Читайте также:
|
|
ЧАСТЬ I
ОБЩАЯ МИКРОБИОЛОГИЯ И ИММУНОЛОГИЯ
ЗАНЯТИЕ 1
Дата________________
Тема: ВВЕДЕНИЕ В МИКРОБИОЛОГИЧЕСКУЮ ЛАБОРАТОРИЮ. МИКРОСКОПИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
План занятия
1.Знакомство с рабочим местом и режимом работы в микробиологической лаборатории.
2.Знакомство с иммерсионным микроскопом и правилами работы с ним.
3.Упражнение в микроскопии на готовых препаратах с применением сухих и иммерсионной систем.
4.Правила обращения с культурами микробов.
5.Приготовление препарата "раздавленная капля".
6.Приготовление и окраска препарата тушью по Бурри (негативный способ окраски).
7.Знакомство со специальными методами микроскопии (люминесцентная микроскопия).
Методические указания
§ I. а) Оборудование рабочего места.
На рабочем столе должно быть все необходимое для работы: микроскоп, иммерсионное масло, бактериологическая петля, спиртовка, набор красок, промывалка и ванна для промывки препаратов, предметные стекла и салфетки для протирания их, штатив для пробирок с культурами, пинцет, фильтровальная бумага для высушивания препаратов и банка для отработанных стекол.
Из личных вещей студента на рабочем месте допускается иметь только рабочую тетрадь, в которой делают записи и зарисовки. Ничего лишнего (в том числе учебников и других книг) на рабочем столе не должно быть.
б) Режим работы в бактериологической лаборатории.
Работа с болезнетворными микробами требует обязательного соблюдения ряда правил личной и общественной профилактики. Каждый студент обязан работать в халате, на голову надевать шапочку или косынку, не курить и не принимать пищу в лаборатории, избегать суеты. По окончании работы необходимо вымыть руки с мылом.
§ 2. Важнейшей характеристикой каждого объектива микроскопа является его разрешающаяся способность. Разрешающей способностью называется расстояние между двумя точками, при котором они еще видны раздельно (т.е. не сливаются в одну). Разрешающая способность объектива ограничивается такими недостатками оптической системы, как сферическая и хроматическая аберрации,дифракция и т.д. Если первые два явления устранимы, то явление дифракции имеет место в любой оптической системе. Оно ограничивает разрешающую способность оптических систем. Разрешающая способность объектива с учетом явлений дифракции описывается следующей формулой:
А = 0,61 ,
где А - минимальное расстояние между двумя точками объекта (разрешающая способность);
n - показатель преломления среды между препаратом и фронтальной линзой объектива (в случае масляной иммерсии n=1,51);
α- угол между оптической осью объектива и наиболее крайним лучом, попадающим в объектив из центра препарата;
λ- длина световой волны;
0,61 - коэффициент, который учитывает геометрические факторы при вычислении освещенности первого дифракционного максимума от круглого отверстия.
Величина n·Sinα постоянна для каждого объектива и называется числовой, или нумерической, апертурой. Она выгравирована на оправе объектива. В монобромнафталиновых иммерсионных объективах нумерическая апертура может варьировать в пределах от 1,25 до 1,60. При наличии воздуха между фронтальной линзой и покровным стеклом нумерическая апертура не превышает 0,95.
Из приведенной выше формулы видно, что разрешающая способность объектива прямо пропорциональная его числовой апертуре и обратно пропорциональна длине волны света, используемого при микроскопии. При микроскопии в видимом свете с длиной волны порядка 0,55 микрона и иммерсионным объективом с максимальной нумерической апертурой 1,60 разрешающая способность равна:
А = 0,61
Величина угла, при котором глаз способен различать раздельно две точки, называется углом резкого зрения. Для получения на сетчатке раздельного изображения двух точек световые лучи должны попасть в глаз под углом зрения, который стягивает дугу от 2 до 4 минут.
Изображение структур, разрешенных объективом, может быть увеличено окуляром лишь настолько, чтобы оно просматривалось под углом, стягивающим дугу величиной от 2 до 4 минут. Это - полезное увеличение микроскопа. Полезное увеличение микроскопа не может превышать числовую апертуру более чем в 1000 раз. Поэтому максимальное полезное увеличение для микроскопов, имеющих иммерсионные объективы с апертурой 1,4-1,6, составляет 1400-1600. Применение в таких микроскопах более сильных окуляров никаких дополнительных деталей к структуре препарата, разрешаемой объективом, не выявляет.
Для полного использования разрешающей способности иммерсионного объектива необходимо выполнять следующие основные правила:
1)Конденсор осветительного аппарата должен быть поднят до отказа (до уровня предметного столика).
2)Диафрагма конденсора должна быть полностью открыта.
3)Во всех без исключения случаях работа ведется с плоским зеркалом, так как конденсор рассчитан на работу с параллельными пучками света.
Наряду с увеличением и нумерической апертурой одной из важных характеристик объектива является его свободное рабочее расстояние, т.е. расстояние между верхней поверхностью препарата и нижней поверхностью фронтальной линзы объектива при наведенном на фокус объективе. Эти расстояния следующие:
для объектива с увеличением х8 - 8,5 мм;
для объектива с увеличением 40х - 0,4 мм;
для объектива с увеличением 90х - 0,2 мм.
Знание этих расстояний необходимо для того, чтобы быстро сфокусировать микроскоп на препарате. Кроме того, чтобы правильно и быстро установить освещение, необходимо, чтобы объектив находился от препарата на свободном рабочем расстоянии.
Дата добавления: 2015-12-07; просмотров: 109 | Нарушение авторских прав