инфекции
  2. Амиотрофический боковой склероз. Этиология. Патогенез. Классификация. Клиника. Диагностика. Лечение. Прогноз.
  3. Вирусологическая диагностика аренавирусных инфекций
  4. Вирусологическая диагностика герпеса
  5. Вирусологическая диагностика натуральной оспы
  6. Вирусологическая диагностика ОРВИ
  7. Вирусологическая диагностика острых респираторных вирусных инфекций и гриппа

Основным источником инфекции являются больные травоядные животные, от которых человек заражается при непосредственном контакте, алиментарным, аэрогенным или трансмиссивным путями. Чаще всего возникает кожная форма инфекции с образованием характерного сибиреязвенного карбункула в виде уголька (anthrax), реже – кишечная, легочная, септическая формы. Методы микробиологической диагностики сибирской язвы отражены в схеме 6.

Схема 6. Микробиологическая диагностика сибирской язвы

 
 
Материал: отделяемое карбункула или язвы, испражнения, моча, мокрота, кровь  

 


Серологический метод Постановка РНГА, РА с целью определения антител в крови больного

 

 
 
Аллергодиагностика Постановка внутрикожной аллергической пробы с тулярином. Учет через 24-48 часов.  


       
 
Выявление сибиреязвенного антигена Постановка реакции термопреципитации Асколи с преципитирующей противосибириязвенной сывороткой
   
Генодиагностика. ПЦР
 


Микроскопический метод. Мазки из исследуемого материала окрашивают по Граму, Романовскому-Гимзе, Ребитеру (капсула), а также люминесцирующей сибиреязвенной сывороткой. Обнаружение в препаратах окруженных капсулой крупных грамположительных ба­цилл в виде цепочек дает возмож­ность поставить предварительный диагноз сибирской язвы (рис.11 а). В качестве экспресс-метода диагностики применяется РИФ, с помощью которой выявляют характерные сибиреязвенные бациллы в виде палочек со светящимся жел­то-зеленым ободком (рис. 11 б.).

Бактериологический метод -посев исследуемого материала на МПА, кровяной агар в чашках Петри или PLET-arap с полимиксином В, лизоцимом, этилен-диаминотетраацетатом (ЭДТА) и ацетатом таллия. Контаминированный мате­риал из внешней среды, от животных, из старых трупов предварительно прогревают при 63 °С в течение 15 мин с целью уничтожения вегетативных форм микроорга­низмов. Посевы помещают в термостат на сутки. Через 20 —24 ч инкубации посевов при 370 С на МПА обнаруживают характерные шероховатые колонии в виде «головы меду­зы», края которых при малом увеличении микроскопа имеют вид вьющихся локонов или «львиной гривы» - рис. 12. В бульоне характерен при­донный рост, напоминающий комочек ваты, при этом среда остается про­зрачной. Из осадка делают мазок и препарат висячей капли. В мазке обнаруживают бескапсульные грамположительные стрептобациллы (рас­положение в виде длинных цепочек в виде «бамбуковой палки»). В отличие от других почвенных бацилл возбудитель сибирской язвы неподвижен. Для выде­ления чистой культуры типичные колонии пересевают на ско­шенный МПА.

Капсулообразование можно выявить путем биопробы или при посевах в бульон Хоттингера, на специальную среду, содержащую раствор Хенкса и 40 % стерильной сыворотки крупного рогатого скота, МПА с 0,7 % бикарбоната натрия, среду Буза (3%голодный агар с 15% дефибринированной крови барана), а также в дефибринированную лошадиную кровь. Посевы выращивают в течение 18-24 часов при температуре 370 С в атмосфере 5-7% СО2.

А б

 

Рис. 11. Возбудитель сибирской язвы(Bacillus anthracis). а - окраска по Граму, б – РИФ. х630

Рис. 12. Колония Bacillus anthracis. х56

 

Идентификацию выделен­ной культуры Bacillus anthracis (3-й день исследования) и ее дифференциацию от сходных непатогенных бацилл проводят путем посева уколом в желатину (разжижение в виде елочки, перевернутой вершиной вниз), изучения биохимических свойств, фаголизабельности и заражения животных. Определяют также чувствительность культуры к ан­тибиотикам.

Одним из характерных признаков возбудителя сибирской язвы является тест «жемчужного ожерелья».На поверхность МПА в чашке Петри с 0,5 и 0,05 ЕД/мл пенициллина засевают 3-ча­совую бульонную культуру выделенного микроорганизма, через 3 ч инкубирования при 370 С готовят мазки, в которых при микроскопии находят «жемчужные ожерелья» в виде округлившихся стрептобацилл сибирской язвы. Почвенные ба­циллы сохраняют форму палочек, расположенных цепочками.

Биологические свойства возбудителя сибирской язвы и сходных с ним бацилл отражены в табл. 7.

Наличие сибиреязвенного антигенав разложившемся трупе жи­вотного, коже (свежей, сухой, выделанной) и изделиях из нее, шкурках, мехе, шерсти определяют с помощью реакциитермо­преципитациипо Асколи.Исследуемый материал измельчают, за­ливают 10 —20-кратным объемом физиологического раствора, кипятят в течение 10-45 мин., после чего фильтруют. Полученный экстракт осторожно наслаивают на преципитирующую сибиреязвенную сыворотку в узкой преципитационной пробирке. На границе экстракта и преципитирующей сыворотки в течение 1- 5 мин в случае положительной реакции появляется кольцо белого цвета (преципитат). Контроли включают постановку реакций с заведомо положительной и отрицательной сывороткой, нормальной сывороткой и т.д.

Биопроба. Исследуемымматериалом подкожно заражают двух белых мышей., которые погибают через 24-48 ч после заражения. В мазках из внутренних органов и крови обнаружива­ют типичные капсульные бациллы. Проводится бактериологическое исследование трупа белой мыши с целью выделения чистой культуры сибиреязвенных бацилл.

Таблица 7. Дифференциально-диагностические признаки сибиреязвенной и других бацилл

 

Признак Вид микроорганизмов
  Bacillus anthracis Bacillus cereus Bacillus mycoides Bacillus thuringiensis Bacillus subtilis Bacillus Megaterium
Капсула + - - - - -
Подвижность - + - + + +
Гемолиз - + - + - +
Рост в анаэробных условиях + + + + - -
Лецитиназа + + + + - -
Аргининдегидролаза - V V + - -
Нитpaтpeдyктaзa + + + + + -
Патогенность для мышей + - - - - -
Ферментация до кислоты:            
глицерина - V + + + +
маннита - - - - + +
салицина - V + + + +

 

Обозначения: «-«- отрицательная; «+» - положительная; «V» - вариабельная реакции.

 

Серологический метод выполняетсяв тех случаях, когда не удается обнаружить возбудителя в материале. Для определения антител в сыворотке крови больного использу­ют реакции латекс-агглютинации и РНГА с протективным сибиреязвенным антигеном.

Аллергический метод – постановка внутрикожной аллергической пробы с аллергеном сибиреязвенной бациллы - антраксином. Результаты учитывают через 24 ч. Пробу считают положительной при наличии гиперемии и инфильтрата диаметром более 15 мм.


Дата добавления: 2015-09-03; просмотров: 108 | Нарушение авторских прав


Читайте в этой же книге: Список сокращений | Методы обнаружения возбудителя инфекции в материале от больного | Биохимические и молекулярно-биологические методы диа­гностики | Исследований | Микробиологическая диагностика стафилококковых инфекций | Микробиологическая диагностика стрептококковых инфекций. | Микробиологическая диагностика анаэробной инфекции. | Микробиологическая диагностика столбняка. | Микробиологическая диагностика чумы. | Микробиологическая диагностика бруцеллеза |
<== предыдущая страница | следующая страница ==>
Микробиологическая диагностика туляремии| Самостоятельная работа студентов

mybiblioteka.su - 2015-2024 год. (0.007 сек.)